龟裂链霉菌（Streptomycesrimosus）原生质体制导与再生条？…

报道了龟裂链霉菌原生质体制备与再生最佳条件和该原生质体对抗生素的抗性结果。在Ｓ生长培养其中加入φ＝１％甘氨酸进行菌丝体培养２４ｈ,原生质体制制备最佳条件为：溶菌酶浓度φ＝３％、     

一株木霉菌SWFC1511原生质体形成及再生条件的研究

研究了一株木霉菌SWFC1511菌株原生质体的制备及再生条件,并观察其原生质体释放过程。结果表明:木霉菌SWFC1511原生质体制备的最佳条件为:菌丝培养20 h后,用比例为1∶3的2%溶菌酶与2%蜗牛酶为酶解液,在35℃下酶解3 h后,原生质体的产量较高。所形成的原生质体在再生培养基1上的再生率较高。     

小单孢菌40027菌株原生质体的形成和再生

通过酶解温度、酶解时间和再生培养基对小单孢菌40027菌株原生质体形成和再生的研究,确定小单孢菌40027菌株原生质体制备条件为37℃酶解60min;原生质体的再生培养基为R-1培养基。     

禾谷镰孢原生质体的形成与再生

研究报道了制备禾谷镰孢（ＦｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍＳｃｈｗ．）原生质体的方法及影响原生质体再生的条件。ＰＤＳ培养液中培养的菌丝和５％绿豆汁中产生的分生孢子，在２８℃下通过蜗牛酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％＋１．５％）酶解，２ｈ开始有原生质体释放，５ｈ左右达释放高峰，后趋于稳定。而以纤维素酶（３％）、溶菌酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）、纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）处理，原生质体形成效果较差。原生质体在ＰＤＡＳ高渗培养基上再生频率较高（２０％～３０％），在ＭＭＳ上再生频率较低，而在ＮＭＳ上原生质体则不能再生。在ＰＤＡＳ中加入ＫＣｌＯ３和ＭＮＮＧ对原生质体再生有一定影响     

水稻纹枯病菌原生质体制备与再生条件的优化

为获得进行水稻纹枯病菌遗传转化所需的高质量原生质体,选用该病菌强致病力菌株GD-118,分别从酶种类、菌龄、酶解时间、酶解温度、酶液pH值和渗透压稳定剂及其浓度6个方面优化了原生质体的制备条件,从酶解时间和渗透压稳定剂及其浓度2个方面优化了原生质体的再生条件。结果表明:优化后的水稻纹枯病菌原生质体制备的最佳条件组合是"纤维素酶+溶菌酶+崩溃酶"组合酶、总酶终质量浓度10mg/mL、菌丝菌龄15h、酶解时间3h、酶解温度35℃、酶液pH5.6、以0.6mol/LMgSO4.7H2O为渗透压稳定剂,此最佳条件组合所制备的原生质体产率高达4.00×107/g;原生质体最佳的再生条件是酶解3h的原生质体在含1.0mol/L甘露醇的再生培养基上26℃时进行培养,在此条件下可获得最佳的再生效果,再生率为39%。     

层出镰孢菌原生质体制备条件的研究

[目的]研究层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)原生质体的最佳条件,建立高效制备层出镰孢菌原生质体制备的方法.[方法]通过对菌丝体菌龄、酶解液组合、酶解反应温度及酶解时间等影响因素进行优化,对层出镰孢菌原生质体的制备条件进行研究.[结果]菌块在CMC液体培养基中25℃培养分生孢子3 d后,过滤离心后转移至YEPD液体培养基中培养12 h,该菌丝最适于层出镰孢菌原生质体的制备;用1.2 mol/L KCl溶液配制含有5 mg/m L裂解酶、25 mg/m L崩溃酶、0.05 mg/m L溶壁酶的酶解液在30℃下对菌丝酶解1.5 h,此时原生质体的数量最大,为2.47×10~9个/m L.原生质体再生培养时,使用40%PTC溶液恢复细胞壁,在TB3液体培养基中30℃过夜培养,离心后与TB3固体培养基混合后倒入平板培养,原生质体再生率可达39.75%.[结论]通过对菌丝体菌龄、酶解液浓度、温度、酶解时间等条件的优化,可提高层出镰孢菌原生质体的产量及再生率,为进一步研究层出镰孢菌致病分子机制提供理论依据.     

苏云金芽孢杆菌原生质体制备与再生研究

主要研究了茵龄、酶浓度、酶解时间和酶解温度对苏云金芽孢杆菌原生质体制备和再生的影响。通过正交试验确定了苏云金芽孢杆菌制备和再生的最佳条件,当酶浓度为1．Omg／mL,酶解时间为80rain,酶解温度为30~C时,原生质体的制备率和再生率达到最高,分别为98．14％和58．14％。     

田七原生质体的制备与培养

本试验通过酶解法制备田七原生质体,经过滤-离心法将纯化后的田七原生质体培养于适宜的培养基中培养.得到-个制备田七原生质体的最佳酶解条件即:采用混合酶(1:1),最佳酶解时间为4小时,即可得到原生质体制备率高、存活率高的酶解条件.     

