右旋糖酐酶酶学性质研究

右旋糖酐酶专一性水解右旋糖酐中的α-1,6糖苷键,使右旋糖酐高效水解为一定分子量的右旋糖酐用于医药等领域。右旋糖酐酶酶学性质研究表明,酶作用的最适pH和温度分别为pH 5.0和55℃,最适底物浓度为2%右旋糖酐;在50℃以下相对稳定;在pH 2.2～9.6范围内相对稳定,具有良好的酸碱稳定性;酶对底物的亲和力随底物分子量的增加而增强;Mn~(2+)具有显著的激活作用,Cu~(2+)对酶具有较强抑制作用。     

蔗糖酶的提取工艺及性质研究

采用SDS抽提法从酵母中提取蔗糖酶,通过正交试验对SDS摩尔浓度、pH值、提取温度、提取时间进行优化,确定最佳提取工艺条件是SDS摩尔浓度为0.5mmol/L,温度40℃,提取时间10h,pH值5.5。制得的粗酶经醇沉后,采用Q-琼脂糖凝胶FF阴离子交换层析方法得到纯化的酵母蔗糖酶,纯化倍数为18.7倍,对蔗糖酶的性质也进行了研究。     

嗜碱菌S9碱性蛋白酶酶学性质研究

对嗜碱微生物所产的碱性蛋白酶进行酶学性质研究。发酵液首先经硫酸铵盐析和缓冲液透析,获得粗酶。试验结果表明,该酶最适反应温度60℃,pH为9.0,酶蛋白稳定温度40℃,pH为8.0～10.0。K 、Ca2 、Mn2 和Mg2 对酶有激活作用,Zn2 、Fe3 和Cu2 有抑制作用,Pb2 和Hg2 有强烈抑制作用。     

1株多粘类芽孢杆菌产菊粉酶粗酶学性质的研究

[目的]研究1株多粘类芽孢杆菌所产菊粉酶的粗酶学性质。[方法]以菊芋菊粉为底物发酵培养了1株多粘类芽孢杆菌,利用超声波法破碎细胞,得到该菌的菊粉酶粗提液,并对菊粉酶的粗酶学性质进行了研究。[结果]这株多粘类芽孢杆菌最佳产酶时间约在摇瓶发酵培养40h时,所产的胞内菊粉酶的菊粉酶活力与蔗糖酶活力之比（I/S）为0.2187,小于10,表现为外切酶活性。该酶反应的最适温度和最适pH值分别为45℃和5.0,在此条件下菊粉酶酶活力最高,可达102.81U/L。[结论]这株多粘类芽孢杆菌所产菊粉酶为外切酶,该酶的粗酶学性质研究为进一步深入系统地研究菊粉酶的酶学性质奠定了基础。     

高产木聚糖酶的紫色红曲霉菌株筛选及酶学性质研究

[目的]筛选紫色红曲霉木聚糖酶,并研究其酶学性质。[方法]采用平板筛选和固体培养方法获得了产木聚糖酶较高的紫红曲霉（Monascus pupureus）533。采用50%~70%硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶层析、DEAE Sepharose fast flow阴离子交换层析和SephacrylS-200凝胶层析进行纯化。最后,研究温度、pH、金属离子和化学物质对酶活性的影响。[结果]经分离纯化后得到相对分子质量约为46.0 kD的木聚糖酶。木聚糖酶最适反应温度为47℃;最适反应pH为5.5,pH稳定范围为4.5~5.5;Ca2＋、Fe2＋、Na＋和Tween 80对酶活力有激活作用;Mn2＋、Tris、EDTA、尿素和SDS对酶活力有抑制作用;Cu2＋和K＋对酶活力影响不大。[结论]该研究筛选到1株高产木聚糖酶的紫色红曲菌株,扩大了产木聚糖酶的菌株范围。     

琼胶分解菌Cellvibrio sp.BR的发酵条件及酶学性质研究

[目的]对琼胶分离菌Cellvibrio sp.BR的发酵条件及酶学性质进行研究.[方法]通过对琼胶分离菌Cellvibrio sp.BR发酵条件的优化,筛选该产酶菌株的最佳发酵条件,并对其酶学性质进行初步研究.[结果]该菌株产琼胶酶的最佳发酵条件为:在25℃、起始pH7.0的条件下培养36 h;该酶作用的最适pH为7.O～8.0,最适温度为35℃,最适底物质量分数为1.1％;该酶具有明显的底物特异性.[结论]为琼胶酶的进一步工业化生产提供了理论依据.     

