罗非鱼皮酶解物钙离子结合能力及其结合物的抗氧化活性

该研究利用中性蛋白酶、Protamex1.5L和碱性蛋白酶酶解罗非鱼(Oreochromis mossambicus)鱼皮,研究了各种酶解产物对钙离子(Ca~(2+))的结合能力,比较了酶解物结合Ca~(2+)后的抗氧化能力,并分析了结合物的傅里叶红外光谱(FT-IR)。结果显示,Protamex1.5L水解罗非鱼皮2 h的酶解产物具有最高的Ca~(2+)结合率(87.79%);3种罗非鱼皮酶解产物均存在抗氧化性,其中Protamex1.5L酶解罗非鱼皮产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、·OH自由基清除率和还原力最高分别为51.46%、17.26%和0.09;罗非鱼皮酶解物(TSH)结合Ca~(2+)后,钙离子结合物(TSH-Ca)的DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率减弱,还原力增强;FTIR分析结果表明了Ca~(2+)与TSH中氨基氮原子和羰基氧原子发生了结合。     

海参水煮液酶解多肽的抗氧化活性

以海参水煮液的冻干粉为原料,选取中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶分别酶解制备多肽,测定其对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力,并与合成抗氧化剂TBHQ对比.结果表明,3种蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力均随样品质量浓度的升高而增强;其中,中性蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽清除·OH、O2-·和DPPH·自由基的IC50值依次为8.565、6.658和2.015mg/ml,其对O2·的清除能力优于TBHQ.经液相色谱法测定,中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽分子量分别分布在＜2 500、＜3 500和＜1 000 D的小分子肽中.     

酶法制备鲢鱼蛋白抗氧化肽研究

为制备具有良好抗氧化活性的鲢鱼蛋白肽段,选择了5种蛋白酶在相同酶活力下水解鲢鱼鱼肉蛋白,通过三硝基苯磺酸法(TNBS法)和分光光度法分别测定了鲢鱼鱼肉蛋白的水解度及酶解产物的抗氧化活性,并分析了水解度与抗氧化各指标间的相关性.结果表明:鲢鱼鱼肉蛋白的5种酶解产物中,碱性蛋白酶酶解鲢鱼鱼肉蛋白5 h后的水解度最高;清除DPPH自由基能力和还原力较强的是胃蛋白酶酶解产物,其清除DPPH自由基能力最高达到了61%,还原力最高达到了1.6;酶解产物的水解度和还原力分别与亚铁离子螯合力具有显著的相关性(P﹤0.05).酶的种类对鲢鱼蛋白的水解度和酶解产物的抗氧化活性有较大的影响.     

鳙鱼蛋白酶解液清除自由基的研究

以鳙鱼肉为原料,通过对水解度的分析和对可溶性短肽的测定研究了不同蛋白酶的酶解效果,并分别利用分光光度法、Deoxyribose筛选法及邻苯三酚氧化法对鳙鱼蛋白酶解液在体外清除自由基的能力进行了比较。试验结果表明:鳙鱼蛋白经酶解后可提高对自由基DPPH.、.OH和O2.-的清除活性,水解至一定时间后酶解液的清除活性达到最大,随后减少;不同的酶对清除能力的影响不同,碱性蛋白酶Alcalase的酶解液清除能力较强;酶解液对不同的自由基表现出不同的清除活性,提示酶解液对不同自由基存在着不同的抗氧化机制。     

响应面法优化中性蛋白酶酶解海湾扇贝副产物制备抗氧化酶解物研究

采用响应面法优化中性蛋白酶酶解海湾扇贝(Argopecten irradias)副产物蛋白制备抗氧化酶解物工艺。以DPPH自由基清除率和还原能力为响应值,在底物浓度、温度、时间、酶与底物比4个单因素实验基础上,优化确定3个显著性因素。获得实验条件下最佳制备工艺为:底物浓度25 mg·mL^-1、温度50℃、时间3.8 h、酶与底物比1.5%。在此条件下,实验验证酶解海湾扇贝副产物蛋白制备抗氧化酶解物的DPPH清除率为81.93%(预测值为83.19%),还原能力为58.12%(预测值为58.92%),DPPH自由基清除率和还原能力的IC 50值分别为0.264 mg·mL^-1和3.136 mg·mL^-1,且表现出较强的抗氧化活性。研究表明,优化后的回归模型用于预测中性蛋白酶酶解海湾扇贝副产物蛋白制备抗氧化酶解物是可行的。     

复合酶提取牡蛎抗氧化肽的工艺研究

以牡蛎为原料,首先从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为内切酶,以水解度为指标,得到最佳的酶解工艺条件:时间4h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％(7 500 U/g),水解度为49.50％;同时以水解度为指标,得到外切酶风味蛋白酶的最佳酶解工艺:时间5h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％ (450 U/g),实际水解度50.95％.最后,以清除羟自由基能力和水解度为指标,探讨内切酶(胰蛋白酶)和外切酶(风味蛋白酶)不同复合酶解方式的抗氧化能力.最终确定,复合酶解制备牡蛎抗氧化肽效果最好,其酶解条件为胰蛋白酶为3％(7 500 U/g)、风味蛋白酶加酶量为3％ (450 U/g),pH8.0,时间5h,料水比1∶2,温度50℃时,水解度高达53.94％,体外清除·OH的EC50为0.56 mg/mL.     

