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提高苹果基因转化效率的研究 总被引:18,自引:1,他引:17
采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)强株系EHA105(p35sGUS-intron)研究了影响‘皇家嘎拉’苹果(Malus domestica Borkh.)外植体的β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因的瞬时、稳定表达水科和转基因植株的再生。证明在培养基生长素(IBA、NAA)存在的条件下,外植体的GUS基因的瞬时表达水平提高了3~4倍,而共培养两周后稳定表达水平提高2 相似文献
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沙田柚遗传转化的探讨 总被引:6,自引:0,他引:6
采用含nos基因和人工合成柞蚕抗菌肽D基因AP-D基因的根癌农杆菌对沙田柚外植体进行转基因研究,与根癌农杆菌共培养产生的芽,苗经Km敏感性筛选,获得了若干转基因植株,并对这些植株进行了报告基因nos表达的电泳检测,同位素标记、AP-D基因为探针的点印迹杂交,外源AP-D基因的PCR扩增和Southen杂交。结果显示,报告基因nos、抗菌肽D基因已转入沙田柚植株细胞中。 相似文献
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提高苹果基因转化效率的研究 总被引:6,自引:1,他引:5
采用根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)强株系EHA105(p35sGUS-intron)研究了影响‘皇家嘎拉’苹果(Mains domestica Borkh.)外植体的β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素(IBA、NAA)存在的条件下,外植体的GUS基因的瞬时表达水平提高了3-4倍,而共培养两周后稳定表达水平提高2倍以上,产生9.8个GUS愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化,白化处理的新梢顶端第一节间外植体GUS表达区域比常用的叶片外植体高4倍。在生长素存在的条件下 2%外植体获得了转基因植株。Southern BlotDNA杂交和组织化学染色分析证明GUS基因已整合到苹果的染色体上,并得以表达。 相似文献
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培育苹果转基因植株的研究 总被引:15,自引:2,他引:13
采用“皇家嘎拉”苹果白化面外植体,通过根癌农杆菌EHA105介导,证明了培养基中存在生长素可促进基因转化,转化效率比对照提高2倍以上。将外植体下EHA101株系在含有生长素的2基中共培养,获得了转基因植株。采用PCR分析和SouthernBlot核酸杂交,确定GUS基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了GUS基因在杆株体内的表达。 相似文献
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以矮牵牛为试材,通过根癌农杆菌介导ACC脱氨酶基因(ACDS)(分别由CaMV35S、SAG12和CHSA启动子驱动)转化矮牵牛叶盘,探讨了预培养时间、农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对转化的影响,比较了ACDS基因在不同启动子驱动下获得转基因植株的效率及转基因植株的生长速率。结果表明:预培养5d的矮牵牛叶盘在含AS 200μmol·L-1、OD600值为0.6的农杆菌菌液中浸染8min后,共培养4d时遗传转化效果最优;不同启动子驱动的ACDS基因转化效率以CHSA启动子效率最高(3%),SAG12启动子效率最低(1.25%)。PCR检测证明外源基因已整合进入矮牵牛基因组中。转ACDS基因矮牵牛植株的获得,为利用基因工程技术培育抗衰老矮牵牛新品种奠定了技术基础。 相似文献
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新乔纳金苹果遗传转化及转基因植株再生 总被引:18,自引:1,他引:17
新乔纳金苹果遗传转化及转基因植株再生张志宏1景士西1王关林2方宏筠2吴禄平1(1沈阳农业大学果树园艺系,沈阳110161;2辽宁师范大学生命科学院,大连116029)关键词苹果;根癌农杆菌;转化;转基因植株GeneticTransformationo... 相似文献
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黑核桃体细胞胚状体发生及其基因转化系统 总被引:8,自引:0,他引:8
