含ipt基因生长素调控基因根癌农杆菌转化牵牛萌动种胚同工酶分析

以牵牛萌动种胚为受体,用含有３５Ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４３及含有３５Ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－生长素调控基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４进行转化。通过对转化及对照植株苗期叶的同工酶分析,发现转化植株叶的过氧化物酶同工酶及酯酶同工酶谱带来对照植株有明显差异。转化频率较高。间接验证了外源ＤＮＡ的导入,说明同工酶分析方法可做为转基因植株早期筛选的方法之     

异戊烯基转移酶基因导入番茄及转基因植株再生

通过根癌农杆菌（Ａgrobacteriens）介导,利用特异启动子Ｐsag12与异戊烯基转移酶（Ｉsopenyl transferase,ipt）基因构建的嵌合基因Ｐsag12－ipt对５个番茄品种进行遗传转化,结果共获得来自３１个不同外植体的４４株转化再生植株。感染子叶的分化再生及转化植株田间生长正常。对其中部分转化再生植株进行ＰＣＲ检测证明为转基因植株,并且在田间表现出生长旺盛及抗叶片衰老的特性。     

提高苹果基因转化效率的研究

采用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β－葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水科和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下，外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３～４倍，而共培养两周后稳定表达水平提高２     

果树基因克隆技术进展

转基因植物研究始于 2 0世纪 70年代末80年代初。 1 983年 ,ＭａｒｅＶａｎＭｏｎｔａｇｎ等对根癌农杆菌及发根农杆菌进行改造 ,切去癌基因 ,转基因后获得了转化植株 ,标志着基因工程的开始。在果树上的研究起步较晚 ,1 988年ＭｃＧｒａｎａｇａｎ对核桃进行的外源基因的转化研究取得突破 ,获得了核桃的转基因植株 ,随后在苹果 (Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ)、草莓(Ｆｒａｇａｒａａｎａｎａｓｓａ)、欧洲李 (Ｐｒｕｎｕｓｄｏｍｅｓ ｔｉｃａ)、桃 (Ｐｒｕｎｕｓｐｅｒｓｉｃａ)、杏 (Ｐｒｕｎｕｓａｍｅ ｎｉａｃａ)、葡萄 (Ｖｉｔｉｓ…     

马铃薯转萝卜抗菌肽基因植株的获得及其抗晚疫病的初步鉴定

为获得抗晚疫病的转基因马铃薯植株,采用根癌农杆菌介导法,以微型薯薯片为外植体,将萝卜抗菌肽基因（AFP）导入马铃薯栽培品种夏波蒂（Shepody）中,通过草甘膦抗性筛选和PCR检测获得了4株转基因试管苗,并经黑暗诱导获得了微型薯。采用离体叶片接种法,对微型薯长出的叶片进行抗晚疫病鉴定,结果表明这4个株系的抗病性均有一定程度的提高。     

樱桃砧木叶片再生系统建立及抗菌肽基因转化

 以优良樱桃砧木新品系98-1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化，建立了高频率再生系统，并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0—2.0 mg/L、NAA 0.3—0.5 mg/L、GA 0.5 mg/L、AgNO3 5.0—10.0 mg/L。农杆菌及受体感受态是影响转化的关键，延迟筛选可提高叶片中转化细胞对卡那霉素的抗性而利于再生。PCR及Southern Blot检测为阳性，表明抗菌肽基因已整合到樱桃砧木98.1基因组。     

油菜种子特异启动子Napin控制外源EGFP基因在芥菜中的表达

为研究油菜种子特异启动子Napin在芥菜中的表达特性,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报告基因,将其置于来自油菜的Napin启动子下游,并经根癌农杆菌介导转入芥菜。对转基因芥菜种子及其T1代幼苗的EGFP检测表明：随着转基因植株的种子逐渐发育成熟,EGFP基因在种皮、子叶、胚根中的表达强度逐渐增强|在转基因种子发芽过程中,幼苗根、子叶、下胚轴中EGFP的表达逐渐降低,直至不能检出绿色荧光。结果表明Napin启动子驱动的外源基因表达在芥菜中表现出较为严格的种子表达特异性。     

苏云菌芽胞杆菌毒蛋白基因导入甘蓝获得抗虫转基因植株

苏云菌芽胞杆菌（Ｂｔ）毒蛋白对鳞翅目等昆虫有良好的特异性抗虫效果,转Ｂｔ基因为害虫防治和环境保护开辟了一条全新的途径。本试验采用根癌农杆菌介导的方法,成功地将Ｂｔ毒蛋白基因ＧＦＭＣｒｙＩ Ａ导入到甘蓝中,并获得了抗虫转基因植株。１材料与方法１．１植物...     

