慢性氟中毒鸡精子质量测定研究

为探明慢性氟中毒对鸡精子质量的影响,本研究采用饮水染氟方法,人工复制公鸡慢性氟中毒模型,在染氟第三十、五十和七十天分别进行人工采精,测定精子密度、精子活力和精子畸形率。结果表明,慢性氟中毒可导致鸡精子密度和精子活力降低明显,精子畸形率明显升高。对照组精子密度、精子活力和精子畸形率在不同试验时间没有明显差异。而试验组精子密度第五十天和第七十天明显低于第三十天,但第五十天与第七十天无统计学差异;精子活力第七十天也明显低于第三十天,但第三十天与第五十天、第五十天与第七十天之间无统计学差异;试验组精子畸形率不同测定时间都无统计学差异。说明鸡慢性氟中毒呈现一种特定的时间-效应关系,而且精子畸形率可以相对独立的表现鸡对氟的慢性毒性。     

PI/Rh123双染和流式细胞术作用下不同盐度对葡萄牙牡蛎精子质量及受精的影响

以葡萄牙牡蛎精子为对象,采用碘化丙啶(PI)/罗丹明123(Rh123)双染与流式细胞术(FCM),研究了不同盐度胁迫(10、15、20、25、30、35)对精子质量的影响,并对受胁迫精子进行授精实验。结果显示,随着盐度升高,精子的存活率、运动时间和活力先升高后降低;葡萄牙牡蛎精子的适宜盐度为20～35,活力较高的盐度范围为25～35;通过双染和FCM检测了精子质膜完整性和线粒体活性,发现盐度胁迫先对精子质膜造成损伤,后对线粒体活性造成伤害;低盐胁迫(10、15)对精子损伤严重,胁迫15 min时质膜受损比例高达67.26%±2.35%。人工授精结果显示,低盐胁迫下精子受精率和卵裂率显著降低,且卵裂阶段出现畸形及分裂停止等现象,表明精子质量不仅严重影响了受精过程,还对卵裂造成一定影响。本实验不仅探究了PI/Rh123双染和FCM检测牡蛎精子质膜完整性和线粒体活性的可行性,还结合显微观察全面评价了精子质量,为牡蛎精子质量的研究提供了理论基础。     

阳离子、葡萄糖及渗透压对丁(鱼岁)精子活力的影响

利用KCl、NaCl、CaCl2和葡萄糖配制成不同渗透压的溶液,丁(鱼岁)精子在453.0 kPa KCl溶液、226.5 kPa NaCl溶液和葡萄糖溶液中的活力最强,寿命最长;566.3 kPa已完全抑制精子在这3种溶液中的活动.葡萄糖能有效延长精子寿命,表明丁(鱼岁)精子具有利用外源性葡萄糖的能力.56.7 kPa CaCl2已构成对精子的抑制作用,并引起精子聚集,而且随Ca2+浓度增高,对精子的抑制作用和聚集程度更严重.     

阳离子、葡萄糖及渗透压对丁精子活力的影响

利用KCl、NaCl、CaCl2和葡萄糖配制成不同渗透压的溶液,丁鱼岁精子在453 0kPaKCl溶液、226 5kPaNaCl溶液和葡萄糖溶液中的活力最强,寿命最长;566 3kPa已完全抑制精子在这3种溶液中的活动。葡萄糖能有效延长精子寿命,表明丁鱼岁精子具有利用外源性葡萄糖的能力。56 7kPaCaCl2已构成对精子的抑制作用,并引起精子聚集,而且随Ca2+浓度增高,对精子的抑制作用和聚集程度更严重。     

鱼类精子质量评价研究进展

在鱼类人工繁育中,研究者主要关心的是卵子质量,长期以来对精子质量未引起足够重视.而精子质量同样会影响繁育效果的重要因素.鱼类精子质量的评价指标有多种,如精子活力、运动时间、密度、形态、受精率和生理功能等.其中最传统的评价指标是精子活力,其测定方便,能较准确地预测受精率.将精子运动时间和活力综合考虑可更好地反映精子的运动能力.而精子受精率则是精子质量的直接反映,但会受到卵质等因素的影响.质膜完整性、线粒体功能、染色质结构完整性等可体现精子的质量,但测定方法较繁琐.近年来,鱼类精子质量检测技术迅速发展,计算机辅助精子分析(CASA)、流式细胞术(FCM)分析、低渗肿胀(HOS)、单细胞凝胶单泳(SCGE)等技术的建立,使得测定指标更多样、客观、准确.本文逐一介绍了评价精子质量的各种指标,并对各指标的测定方法、测定原理、国内外研究情况进行详细叙述,旨为我国鱼类精子质量评价研究提供背景资料.     