以我国种植的优良品种黑核桃(Juglans nigia L.)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入细胞胚,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响,建立了黑核桃体细胞胚基因转化系统,还分析了体细胞胚胎转化系统的特点和潜力。 相似文献
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根癌农杆菌介导蓝猪耳转化系统的建立 总被引:7,自引:0,他引:7
通过对影响根癌农杆菌介导蓝猪耳转化效果各种因素的研究, 建立了蓝猪耳高效稳定的遗传转化系统。研究结果表明, 农杆菌侵染叶片外植体效率最高; 外植体预培养不利于农杆菌的侵染; 乙酰丁香酮能大大提高根癌农杆菌转化蓝猪耳的效率。另外, 菌液浓度、侵染和共培养的时间及再生的途径等均对转化效率有一定的影响。叶片外植体与农杆菌共培养后, 经过抗性芽的诱导、根的再生, 70 d左右就可以获得抗性苗。抗性植株经GUS染色、PCR分析和Southern blot检测, 外源基因已经整合到蓝猪耳基因组中, 转化频率为7%~8%。 相似文献
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抗病基因VpPR10转化‘砀山酥梨’及转化条件的优化 总被引:2,自引:0,他引:2
将源自中国野生华东葡萄的抗病基因——病程相关蛋白基因导入‘砀山酥梨’,并对转化系统条件进行优化。首先将VpPR10基因重组于中间表达载体pWR-Ⅱ,得到重组质粒pWR-Ⅱ-VpPR10;继而以改进冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,再利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法进行遗传转化。根癌农杆菌浓度OD600=0.5,离体叶片侵染5min,在含有100μmol·L-1乙酰丁香酮的培养基中暗处共培养48h有利于砀山酥梨的遗传转化;经PCR分析、Southern blot和RT-PCR检测,证明目的基因VpPR10已导入并整合到砀山酥梨基因组中;转化率为1.08%。 相似文献
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甜瓜CmACOⅠ启动子组织特异性表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为进一步明确甜瓜果实软化的分子机理,构建了ACC氧化酶Ⅰ基因(CmACOⅠ)启动子与GUS基因融合的植物表达载体,采用根癌农杆菌介导法转化甜瓜‘甘甜一号’。通过卡那霉素抗性和 PCR检测筛选呈阳性的转化植株,取不同组织进行X-Gluc染色。结果表明,转化植株的根、茎、叶、花、果实等器官组织经X-Gluc染色后,只在花药组织和成熟果果皮中出现蓝色斑点,其余组织均未检出,表明甜瓜CmACOⅠ启动子能够驱动GUS基因在转基因甜瓜花药和成熟果果皮中特异表达。 相似文献
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转基因植物研究始于 2 0世纪 70年代末80年代初。 1 983年 ,MareVanMontagn等对根癌农杆菌及发根农杆菌进行改造 ,切去癌基因 ,转基因后获得了转化植株 ,标志着基因工程的开始。在果树上的研究起步较晚 ,1 988年McGranagan对核桃进行的外源基因的转化研究取得突破 ,获得了核桃的转基因植株 ,随后在苹果 (Malusdomestica)、草莓(Fragaraananassa)、欧洲李 (Prunusdomes tica)、桃 (Prunuspersica)、杏 (Prunusame niaca)、葡萄 (Vitis… 相似文献
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罗汉果叶盘法感染农杆菌试验 总被引:2,自引:0,他引:2
罗汉果叶盘法感染农杆菌试验福建农业大学园艺系林顺权,陈振光以根癌农杆菌介导的外源基因转移技术已在一些农作物的基因工程研究上得到应用并取得了成功,在果树中,也已获得了苹果、核桃、李、桃、葡萄和草莓的转化植株。近年来,人们对具Ri质粒的发根农杆菌感染转化... 相似文献
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梨韧皮部特异表达启动子AtSUC2驱动下的GUS基因的转化和表达 总被引:2,自引:0,他引:2
以 ‘Old Home’ 梨无菌苗叶片为外植体, 利用根癌农杆菌介导将专一在韧皮部表达启动子AtSUC2 驱动下的GUS 基因转入 ‘Old Home’中。筛选出了‘Old Home’ 梨叶片高效遗传转化的最佳条件:农杆菌和外植体在液体培养基上共培比在固体培养基上共培转化率提高5倍。 PCR分析和Southern 杂交鉴定表明GUS 基因已整合到转基因植株的基因组中,组织化学检测和Western 杂交鉴定证明了GUS 基因在转基因植株韧皮部中的表达。 相似文献