鳕鱼鱼鳔抗氧化肽制备工艺研究

本研究以鳕鱼(Gadus morhua)鱼鳔为原料，选用6种不同蛋白酶对其进行酶解，通过比较酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除能力，筛选出最佳蛋白酶为复合蛋白酶。通过单因素实验与响应面优化实验，确定最佳提取工艺：酶解时间为6 h、pH为7.21、温度为58.56℃、酶添加量为200 U/ml。研究结果显示，DPPH自由基清除率为61.1%，与理论值62.0%接近。鳕鱼鱼鳔肽体外清除自由基能力实验发现，酶解产物对羟基自由基与超氧阴离子自由基具有一定的清除能力，同时，具有较好的亚铁离子螯合能力。体外模拟胃肠消化后多肽的抗氧化活性变化，结果显示，体外模拟消化产物水解度有增加，对自由基的清除能力与亚铁离子螯合能力有一定的下降，其可能原因为，经模拟胃肠消化后多肽的结构发生一定的变化，导致了抗氧化活性的变化。     

刺参肠、性腺酶解多肽体外抗氧化作用研究

刺参（Apostichopus japonicus）肠和性腺是刺参加工过程中的副产物,为丰富其高值化利用的基础理论,研究了刺参肠、性腺酶解过程中可溶性蛋白和氨基酸态氮质量浓度变化,分析了酶解多肽对11-二苯基苦基苯肼（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2^-·）的体外清除效果。结果显示,刺参肠和性腺经生物酶水解后,水解度分别为53.63%和63.40%,酶解液中可溶性蛋白质量浓度分别为4.62 mg·mL-1和5.01 mg·mL-1,氨基酸态氮质量浓度分别为0.43 mg·mL-1和0.56 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽清除DPPH·的半抑制质量浓度（IC50）分别为3.31 mg·mL-1和0.88 mg·mL-1,清除·OH的IC50分别为9.53 mg·mL-1和8.81 mg·mL-1,清除O-2·的IC50分别为6.42 mg·mL-1和3.22 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽具有一定的体外抗氧化效果,应用前景广阔。     

紫菜降血压肽酶法制备工艺的优化

摘要：降血压肽又称为血管紧张素转化酶抑制肽，是具有降血压活性的生物活性肽，对高血压患者有显著疗效。为探讨从紫菜中制备降血压肽的酶法工艺，本实验选用AS．1398中性蛋白酶、胰蛋白酶、复合酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶等6种蛋白酶分别对紫菜进行酶解，通过对其酶解液的ACE抑制活性和水解度的比较，发现采用AS．1398中性蛋白酶酶解的产物ACE抑制活性最高。对AS．1398中性蛋白酶的酶解工艺进一步优化，确定其最佳酶解工艺为：温度50℃、pH值7．5、加酶量E／S10000U·g^-1。在此条件下，酶解4h和10h的酶解产物抑制活性最高均达70％以上，并发现紫菜酶解液的ACE抑制率与水解度的增长不成显著的线性关系。     

酶水解美洲帘蛤蛋白质及产物抗氧化活性初探

采用二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基法和改进的邻苯三酚法检测了胃蛋白酶对美洲帘蛤的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶质量分数、底物质量分数、pH、水解时间、温度对美洲帘蛤蛋白质水解度的影响.试验结果表明,酶质量分数为5%,底物质量分数为10%.pH 1.0,酶解3 h.温度为50℃时可以获得较高的水解度,同时水解液对超氧阴离子自由基和DPPH自由基有较高的清除率.     