近江蛏精子超微形态结构观察及与缢蛏精子的比较

利用扫描电镜和透射电镜分别观察了近江蛏和缢蛏成熟精子的超微形态结构。发现近江蛏精子与缢蛏精子在超微形态结构上差异很大。近江蛏精子为典型的原生型,成熟精子由头部、中段和尾部组成,头部包括顶体和细胞核。近江蛏精子与缢蛏精子顶体均为保龄球状,但近江蛏精子顶体全长比缢蛏短。近江蛏精子细胞核略扁圆形,外缘具8～9个圆弧形凸起；缢蛏精子细胞核则呈圆球状。近江蛏精子中段由线粒体和中心粒复合体构成,线粒体一般5个,个别4～6个；缢蛏线粒体5个或6个。近江蛏精子尾部为细长的鞭毛,轴丝为“9 2”结构,与缢蛏的相同。从近江蛏与缢蛏的精子形态差异看,两者应属于种间差异。     

神农架多鳞铲颌鱼精子活力观察

为研究多鳞铲颌鱼精子的生物学特性,了解精子活力的持续时间和精子的寿命,为人工繁殖技术提供理论依据,观察了神农架多鳞铲颌鱼精子在河水、0～1.0 %氯化钠溶液中的活力。结果发现,精子在河水中活力较高,平均快速运动时间为33.2 s,平均寿命为69.5 s。精子活动的最适氯化钠质量分数为0.5 %,在此质量分数情况下,精子的快速运动时间和寿命均最长,分别为50.6 s、109.7 s。     

鸭绿沙塘鳢精子生理学特征

为探究鸭绿沙塘鳢(Odontobutis yaluensis)精子生理学特征, 提高精子活力, 测定了其精液浓度、精子密度、 pH 和精子活力, 以精子激活率(activation rate, AR)、快速运动时间(fast movement time, FT)以及精子寿命(life time, LT)作为评价精子活力的指标, 检测了水温、pH、离子(NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂)、非离子(葡萄糖、Tris、甘油)、 碱度(NaHCO₃)共 10 种单因子条件下的精子活力, 并在此基础上进行 17 组复合因子精子激活液的筛选。结果表明, 鸭绿沙塘鳢精巢前段精子活力、精子密度、精液浓度均高于中后段, 精巢整体精子密度(1.83±0.03)×10⁹ 个/mL, 精液浓度 23.10%, pH 6.9±0.1。单因子精子激活液中, 鸭绿沙塘鳢在水温 20 ℃、pH 6.0、NaCl 68 mmo/L、 KCl 54 mmol/L、CaCl₂ 27 mmol/L、葡萄糖 28 mmol/L、甘油 65 mmol/L 条件下精子 AR, FT 和 LT 均最高, 在 MgCl₂ 11 mmol/L、Tris 4 mmol/L 激活液中精子激活率最高。复合因子精子激活液中, 精子在 KCl 40 mmol/L、甘油 33 mmol/L、Tris 4 mmol/L 条件下 AR, FT 和 LT 均最高, 精子活力最高。综上所述, 在进行鸭绿沙塘鳢人工授精时, 可直接使用精巢前段(生精部), 同时应用复合因子精子激活液(KCl 40 mmol/L、甘油 33 mmol/L、Tris 4 mmol/L)提高精子活力。     