莫海威芽孢杆菌产壳聚糖酶的分离纯化及酶学性质分析

纯化从烟台海域沙质土壤分离得到的莫海威芽孢杆菌菌株amyP216来源壳聚糖酶,并对其进行酶学性质分析。以发酵液为原料,依次进行超声波破碎菌体、20%～70%硫酸铵分级盐析、纤维素DE-32阴离子交换层析、葡聚糖凝胶G-75过滤层析,得到壳聚糖酶。采用SDS-PAGE凝胶电泳测定分子量为30 ku,全波段扫描结果显示在324 nm处出现最高峰。然后对壳聚糖酶的酶学性质进行研究。结果表明,最适反应温度为55℃,且在一定范围内温度越低,其热稳定性越高;最适反应pH值为5.5,中性条件下酶活性最稳定;在金属离子中Mn~(2+)对其激活作用最明显,其他金属离子对其有抑制作用;该酶具有相对较好的底物特异性。     

纤维素酶提取工艺及酶学性质的研究

[目的]探讨纤维素酶的最佳提取工艺和最佳反应条件。[方法]以里氏木霉Rut C-30为发酵菌种,在30℃、摇床转速170 r/min条件下培养8 d,发酵生产纤维素酶,用盐析技术对粗酶液进行分离纯化,通过正交实验法探讨了纤维素酶的提取工艺条件。并以羧甲基纤维素钠酶活力为指标,对该酶的最佳反应条件和稳定性进行了研究。[结果]纤维素酶的最佳提取条件是:提取时间为16 h、盐析饱和度为70%、pH值为4.8。纤维素酶的最佳反应条件是:pH值为4.8、温度为60℃。酶在pH 3.6~7.0时较稳定,在78℃保温30 min下的残留酶活为50%。[结论]该研究为酶的工业化生产提供参考数据。     

黄曲霉固态发酵麻疯树饼粕产蛋白酶及其酶学性质研究

[目的]利用黄曲霉固态发酵麻疯树饼粕产蛋白酶,研究产酶工艺条件及其酶学性质。[方法]将黄曲霉接种含麻疯树饼粕的固体发酵培养基,采用福林法测定在不同湿度条件、不同碳源或氮源条件以及不同培养时间下所产蛋白酶的活力。饱和硫酸铵法纯化蛋白酶,并测定其在不同催化温度、不同pH条件和不同有机溶剂处理下的活力,分析其催化动力学。[结果]控制相对湿度为50%,向培养基中添加0.10g/ml乳糖和0.02g/ml蛋白胨,30℃下发酵5d,蛋白酶活力最高。蛋白酶的最适催化温度为45℃,最适作用pH值为6.0,最大催化速度Vmax为3333.33μg/min,Km为31.25mg/ml,有机溶剂可以适当提高蛋白酶活力。[结论]利用黄曲霉固态发酵产蛋白酶是利用麻疯树饼粕的有效途径。     

黑曲霉木聚糖酶曲盘发酵及其粗酶性质研究

为研究黑曲霉菌株(Aspergillus niger)XZ-3S曲盘发酵木聚糖酶条件及所产粗酶的性质,采用曲盘(大小φ20cm×4cm)进行固态发酵条件研究,并对所产粗酶进行酶学性质测定。结果表明:在培养基干料100g、初始料水比1∶1.7、初始pH自然状态、相对干物料接种量10%、中间定时翻曲补水和28℃连续培养60h条件下,酶活力最高可达24 380IU/g干曲;粗酶最适反应pH5.0,最适温度50℃;温度低于50℃、pH3.0~8.0的条件下酶较稳定;EDTA(活性物质)、Cu2+、Co2+对酶有明显的激活作用,Pb2+、Mg2+、Fe2+、Mn2+、Ca2+、Fe3+、Al 3+对酶有不同程度的抑制作用。     

