猪丁型冠状病毒在悬浮培养猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性分析

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^-3接种于密度为2×10⁶ cells·mL^-1的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL^-1时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。     

用药防病对水稻颖壳色泽及其稻米品质的影响

前言稻米品质主要决定于品种的遗传特性,同时也受气候地理条件和栽培技术措施的影响。近年来各地水稻病虫害发生较重,严重降低了水稻产量及其品质。而通过药剂处理可以改善这一情况。药剂对稻米品质的影响主要有用药品种、用药量以及用药时期。例如一些粉剂农药施用会附在水稻叶片的表面从而阻碍正常的生理活动,降低营养物质的积累;另外粉剂药会附在水稻种子上面,使种子形成褐色斑点从而影响水稻颖壳的色泽。因此适时适量药剂处理可以改善稻米的品质。针对上述原因安排了田间试验,主要研究以药剂调控改良水稻种子色泽和稻米品质的可能性。从…     

沼气发酵过程中产甲烷菌快速计数方法的研究

文章采用MPN以及显微计数两种方法对不同样品中甲烷菌数目进行检测.试验结果表明:显微计数用于沼气发酵过程中的甲烷菌检测是可行的.该法比MPN计数更加快速简便,结果也更接近真实情况.     

白芷栽培技术要点及种植技术创新研究

白芷是我国传统常用的大宗中药材，既可以药用，也可作为香料食用。目前，白芷在种植过程中存在出苗不齐、施肥不当和病虫草害预防不到位的情况。为了提高白芷成活率和产量，需要做好施肥、品种选育、病虫害防治、创新种植技术等工作。基于此，文章研究了白芷栽培中的注意事项，分析了具体的种植技术，以供参考。     

南通市低碳农业发展研究

探讨了在农业生产过程中,应用垄作免耕技术、施肥技术、畜禽健康养殖技术、沼气工程、秸秆综合利用技术、提升土地利用技术、绿肥种植技术、新型农作物育种技术、病虫害防治技术、节水灌溉技术、水产生态健康养殖技术、农业机械节能减排技术等各种节能减排技术,减缓温室气体的排放,保护生态环境,从而实现农业和农村可持续发展.     

改变农村集体经济的新举措

一、建立组织、强化宣传 1．纳入领导日程。农村集体资产是农民群众自己创造的财富,为了发展农村经济,扎实有效地把资产管理工作真正落到实处。县委、县政府对资产管理工作十分重视,把这项工作列入政府重要议事日程,并纳入目标管理。     

超级稻“中浙优1号”的特征特性及高产栽培技术

中浙优1号是中国水稻研究所和浙江省杂交水稻种业有限公司用航天育种育成的恢复系航恢570与优质米不育系中浙A配组成的优质杂交中籼新组合。2003年引入我地试种和示范,表现高产、适应性广、抗性强、米质优、容易栽培等优点,深受农民群众欢迎。但也存在着易倒伏的缺点。2004年4月通过浙江省农作物品种审定委员会审定（浙审稻2004009）。2005年被农业部确定为超级稻组合,并被列为浙江省的主导品种,种植面积迅速扩大,到2007年为止,永嘉全县种植18．8万亩,成为我县单季稻的主栽品种。     

传染性支气管炎病毒结构蛋白免疫鸡对CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的影响

为了比较传染性支气管炎病毒3种主要结构蛋白免疫鸡后对CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的不同影响.本试验以pVAX1载体为携带工具,制备分别含有IBV主要结构蛋白基因的质粒免疫健康雏鸡,采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数进行检测.结果显示:各试验组间,携带N蛋白基因的质粒在免疫后3周内CD4+T淋巴细胞数和CD8+T淋巴细胞数均高于其他组,且差异极显著(P＜0.01).由此可见,IBV的N蛋白可明显诱导CD8+T淋巴细胞的CTL免疫作用和CD4+T淋巴细胞的辅助性免疫作用,其细胞免疫原性高于S1蛋白和M蛋白.     

基于IERS 2003规范的坐标系转换实现及其方案应用

主要介绍了IERS 2003规范中国际地球参考系(ITRS)到地球质心天球参考系(GCRS)的转换过程,以及与IAU 2000决议一致的常规转换公式,并详细分析了以IERS计算程序为工具、“基于CEO“[注]和“基于春分点“的ITRS向GCRS转换的两种等价方案和相应的三种应用方法,最后对新坐标系转换模型的应用进行了探讨.     

新发猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

猪Delta冠状病毒(porcine delta coronavirus,PDCoV)是一种新发现的仔猪腹泻类冠状病毒,感染仔猪主要表现出水样腹泻、呕吐和脱水等临床症状,和猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)临床症状极其类似,且临床上混合感染病例较多,单靠临床症状和剖检变化很难辨别这2种疾病,因此建立同时检测且能区分PDCoV和PEDV的检测方法具有重要意义。参照GenBank登录的PDCoV M基因和PEDV ORF3基因特异性序列设计引物,扩增相应的基因片段,克隆构建重组质粒pMD-18T-PDCoV-M与pMD-18T-PEDV-ORF3,测序验证后,分别以此重组质粒为标准品,建立了能同时检测PDCoV和PEDV的SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR方法,并对其扩增体系和扩增条件等进行了优化,同时对所建立的双重荧光RT-PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行了检测。结果显示,该试验成功建立了能同时检测PDCoV和PEDV的SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR方法,最低能检测到PDCoV和PEDV分别是28.6拷贝/μL和99.6拷贝/μL的质粒浓度,显示出较好的敏感性;在同样扩增条件下该方法具有较好的重复性;特异性试验表明,该方法仅能检测出PEDV和PDCoV,而对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病毒(PRV)等均不产生特异性扩增曲线。将所建立的双重荧光RT-PCR方法以及单重荧光定量RT-PCR方法分别对198份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV和PDCoV检测,结果显示,PDCoV阳性样品41份,阳性率为20.7%;PEDV阳性样品59份,阳性率为29.8%;同时感染这2种病毒的样品17份,阳性率为8.6%。与单重荧光定量RT-PCR方法对PEDV和PDCoV的检出率一样,符合率100.0%。本研究成功建立了PDCoV和PEDV的双重荧光RT-PCR方法,能同时准确地检测PDCoV和PEDV,这为PDCoV和PEDV的临床鉴别诊断和流行病学调查研究奠定基础。