大鲵肉酶解产物的制备及其抗氧化性的研究

以大鲵肉为原料,利用Aspergillus sp.酸性蛋白酶进行酶解,研究其最佳的酶解条件以及酶解产物的抗氧化作用。结果表明,大鲵肉酶解的最佳工艺条件为Aspergillus sp.酸性蛋白酶加酶量为0.4%(质量比)及底物浓度为0.1g/mL时,酶解时间5.5h,pH 2.0,温度45℃。时间飞行质谱表明酶解产物的分子量小于2 000,苯酚硫酸法测定糖含量为2%,Folin-酚试剂法测蛋白含量为93%。大鲵酶解产物清除羟基自由基(.OH)和DPPH自由基的能力随浓度升高而增强。     

黄缘盒龟肉的酶解工艺优化及其体外抗氧化活性研究

龟类不仅营养价值高,而且具有潜在的药用价值,通过研究龟肉酶解产物的功能特性,可以科学认识其营养保健功能.以黄缘盒龟肉为原料,羟自由基清除率为指标,碱性蛋白酶为水解酶,通过正交试验L9(34)得到制备抗氧化肽的最佳酶解条件为pH值8.0、酶解温度55℃、料液比1.5∶20 g/mL、加酶量(酶/底物,E/S)3.0％、酶解时间3h,酶解液对羟自由基清除率达到82.08％.酶解产物体外抗氧化活性的结果表明,酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基和过氧化氢均有较好的清除作用,还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自氧化抑制能力.总体而言,黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化效果,具有良好的开发利用前景.     

乌贼墨黑色素粗提物的提取工艺优化及其抗氧化能力测定

本文对乌贼墨粉进行超声波辅助蛋白酶水解研究,以水解度为考察指标,筛选最适蛋白酶,并通过单因素试验和L_(16)(4~5)正交试验优化酶解条件。试验结果表明,酸性蛋白酶为墨粉水解的最佳试验用酶,最佳酶解条件为温度50℃、水解时间2 h、加酶量3.0%、反应pH 3.5、料液比1∶15,在此最优条件下对墨粉进行水解试验,制得水解后墨黑色素,并测得水解度为11.45%。水解后墨黑色素氧化产物2,3,5-三羧酸吡咯(PTCA)含量为17.621μg/mg,水解后墨黑色素总抗氧化能力为18.9 U/g,总抗氧化能力保持率为99%。     

鱼蛋白粉酶水解产物对DPPH自由基清除能力的研究

以鱼蛋白粉为原料,碱性蛋白酶(Alcalase 2.4 L)为水解用酶,研究了底物浓度、加酶量、水解p H、温度和时间对鱼蛋白粉水解产物的DPPH自由基清除率的影响。结果显示,5个因素对DPPH自由基清除率均有不同程度的影响。在单因素试验的基础上,采用响应面法对鱼蛋白粉的酶水解条件进行优化,得到的最佳水解工艺条件为:底物浓度(w/v)18.05%,加酶量(w/w)2.40%,水解p H 8.04、温度49.0℃、时间4.0 h。在此条件下水解度为9.81%,鱼蛋白粉水解液的DPPH自由基清除率为76.10%,与浓度为120μg/m L的还原型谷胱甘肽的DPPH自由基清除率相当。结果表明,鱼蛋白粉酶水解产物具有较好的清除DPPH自由基的能力。     

牡蛎酶解液的抗氧化活性

检测了牡蛎(Crassotera gigas)木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性。由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析牡蛎酶解液,得到具抗氧化活性组分的分子量分布。分子量为1191 D和826 D左右的木瓜蛋白酶酶解活性肽组分的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.184 mg/mL和0.673 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别为53.6%和66.5%;分子量分别为1074 D和735 D左右的中性蛋白酶酶解活性肽的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.166 mg/mL和0.830 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别57.6%和70.5%。HPLC分析结果表明,木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的活性肽组分分别由几种抗氧化肽组成。抗氧化活性最强的木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的肽组分在质量浓度为2.5 mg/mL时,活性分别可达83.6%和80.8%。用牡蛎原浆与各酶解液灌胃昆明小白鼠。研究结果表明,用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解原液及经超滤纯化的酶解液对小白鼠实施灌胃,其肝脏组织的SOD活力都显著提高(P<0.05);灌胃经超滤纯化的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液,小白鼠肝脏组织GSH-PX活力、GSH含量显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。     

基于Box Behnken响应面设计优化制备鸢乌贼抗氧化肽的研究#br#

以印度洋鸢乌贼(Symplectoteuthis oualaniensis)胴体分离蛋白为原料,基于分子量分布和营养价值分析,优化制备抗氧化肽的酶解工艺参数。碱溶酸沉法从鸢乌贼胴体提取分离蛋白;以底物浓度、酶底比、酶解时间等3个因素为单因素实验;Box-Behnken中心法则设计响应面实验;DPPH自由基清除率结合水解度为响应指标。鸢乌贼胴体分离蛋白相对分子量分布在30~240 kDa;必需氨基酸占总氨基酸42.56%;最佳酶解工艺参数是底物浓度4%、酶底比9 U·mg^-1、酶解时间4 h。5 mg·mL^-1的鸢乌贼胴体分离蛋白酶解物的DPPH自由基清除率为55.60%,羟自由基清除率为53.21%,ABTS自由基清除率为40.12%。鸢乌贼胴体分离蛋白符合FAO/WHO世界卫生组织提出的理想蛋白营养价值模式,鸢乌贼胴体能制备出营养价值高和抗氧化活性强的海洋功能蛋白肽。     