溜曲霉M3b产壳聚糖酶的固体发酵工艺优化及酶学性质

为挖掘专一性壳聚糖酶,从多地土壤中筛选出1株高壳聚糖酶活力的真菌M3b,对其进行了形态学观察和18S rDNA序列鉴定,采用单因素试验和正交试验优化固体发酵工艺,研究纯酶的酶学性质。结果显示,菌株M3b为溜曲霉,其最佳产酶发酵条件为：以水为100%计,1%胶体壳聚糖+1%葡萄糖、0.5%硫酸铵、麸皮∶豆粕=6∶10、接种量为10 %、发酵6 d、初始发酵pH 7.0、发酵温度32 ℃。在此条件下酶活力达到20.56 U/mL,是初始发酵条件的221.3%。SDS-PAGE和酶谱分析发现该菌株只产1种壳聚糖酶,分子质量为40 ku。该酶的酶促反应最适pH值为5.5,最适温度为60 ℃,水解产物聚合度≥2。结果表明,采用溜曲霉进行固体发酵可以显著提高壳聚糖酶的酶活力,降低生产成本,纯化后的壳聚糖酶AtChito40酶学性质稳定,耐酸碱,且能有效地降解壳聚糖。     

枯草芽孢杆菌产酶规律及酶学性质研究

[目的]研究浙江建德分离得到的枯草芽孢杆菌淀粉酶的产酶规律和酶学性质。[方法]将分离得到的枯草芽孢杆菌发酵培养,研究其淀粉酶产酶击览律,并研究了温度、pH、金属离子对酶学性质的影响。利用双倒数曲线法获得该酶的米氏常数Km[结果]随着发酵时闻的延长,发酵液中淀粉酶的含量提高。在培养30h时,产酶量达到最高。该淀粉酶的最佳反应温度和pH分别为40℃和7．5。该酶具有一定的熟稳定性,对酸碱条件较敏感。Na^＋、K^＋、Ca^2＋、Mg^2＋对该酶具有激活作用,Pb^2＋、Hg^2＋对该酶具有显著的抑制作用,Cu^2＋的影响不显著。该淀粉酶的米氏常数K为2．31×10^-3mol/L。[结论]该研究对该菌株淀粉酶的开发及工业应用具有较强的指导意义。     

β-葡萄糖苷酶纯化及酶学性质研究

研究了来源于曲霉No.5.1的β-葡萄糖苷酶的纯化和酶学性质。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-chitopearl和Sephadex G-100柱层析得到纯β-葡萄糖苷酶,SDS-PAGE凝胶电泳显示一条带,测得分子量为67.5 kD。该酶最适反应pH6.0,最适反应温度为60℃,在80℃以下、pH3.0~9.0酶活力相对稳定。K 、Na 、Mg2 和Zn2 对酶有激活作用,而Ag 和Fe2 对酶具有明显的抑制作用。该酶对纤维二糖和水杨素的水解能力最强,水解水杨素的Km值为3.09 mmol/L。     

嗜碱菌AL-103果胶酶酶学性质的研究

研究了嗜碱菌AL-103果胶酶酶学性质。经硫酸铵盐析和缓冲液透析,获得粗酶,该酶最适反应温度60℃,最适作用pH6,40℃保温10min酶活基本不损失,在pH7．0～10．5范围内酶蛋白稳定：Li^＋、Ca^2＋和Mg^2＋对酶有激活作用,AL^3＋有抑制作用,Co^2＋、Pb^2＋、Fe^3＋、Mn^2＋和Hg^2＋有强烈抑制作用。     

温度及pH对胞外乳糖酶酶学性质的影响

试验分析了温度、pH对亮色毛霉产胞外乳糖酶酶学性质的影响。结果表明,亮色毛霉所产乳糖酶的最适温度为60℃,属于高温乳糖酶;4℃保存可以提高酶的稳定性,纯酶液的相对酶活性在30d后稍有变化;酶活力最适pH为4.5,pH稳定性试验表明,该酶pH稳定范围在4.0～5.5。     

