应用双水相萃取技术分离纯化苏云金杆菌库斯塔克亚种和苏云金亚种的β-外毒素

应用双水相萃取技术在PEG15％、K2HPO410％条件下,对苏云金杆菌库斯塔克亚种（Bacillus thuringiensis subsp．kurstaki）和苏云金亚种（Bacillus thuringiensis subsp．thuringiensis）β-外毒素进行分离和初步纯化,提取纯化的β-外毒素用紫外分光光度计检测,同时进行了热稳定性试验、生物活性检测和生物毒性检测。结果表明：菌种1．1751在15％PEG和10％K2HPO4的双水相分离系统中具有较好的分离效果,采用两水相萃取技术可以分离得到较高浓度的β-外毒素,而且β-外毒素保持良好的活性。     

聚乙二醇/K_2HPO_4双水相法提取牦牛血中的IgG

【目的】探讨牦牛血中IgG的最佳提取工艺.【方法】以牦牛血液为原料,在单因素试验的基础上,选取聚乙二醇浓度、K2HPO4浓度、NaCl浓度和pH为自变量,IgG的含量为响应值,根据响应面Box-Behnken试验设计原理,采用四因子三水平的分析法模拟得到二次多项式回归方程的预测模型.优化聚乙二醇/K2HPO4双水相法提取牦牛血中IgG的工艺条件.【结果】聚乙二醇/K2HPO4双水相法提取牦牛血中IgG的最佳工艺条件为聚乙二醇13%(w/w)、K2HPO417%(w/w)、NaCl 11%(w/w)、pH 6.0,在此条件下IgG质量浓度达13.82mg/mL,与预测值14.04mg/mL的相对误差为1.59%.【结论】回归模型具有高度显著性,方程对试验拟合较好,可以对IgG的含量进行很好的分析和预测;各因子对IgG含量影响大小依次是PEG浓度NaCl浓度K2HPO4浓度pH;     

利用EOPO/盐温度诱导双水相体系分离纯化苦参碱的研究

[目的]研究苦参碱在温度诱导的EOPO/无机盐体系中的分配行为。[方法]利用紫外分光光度计对苦参碱进行定性定量测量。利用双水相分配技术研究不同的EOPO的分子量（SDP28、SDP30,SDP35）、不同种类的盐（KH2PO4、K2HPO4.3H2O、Na2SO4、NH4C l）对双水相分配的影响,并利用正交试验确定最佳的分离纯化的条件。[结果]苦参碱在EOPO 3种分子量和3种盐温度诱导双水相的分配特性研究表明,EOPO分子量为SDP28时,最大收率为77.59%,盐为K2HPO4时,最大收率为77.59%,分离效果最好。L9（33）正交试验研究表明,最佳的分离条件为：K2HPO4用量2 g;水量10 m l;SDP28用量15 m l时,最大收率为86.39%。[结论]盐的种类对双水相的分配行为影响最大。     

响应面法优化双水相萃取污水中铅离子工艺研究

利用聚乙二醇(PEG)600和(NH_4)_2SO_4双水相系统结合原子吸收光谱法对铅污染模拟的水体进行萃取工艺优化研究。在研究PEG600-(NH4)2SO4-H2O双水相体系中各单因素对铅离子的萃取率的影响基础上,再用响应面试验优化双水相萃取污水中铅的最佳萃取工艺。最终得到的最佳工艺为:PEG600体积分数为40.25%、(NH_4)_2SO_4质量浓度为0.17g·mL~(-1)、pH为2.55、温度为40.28℃,在此工艺条件下的萃取率可达87.26%。     

双水相体系分离纯化杜仲总黄酮和绿原酸的研究

采用双水相萃取法辅助醇提法来提取纯化杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)中的总黄酮和绿原酸。通过单因素试验和Box-Behnken响应面法确定最佳提取工艺,利用乙醇/无机盐双水相体系将杜仲提取物中的总黄酮和绿原酸进行有效分离。结果表明,在最佳提取条件下,杜仲总黄酮的最佳双水相萃取体系为乙醇的质量分数50%、K_2HPO_4的质量分数20%,此时,相比R为2.93,分配比D为10.35,杜仲总黄酮的萃取率达77.94%。绿原酸的最佳双水相萃取体系为乙醇的质量分数60%、K_2HPO_4的质量分数20%,此时,相比R为3.43,分配比D为12.32,杜仲绿原酸的萃取率达78.22%。开发条件温和、成相稳定、用时较短的双水相萃取技术,对杜仲的开发利用有重要意义。     