慢性氟中毒鸡精子质量测定研究

为探明慢性氟中毒对鸡精子质量的影响，本研究采用饮水染氟方法．人工复制公鸡慢性氟中毒模型．在染氟第三十、五十和七十天分别进行人工采精．测定精子密度、精子活力和精子畸形率。结果表明．慢性氟中毒可导致鸡精子密度和精子活力降低明显，精子畸形率明显升高。对照组精子密度、精子活力和精子畸形率在不同试验时间没有明显差异。而试验组精子密度第五十天和第七十天明显低于第三十天，但第五十天与第七十天无统计学差异；精子活力第七十天也明显低于第三十天，但第三十天与第五十天、第五十天与第七十天之间无统计学差异；试验组精子畸形率不同测定时间都无统计学差异。说明鸡慢性氟中毒呈现一种特定的时间-效应关系．而且精子畸形率可以相对独立的表现鸡对氟的慢性毒性。     

低渗溶液浓度对黄颡鱼精子活力和受精率的影响

为提高黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)人工授精的稳定性,分别用卵子和精子同步激活法以及预激活精子法,在6个梯度浓度(0%～0.5%)范围的低渗溶液中进行人工授精试验,比较精子活力、受精率和孵化率。结果显示:低渗溶液浓度与精子活力、精子激活率和受精率密切相关,在相同浓度的低渗溶液组中采用预激活精子法的受精率显著高于卵子和精子同步激活法(P<0.05),受精率相对应提高了7.7%～14.5%;低渗溶液的浓度和人工授精方式对孵化率无显著影响。结果表明在浓度0.3%的低渗溶液中采用预激活精子法的效果最好。     

温度、光照和保存液对大鲵成熟精子存活状况的影响

本文对人工催产得到的大鲵精子,在不同温度、光照和保存液中的存活状况进行了观察研究。结果表明:15℃条件下体外保存大鲵精子原液,有光照时精子存活5h,无光照时存活10h;相同温度下精子原液经0.9%生理盐水、鱼用任氏液、蒸馏水、山泉水稀释后,精子在鱼用任氏液中存活时间最长,但与原液中保存精子的存活时间相比较有明显的缩短;通过对大鲵精子活力级别的判定,认为大鲵精子在水温20～25℃时受精能力最强。     

抗冻剂对日本鳗鲡精子活力及运动时间的影响

利用精子稀释液(0.5%氯化钠+0.25%氯化钾+0.25%葡萄糖)分别配制4%、8%、12%、16%、20%、24%的二甲亚砜(DMSO)、甘油(Glycerol)、1,2-丙二醇(1,2-Propanediol)、乙二醇(Ethyleneglycol)四种抗冻剂,对日本鳗鲡精子进行激活处理,观察记录精子在不同浓度抗冻剂中的活力和5种运动(激烈运动、快速运动、慢速运动、摆动、死亡)时间。结果表明:4%~24%的四种抗冻剂都可以激活日本鳗鲡精子,其中二甲亚砜浓度为12%时,精子活力最高,平均可达到78.3%;甘油浓度为8%时,精子活力最高,平均可达到72.8%;12%的1,2-丙二醇和乙二醇激活精子后,精子活力都可以达到最高,分别是47.6%和57.8%。日本鳗鲡精子在8%的二甲亚砜、8%的甘油、8%的1,2-丙二醇和8%的乙二醇中,激烈运动时间均为最长,分别为11.8 s、11.1 s、6.0 s和2.9 s;用8%的甘油、16%的二甲亚砜、16%的1,2-丙二醇和12%的乙二醇激活日本鳗鲡精子后,精子存活时间均最长,分别达到154.6 s、45 s、20 s和34 s。与其它几种抗冻剂相比,8%的甘油能显著延长日本鳗鲡精子的寿命。四种抗冻剂对日本鳗鲡精子都有一定的毒性作用,处理后精子的活力和寿命均降低。     

高白鲑精子活力观察

精子活力泛指精子群体的运动状况,包括精子的激活与抑制、运动精子占精子总数的比例（激活率）、精子运动激烈程度及运动时间等,反映了精子的质量。高白鲑属鲑形目、鲑科、白鲑属,2003年由黑龙江省水产技术推广总站从新疆赛里木湖引进,投放到五大连池山口水库,     