根癌农杆菌介导绿色荧光蛋白基因转化印度酸桔的研究

 通过根癌农杆菌介导将绿色荧光蛋白基因转入印度酸桔的胚性愈伤组织中, 经潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织, 并再生植株。对这些植株进行GUS 染色、PCR 分析、绿色荧光检测和Sourthern 杂交验证, 结果表明绿色荧光蛋白已经在转基因植株中表达。     

农杆菌介导的几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转化辣椒研究

以苗龄7～10 d的辣椒组培苗为被侵染的外植体,通过农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因,研究基因型、外植体类型、抗生素浓度对辣椒遗传转化的影响,以期获得抗真菌病的转基因辣椒植株.结果表明:不同基因型间、外植体类型、抗生素种类和浓度对辣椒的遗传转化影响存在较大差异.以几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对辣椒进行了遗传转化,获得了3株抗性植株.     

应用SSCP技术分析我国柑橘衰退病毒的混合感染

以随机采样的方式,从湖北、湖南和江西3省10县的柑橘产区收集242份温州蜜柑(CitrusunshiuMarc.)、橘(C.reticulataBlanco)、甜橙(C.sinensisOsbeck)和柚(C.grandisOsbeck)样品。对PAS-ELISA法初步检测呈阳性的样品进行柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)CP基因(coatingproteingene,CPgene)的RT-PCR扩增,结果来自14个样品采集地的120份样品感染了CTV,单个采样点的感染率为20.0%～71.4%,而总感染率达49.6%,表明CTV在这些地区广泛发生。单链构象多态性(single-strandconformationpolymorphism,SSCP)分析显示,120份CTV的CP基因RT-PCR的扩增产物共产生120种SSCP带型,而且存在广泛的混合感染。     

柚矮化病的品种感病性调查

以特征性症状春梢叶片扭曲畸形和枝条茎陷点为诊断依据，调查结果表明，５５个柚类品种中有２２个发病，占调查品种数的４０％；２８个沙田柚砧穗组合中有２２个发病，占调查砧穗组合数的７８．５％。以沙田柚实生苗和酸柚实生苗作指示植物，对温州蜜柑上的类似矮化病的叶片扭曲症状进行鉴定的结果，指示植物上表现出与接种沙田柚矮化病病原的指示植物相似的春梢叶片扭曲及茎陷点症状。     

柚Citrus grandis(L.) Osbeck种质多样化中心的探讨

柚的起源中心众说纷纭，有人认为在印度，亦有人认为在东南亚地区或中国。根据柚的种质多样性、栽培历史以及物种演化的原始先头种——红河大翼橙的存在，作者提出柚的起源中心当在中国。随着这一物种的扩散，形成若干次级多样化中心，主要有日本、东南亚地区和印度。     

梁平柚矮化砧木的筛选

供试柚品种为梁平柚,砧木为枳、香橙、宜昌橙和酒饼簕、以酸柚砧为对照。1983年秋嫁接,1984年秋定植。7年观察结果表明,酒饼簕、宜昌橙、枳对梁平柚有矮化作用,其中以酒饼簕最明显。枳砧梁平柚定植后第2年(1986年),有1/3的植株试花,第3年全部开花,结果最多的一株达8个;香橙、宜昌橙、酸柚砧(对照)梁平柚定植后第3年试花;酒饼簕砧梁平柚第5年试花。枳砧梁平柚树高、树冠体积、枝条电阻值、枝条节间长度等均明显低于对照。初步认为,枳是梁平柚比较理想的矮化砧木。     