甜菜块根中蔗糖酶的若干动力学性质

根据蔗糖酶在甜菜块根中存在的形态和最适pH值,可将其分为细胞壁酸性蔗糖酶,可溶性酸性蔗糖酶,细胞壁中性蔗糖酶和可溶性中性蔗糖酶4种。前二种蔗糖酶最适pH值为5.5,后二种为7.5。4种蔗糖酶在测定条件下反应最适温度为35℃,可溶性中性蔗糖酶对温度的稳定性较差。4种蔗糖酶的km值大小依次为24.5、66.7、89.5和49.0mmol L~(-1)。V_(max)值大小依次为0.96、1.66、1.84和1.47mg还原糖mg~(-1)蛋白h~(-1)。本文还研究了抑制剂对酶活性的影响。     

右旋糖苷修饰酵母蔗糖酶条件的筛选及修饰酶性质的研究

以低分子右旋糖苷(Dextran)为修饰剂,选用L16(45)正交试验方案,研究了不同修饰条件对酵母蔗糖酶(Yeast invertase)化学修饰效果的影响以及修饰前后酶的性质变化.结果表明,pH 5.0、20 ℃、反应8 h为最佳的修饰条件.与天然酶相比,修饰酶的酶比活力、糖含量、酶活力回收率分别提高56.7%、35.05%和14.61%,蛋白含量下降22.66%,氨基修饰率为39.55%.酶学性质研究表明,修饰后酶的最适pH在4.0～5.0范围内,最适温度55～60 ℃,在pH 3.5缓冲液中稳定性上升,在pH 6.5缓冲液中稳定性下降,在60 ℃缓冲液中稳定性下降.动力学研究表明,修饰后酶的Km和vmax均上升,光谱分析表明,修饰后酶的构型构象均发生变化.     

米曲霉B60菌株的酶学性质研究

以猪血为底物,对米曲霉所产蛋白酶的酶学性质进行研究,以进一步提高米曲霉B60发酵猪血的性能,为其在生产上的应用提供理论支持。结果表明：用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的中性蛋白酶酶活力高达166 857.13U/g,碱性蛋白酶酶活力为13 142.857U/g;该酶酶解猪血的最佳加酶量为0.4g,最佳酶解时间为8h,最适酶解温度为40℃,最适酶解pH值为10。     

一株产纤维素酶蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及酶学性质初步研究

[目的]筛选高效分泌纤维素酶的细菌,为纤维素资源利用提供理论依据.[方法]以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源,对通过筛选培养基从森林湿泥样品中分离筛选出的细菌,采用刚果红染色、革兰氏染色和生化特性及16S rDNA进行鉴定,并对菌株产酶性质进行初步研究.[结果]获得一株纤维素酶产生菌L-30,该菌株在pH4.8、50℃条件下的酶活力为4.25 U/mL,经鉴定L-30为蜡样芽孢杆菌.酶学性质研究表明,L-30菌株所产纤维素酶最适反应pH为6.0,最适温度为50℃,该条件下酶活力最高,达4.95 U/mL,该酶对CMC-Na具有较强的分解能力;L-30菌株在最佳生长条件下,于接种后48 h即可达到产酶高峰,L-30菌株的产纤维素酶能力能稳定遗传.[结论]分离到的L-30为一株高产纤维素酶蜡样芽孢杆菌,其酶学性质好,具有进一步开发利用的价值.     

碱性脂肪酶高产菌株yz-145的筛选及产酶条件

从蚕茧浸渍腐化水中分离获得一株产碱性脂肪酶菌株,通过紫外线和硫酸二乙酯多次诱变,选育出一株高产菌株yz-145.该菌株经发酵研究表明,其最适培养基为:蚕蛹粉5%,蔗糖1.0%,橄榄油0.5%,(NH4)2SO4 0.5%,MgSO4·7H2O 0.2%,K2HPO4 0.05%.最佳产酶条件:初始pH 9.0～9.5,30℃培养48h,产碱性脂肪酶活力高达1615 U/ml.经5代培养,该菌株产酶活力稳定,并对其酶的性质进行了研究.