鲣鳔蛋白抗氧化酶解物制备工艺

为有效提高鲣鳔蛋白的附加值,研究以DPPH自由基清除率为抗氧化活性评价指标,采用蛋白酶酶解制备活性多肽的工艺,选用菠萝蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶7种酶在各自最适的条件下酶解,筛选出复合蛋白酶为最适用酶,通过单因素实验分别研究加酶量、溶液初始p H、酶解温度和时间对酶解物抗氧化活性的影响,在此基础上,根据响应面法优化鲣鳔抗氧化酶解物的制备工艺。结果显示,最佳酶解工艺条件为加酶量8.53 U/mg,p H 5.54,温度50.03°C,时间5.07 h。此外,利用超滤法对最佳条件下制备的酶解物进行初步分级,得到分子质量分别为大于10 000 u、3000~10 000 u和小于3000 u的3段组分,且这3段组分对DPPH自由基的半抑制浓度IC50值分别为0.64、0.52和0.37 mg/m L。研究表明,最优条件下制备的酶解物的DPPH清除率达72.00%,与模型预测值71.60%接近,且其中小于3000 u的组分具有较强的DPPH自由基清除活性。     

海洋药物——海马酶解液活性的研究

采用中性蛋白酶对海马粉进行酶解获得酶解液,并对酶解液的抗氧化活性、抑菌活性和抗疲劳活性进行了测定。实验结果表明,海马酶解液对DPPH的清除率为:雄海马45.2%,雌海马36%;清除羟自由基率为:雄海马81.7%,雌海马80.0%;超氧阴离子清除率为:雄海马46.0%,雌海马34.4%。海马酶解液同时具有抑菌活性,通过滤纸片法可以看出海马酶解液对大肠杆菌、产气杆菌和变形杆菌的抑制性比较强,而对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑制性较弱。海马酶解液还具有抗疲劳活性,通过小鼠负重游泳实验检测海马中性蛋白酶酶解液的抗疲劳活性,实验组游泳时间平均为143min,而对照组的游泳时间为91min,相比之下实验组比对照组高出52min。进一步的研究结果还表明,海马酶解液具有增加小鼠游泳耐力、增加小鼠血清中SOD活力、降低血清中MDA和尿素以及降低血乳酸的作用。     

利用大西洋鲑内源酶酶解加工废弃物制取抗氧化肽的研究

大西洋鲑(Salmo salar)加工废弃物中含有丰富的蛋白质,具有较高的开发利用价值,直接遗弃会造成资源浪费和环境污染,探索利用自身内源蛋白酶酶解制取抗氧化肽具有重要的意义。对大西洋鲑内脏所含内源蛋白酶的性质进行了初步研究,测得主要含有3种内源蛋白酶,最适p H为2.0、6.0、9.0,p H 9.0的碱性蛋白酶具有最高的酶比活力。以水解度和总抗氧化活性为指标,通过单因素试验确定大西洋鲑内源蛋白酶处理鲑鱼的加工废弃物干粉料的最适条件,再用正交实验L16(45)对其酶解条件进行优化,确定影响酶解液总抗氧化活性的主要影响因素(P﹤0.05)为温度、p H和酶解时间,比较后得到最佳酶解条件为:温度35℃、加酶量0.7 m L/50 m L、料液比0.7 g/50 m L、p H 9.0、酶解时间7 h,该条件下酶解液的总抗氧化活性为258.29 U,大西洋鲑加工废弃物干粉料水解度为15.00%。研究表明,采用大西洋鲑内源蛋白酶酶解鲑鱼加工下脚料并制取抗氧化肽,具有一定的可行性。     

非淀粉多糖酶对蛋白酶体外酶解棉籽粕效果的影响研究

采用二步酶解法,先单独使用纤维素酶和果胶酶或二者合用,再用中性蛋白酶(中性蛋白酶500U/g酶解时间5h)酶解棉籽粕,以还原糖生成量、蛋白质水解度(degreeofhydrolysis,DH)和三氯乙酸氮溶指数(trichloroaceticacid-nitrogen solution index,TCA-NSI)为标识,研究NSP酶水平对还原糖生成量、DH和TCA-NSI的影响。结果为:在先用非淀粉多糖(non-starch polysaccharides,NSP)酶水解,然后用中性蛋白酶500U/g水解5h时,单独使用纤维素酶和果胶酶均可提高还原糖生成量、DH和TCA-NSI,适宜水平分别为:纤维素酶350U/g,果胶酶250U/g;同时使用纤维素酶和果胶酶,对提高还原糖生成量、DH具有协同效应,适宜水平为:纤维素酶350U/g和果胶酶250U/g。