柑橘胼胝质合成酶基因家族的表达分析

胼胝质由胼胝质合成酶合成,胼胝质沉积是植物对入侵病原的防御反应。为了探索胼胝质合成酶(Callose synthase,CalS)基因在柑橘中对黄龙病的应答情况,从甜橙基因组中筛选并利用生物信息学分析了柑橘胼胝质合成酶(CsCalS)家族的12个基因。这些基因编码的氨基酸序列与拟南芥中的胼胝质合成酶具有较高的同源性。荧光实时定量PCR结果显示,CsCalS5和CsCalS12在柑橘健康叶片中的表达量高于其他胼胝质合成酶基因。比较黄龙病感病材料和健康对照材料,发现CsCalS5、CsCalS7和CsCalS8在感病的‘砂糖橘’和‘强德勒’柚中均上调表达,可能参与柑橘对黄龙病病原的应答反应。     

沙田柚（2x）× 柑橘异源体细胞杂种NS（4x）的三倍体后代遗传分析

 用两对SSR 引物TAA1 和TAA3 对以二倍体沙田柚为母本,体细胞杂种NS（Nova 橘柚 + Succari 甜橙）为父本,通过有性杂交和胚挽救获得的79 株三倍体后代群体的带型和分离情况进行了分析。结果发现TAA1 引物和TAA3 引物在后代群体中分别扩增出5 种带型和4 种带型,子代带型分别符合4︰1︰1︰5︰1 和2︰2︰1︰1 的分离比例,与根据孟德尔遗传规律推导的双二倍体的分离比例相吻合,初步表明柑橘异源四倍体体细胞杂种减数分裂行为类似于双二倍体。     

几种芸香科植物花粉形态观察

应用扫描电子显微镜对佛手、代代、柚、柑橘和金橘等芸香科植物花粉进行形态观察。发现这几种植物的花粉在形态、大小、外壁纹饰、网孔等方面均有差异,其中3个佛手品种的花粉具网状纹饰,白衣秀士佛手和青衣童子佛手的网脊连续,而赤金王子佛手的网脊不连续,其他4种芸香科花粉具穴状纹饰,代代和柚的花粉比柑橘和金橘的花粉大,而代代和金橘的花粉表面孔穴密度比柚和柑橘的花粉表面孔穴密度大。这些花粉表面微观形态的差异将为上述品种鉴定提供依据。     

寄主凤凰柚对柑橘衰退病病毒甜橙分离株构成的影响

 为研究不同柑橘类型对柑橘衰退病病毒构成的影响，将9个保存在新会橙上的引起甜橙茎陷点症状的柑橘衰退病毒强毒分离株嫁接接种到凤凰柚后，比较了接种前后p25基因的HinfⅠRFLP 和SSCP变化情况。分离株 CT90与CT20接种前后的RFLP组群没有发生变化；RFLP组群发生变化的分离株中有6个由混合组群变为单一组群。此外，除分离株CT90接种前后的SSCP谱带保持不变外，其余8个分离株从新会橙接种到凤凰柚后，SSCP谱带数均呈减少趋势。试验结果倾向于表明某些能在甜橙上增殖的CTV株系在凤凰柚上的增殖受到了抑制。     

Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation and plant regeneration from a complex tetraploid hybrid citrus rootstock

Agrobacterium-mediated genetic transformation of a tetraploid “tetrazyg” citrus rootstock selection ‘Orange #16’ [Nova mandarin (Citrus reticulata Blanco) + Hirado Buntan pummelo (Citrus grandis L. Osbeck)] × [Cleopatra mandarin (C. reticulata Blanco) + Argentine trifoliate orange (Poncirus trifoliata (L.) Raf.)] was performed. Juvenile epicotyl segments were transformed with a construct containing a bifunctional egfp–nptII fusion gene under the control of an enhanced double CaMV 35S promoter. Our protocol resulted in a reasonable transformation efficiency of 18%. Stable integration of the transgene was confirmed by visual observation of EGFP expression, PCR and Southern blot hybridization. The purpose of this work was to investigate the amenability of novel citrus rootstock germplasm being developed for improved tree size control, soil adaptation, and disease resistance, to existing transformation technologies. Seed trees of such transgenic tetraploids also have potential as trap plants containing potent insecticidal transgenes, due to their inedible fruit and inherent crossing barriers with conventional commercial diploid scion cultivars, and could be planted around producing citrus groves.