盐度、温度和pH对2种篮子鱼精子活性的影响

选取健康成熟的雄性长鳍篮子鱼(Siganus canaliculatus)和点篮子鱼(Siganus guttatus)亲鱼进行人工采精,设定不同的盐度、温度和p H梯度,观察其对精子活力及激烈运动时间的影响。结果表明:随盐度、温度和p H的升高,2种篮子鱼精子的活力都先增强后减弱;随盐度和p H的升高精子激烈运动时间均先延长后缩短,但随温度的升高,2种篮子鱼精子激烈运动时间都呈现下降的趋势。2种篮子鱼精子的最适盐度范围均为30~35,精子活力和激烈运动都较高。长鳍篮子鱼精子最适温度范围为20~25℃,点篮子鱼精子最适温度范围为25~30℃,在25℃时,2种篮子鱼精子的活力都最高,分别为(90±2.67)%和(95±1.5)%。在p H为7~8范围内,2种篮子鱼精子活力较高,激烈运动时间也相对较长;p H为8时,长鳍篮子鱼和点篮子鱼精子活力都最高,分别为(95±4.67)%和(95±3.67)%,精子激烈运动时间也最长,分别为(44±3.89)s和(34±3.67)s。比较而言,长鳍篮子鱼精子对盐度、温度和p H的耐受性均高于点篮子鱼精子。     

环境因子对大黄鱼精子活力的影响

通过观测精子的激活率、活动时间和寿命研究了几种环境因子的变化对养殖大黄鱼精子活力的影响。试验结果表明:精子平均密度为(1.17±0.09)×1010.ml-1,盐度对大黄鱼精子活力影响较大。当海水盐度适宜(19.61~24.87)时,精子的激活率≥90%,活动时间≥9.65 min,寿命≥13.50 min;在pH=4.0~10.0的海水中,精子都能被正常激活(≥70%),适宜的pH值为7.5~8.0;不同浓度的葡萄糖、NaCl和KCl溶液对精子活力的影响不同,不同浓度的EDTA-2Na溶液均不能激活精子;无Ca2 、Mg2 或HCO3-的人工海水对精子的激活率均高达90%,但精子的活动时间却有较大幅度的缩减。     

云纹石斑鱼精子冷冻保存

以云纹石斑鱼精液为实验材料,对精子稀释液、抗冻剂种类和适宜浓度、冷冻保存液进行了筛选。结果表明,利用9g/L NaCl、10g/L KHCO3和10%小牛血清配制而成的稀释液EM1-2适宜于云纹石斑鱼精子冷冻保存,以2ml冷冻管为精子容器,在60L液氮生物保存罐中冷冻保存精子,冷冻解冻精子活力可达56.67%±5.77%,要优于TS-2、ES1-3和其他EM系列稀释液冷冻保存精子活力。利用EM1-2为基础液对抗冻保护剂进行筛选,结果显示,10%~20%的二甲基亚砜(DMSO)和1-2-丙二醇(PG)冷冻保存后精子活力无显著差异(P0.05),其中15%的DMSO和10%PG冷冻保存精子效果最优,解冻后精子活力分别可达54.52%±7.81%和57.24%±3.69%。利用冷冻保存1年的精液与云纹石斑鱼卵进行受精,受精率和孵化率均达到80%以上,与新鲜精子无显著性差异(P0.05)。本研究表明,利用EM1-2配制15%的DMSO或10%的PG可用于冷冻保存云纹石斑鱼精液。在此基础上,建立了精子冷冻库,保存精子130ml,为人工繁育和杂交育种提供了丰富的精子源。     

云纹石斑鱼精子冷冻保存

以云纹石斑鱼精液为实验材料,对精子稀释液、抗冻剂种类和适宜浓度、冷冻保存液进行了筛选。结果表明,利用9g/L NaCl、10g/L KHCO3和10%小牛血清配制而成的稀释液EM1-2适宜于云纹石斑鱼精子冷冻保存,以2ml冷冻管为精子容器,在60L液氮生物保存罐中冷冻保存精子,冷冻解冻精子活力可达56.67%±5.77%,要优于TS-2、ES1-3和其他EM系列稀释液冷冻保存精子活力。利用EM1-2为基础液对抗冻保护剂进行筛选,结果显示,10%~20%的二甲基亚砜(DMSO)和1-2-丙二醇(PG)冷冻保存后精子活力无显著差异(P0.05),其中15%的DMSO和10%PG冷冻保存精子效果最优,解冻后精子活力分别可达54.52%±7.81%和57.24%±3.69%。利用冷冻保存1年的精液与云纹石斑鱼卵进行受精,受精率和孵化率均达到80%以上,与新鲜精子无显著性差异(P0.05)。本研究表明,利用EM1-2配制15%的DMSO或10%的PG可用于冷冻保存云纹石斑鱼精液。在此基础上,建立了精子冷冻库,保存精子130ml,为人工繁育和杂交育种提供了丰富的精子源。     