冬虫夏草无性型原生质体再生条件研究

[目的]优化冬虫夏草原生质体再生条件。[方法]考察纤维素酶浓度、蜗牛酶浓度、两者混合体积配比、酶解温度、酶解时间、菌龄、稳定剂及培养基等条件对冬虫夏草无性型原生质体再生率的影响。[结果]冬虫夏草无性型原生质体再生的最佳条件为：纤维素酶浓度0．5％,蜗牛酶浓度0．5％,纤维素酶与蜗牛酶体积比1：1,酶解温度35℃,酶解时间1．5h,菌龄6d,甘露醇0．5mol,③号再生培养基（蔗糖10g,葡萄糖4g,酵母粉4g,甘露醇0．5mol,pH值6．2,琼脂18g,水加至1000ml）,在该最佳条件下原生质体再生率为0．43％。[结论]优化的冬虫夏草无性型原生质体再生条件简便、合理、可行。     

鸡腿菇原生质体制备与再生研究

以鸡腿菇双核菌丝为材料,利用溶壁酶制备原生质体,采用单因素试验确定最佳条件。结果表明,原生质体产量最高的条件是取菌龄为5 d的液体静置培养的菌丝体,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,在酶解温度30℃、酶浓度20 g/L、菌丝量20 g/L的条件下酶解3 h,制备的原生质体量为2.5×107个/m L。将制备的原生质体稀释并涂布于再生培养基,再生率为10.9%,研究为鸡腿菇原生质体融合及优良品种选育提供研究基础。     

苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究.结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8%+Pectinase 0.5%+PVP 1%+甘露醇0.65 mol/L+MES0.1%;以改良MT+BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+甘露醇0.65 mol/L+Vc 5.0 mg/L+Glu 500 mg/L+CH 100 mg/L+ME 500 mg/L+Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105个/ml,培养1～2天原生质体变形,3～4天第一次分裂,2周分裂3～5次.平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织.鲁加5号和M7均只形成7～10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂.     

高粱红曲菌M-3原生质体制备与再生

通过单因素及正交试验优化,拟建立高粱红曲菌M-3的菌丝高效制备和再生原生质体的优化方法。试验结果表明,在以1.0mol·L~(-1)山梨醇(pH8.0)为高渗透稳定液,以纤维素酶(0.3%)和蜗牛酶(0.3%)为裂解酶的条件下,考查不同酶解时间、酶解温度及酶解pH等单因素对原生质体形成与再生的影响;在单因素试验的基础上,采用正交设计试验确定原生质体制备与再生的最佳工艺参数为:酶解时间2h、pH值为6.0、温度32℃,在此工艺条件下,原生质体形成数为3.000×10~6个·mL~(-1),原生质体原生质体再生率为19.33%(再生菌落数为5.80×10~5个·mL~(-1))。     

原生质体融合技术及其在微生物遗传育种上的应用

原生质体融合技术是微生物遗传育种上一项重要技术,它具有遗传信息传递量大,不受亲缘关系的影响,可有目的地选择亲株以选育理想的融合株,便于操作等优点,在遗传育种中具有广阔的应用前景。本文从原生质体的制备及其影响因子、原生质体融合的促融方法、原生质体融合子的筛选以及融合技术在微生物菌种选育中的应用等方面进行了综述。     

黑木耳原生质体制备及再生的研究

文章用浓度为0.6mol·L-1的MgSO4·7H2O渗透压稳定剂配制浓度为1.5%的溶壁酶,在pH6.0,30℃条件下酶解3h,黑木耳原生质体产量达到最高值为9.2×106个·mL-1。最适合原生质体再生的培养基配方为:马铃薯20%,葡萄糖2%,MgSO4·7H2O0.15%,蛋白胨0.1%,KH2PO40.1%,琼脂2%,甘露醇0.6mol·L-1,在此培养基中的再生率为33.09%。     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

高活力苹果酒酵母原生质体形成与再生条件研究

为了优化高活力苹果酒酵母原生质体的形成与再生条件,利用酶解和超声波细胞脱壁两种方法,全面考察了菌龄、酶质量浓度、酶解温度、酶解时间、超声波功率、超声波温度、超声波作用时间等因素对原生质体形成和再生的影响,并对两种方法的脱壁效果进行了比较。结果表明:①超声波法脱壁效果优于酶解法;②优化的超声波法细胞脱壁的最佳条件为:菌龄8 h,功率240 W,温度30℃,超声波作用时间30 min;③采用优化的原生质体形成与再生条件参数时,原生质体形成率达到95.21%,再生率达到30.03%。通过试验可知,超声波法较酶解法操作简单,原生质体的形成率和再生率较酶解法均有一定的提高。     

拟布里特班克虫草(Cordyceps brittlebankisoides Liu & Liang)原生质体形成及再生

研究了拟布里特班克虫草——金龟子绿僵菌大孢变种原生质体的分离制备条件，以10～15mg／mL溶壁酶为酶液、0．7mol／L NaCl为渗压稳定剂，30℃处理1．5h是其原生质体最适合的分离条件。对原生质体释放和再生的形态学过程进行了观察和描述。     

木霉菌T23菌株原生质体制备及再生研究

本文研究了木霉菌T23菌株原生质体制备及再生条件,并对原生质体的释放和再生过程进行了系统的观察。结果表明,木霉菌T23菌株原生质体制备的最佳条件:菌龄为24h,裂解酶采用崩溃酶,酶浓度为15mg.ml-1,酶解时间在3～4h之间,酶解温度以30～35℃时最为适合。观察到木霉菌以菌丝断裂方式释放原生质体,以产生不规则突出的方式进行再生。     

钙离子与植物胞吐作用

本文总结了Ca2+在花粉管、胚芽鞘原生质体、糊粉层原生质体、根冠原生质体等植物细胞胞吐过程中的调节作用,Rop GTPases与Ca2+、annexins与Ca2+在胞吐中的相互协调作用,以及植物细胞中存在的两条分泌途径。