不同倍性长牡蛎闭壳肌和精子的组织学和超微结构观察

以二倍体、三倍体、四倍体长牡蛎(Crassostrea gigas)闭壳肌和精子为研究对象, 采用石蜡组织切片、透射电镜和扫描电镜方法, 比较了 3 种倍性长牡蛎闭壳肌和精子的组织学特性及超微结构的差异。研究结果显示, 二、三、 四倍体闭壳肌组织的肌纤维都包含粗肌丝、细肌丝、肌膜、肌束膜、肌内膜、线粒体、囊泡、小管、细胞核、肌浆网等结构, 但三者的形态及超微结构不同, 其中三倍体闭壳肌线粒体直径、肌纤维直径、粗肌丝密度显著大于二倍体和四倍体, 肌纤维密度显著小于二倍体和四倍体。不同倍性精子的扫描电镜和透射电镜结果显示, 二、三、四倍体长牡蛎精子在组成结构上相似, 分别由头部、中段和尾部构成, 但不同倍性精子中各结构大小和线粒体数目不同。在长牡蛎精子头部长度、宽度, 顶体高度、宽度, 线粒体长度的测量分析中, 四倍体精子的头部、顶体以及线粒体显著大于二、三倍体。三倍体精子的头部和顶体显著大于二倍体, 但三倍体精子的线粒体大小与二倍体相比无显著差异。此外, 二、三倍体精子均含 4 个线粒体, 但在本研究中发现了二倍体精子含有 5 个(占比 1%)线粒体的特例。四倍体长牡蛎精子的线粒体数目不同, 含有 4 个(占比 46%)、5 个(占比 52%)、6 个(占比 2%)这 3 种情况。 该研究阐明了不同倍性长牡蛎闭壳肌及精子的组织学特性和超微结构, 为深入研究长牡蛎肌纤维生物学特性和精子繁育生物学提供了基础资料。     

超低温冷冻对西伯利亚鲟精子形态结构损伤的观察

为改进西伯利亚鲟精子超低温冷冻保存技术,探讨精子损伤机制,应用扫描和透射电子显微镜,观察了西伯利亚鲟鲜精与冷冻后精子的形态结构.结果显示,经过冷冻保存后精子的形态发生了很大变化.精子顶体长、精子头中部宽、头中部宽与前部宽比值及中段宽与鲜精相比显著增加(P<0.05);中段长度、后外侧延伸物长度比鲜精显著变短(P<0.05).精子经过冷冻后有30.5%的精子在形态、结构上受到不同程度损伤,受损精子显微结构表现为顶体后外侧延伸物与核糅合,顶体内容物丢失;核膜囊泡化、核膜断裂,核内出现空泡;线粒体内嵴弥散,线粒体脱落;鞭毛外膜松弛与鞭毛脱离等.部分受损伤精子出现顶体丢失,中段脱落,鞭毛自中段基部断裂的现象.精子损伤主要集中在膜系统,中心粒等微管系统基本完好.     

南美白对虾精子超低温保存前后形态和超微结构的研究

应用光学显微镜和电子显微镜对超低温保存前后南美白对虾精子的形态和超微结构进行了观察。结果发现,正常精子由圆球形的主体部和棘突组成,主体部由顶体、亚顶体区、细胞核和环核细胞质带组成。超低温冷冻处理及升温复苏后受损精子棘突脱落,顶体囊泡化,精子细胞膜皱缩、肿胀,膜间腔增大,损伤严重者,顶体脱落,核变形,核膜破裂,核出现空泡化。结果表明,超低温冷冻处理及升温复苏过程主要造成南美白对虾精子的顶体和膜结构的损伤,致使精子成活率降低。