EtOH/K2HPO4双水相体系萃取分离绞股蓝中的总黄酮

笔者采用EtOH/NaCl、EtOH/Na_2CO_3、EtOH/KBrO_3、EtOH/K_2HPO_4和EtOH/(NH_4)_2SO_4 5种双水相体系研究绞股蓝提取物中总黄酮的分离方法。采用相平衡原理分析绞股蓝总黄酮在不同体系中的溶解特征,确定萃取体系的组成,实现绞股蓝提取物中黄酮和皂苷的分离。得到最佳萃取体系为:EtOH体积分数52.49%,K_2HPO_4质量分数19.01%,此时相比R为2.84,分配系数K为19.87,绞股蓝总黄酮的得率为98.26%。开发条件温和、成相稳定、用时较短的双水相萃取方法对拓展绞股蓝的应用领域和工业化生产有重要意义。     

高良姜中黄酮类化合物的提取及精制研究靠

[目的]探索提取高良姜中黄酮类化合物的最佳方法.[方法]通过单因素试验及正交试验确定乙醇浸提高良姜中黄酮类化合物的最佳提取条件,并利用双水相体系萃取精制黄酮类化合物.[结果]高良姜中黄酮类化合物提取工艺的最佳单因素水平为提取温度70 ℃,溶剂浓度40%,固液比1∶300,提取时间4 h.正交试验结果显示影响高良姜中黄酮类化合物提取的各因素的顺序为固液比>温度>提取时间>酶用量>乙醇浓度.最佳提取条件为固液比1∶450,温度80 ℃,提取时间5 h,酶用量3%,乙醇浓度50%.最佳双水相萃取条件为:PEG浓度24%,硫酸铵浓度12%,温度25 ℃,pH值7.00.[结论]试验结果可为高良姜中黄酮类化合物的提取分离及纯化提供技术参数.     

星豹蛛乙酰胆碱酯酶活性测定条件的优化

为了进一步研究星豹蛛乙酰胆碱酯酶的生物活性,利用正交试验研究了反应体系的pH值、反应时间、酶浓度、反应温度和底物浓度5个因素对测定星豹蛛(Pardosa astrigera L.Koch)头胸部乙酰胆碱酯酶活性的影响,以优化酶活性测定的最适条件。对试验结果进行极差和方差分析,确定了星豹蛛头胸部乙酰胆碱酯酶的最适反应条件是:酶浓度为12 g.L-1;底物浓度为0.6 mmol.L-1;反应体系pH值为7.0;反应温度为30℃;反应时间为5 min。     

双水相体系萃取油楠种子总皂苷的研究

利用双水相萃取技术提取分离油楠种子中的总皂苷,以乙醇/硫酸铵为双水相萃取体系,研究乙醇质量分数、硫酸铵质量分数、p H值、温度等因素对萃取效果的影响。结果表明:在乙醇质量分数为30%,硫酸铵质量分数为20%,p H6.0,温度为30℃的萃取条件下,油楠总皂苷在两相的分配系数为12.60,回收率为94.8%。该方法可用于油楠种子中总皂苷的提取分离。     

双液相萃取离子交换层析法纯化猪硫酸软骨

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双液相萃取-离子层析法纯化猪硫酸软骨素,红外光谱法测定结构,咔唑分光光度法测定含量.以PEG的相对分子质量和质量分数、(NH4)2SO4的质量分数、pH值和萃取次数为考察因素,以猪硫酸软骨素的回收率和纯度为考察指标,正交设计法优化双液相萃取条件.IRC50离子交换树脂对萃取液纯化,红外光谱法和咔唑分光光度法鉴定纯化后猪硫酸软骨素的含量和结构.最佳纯化条件为:PEG相对分子量为4 000,质量分数为30%,(NH4)2SO4的质量分数为26%,pH值为10,萃取3次.萃取样品经IRC50离子交换树脂纯化后,质量浓度在0～250mg/L范围内线性关系良好,相关系数r=0.999 7,样品含量为90.49%,相对标准偏差为0.58%.红外吸收光谱比较纯化后猪硫酸软骨素和标准品硫酸软骨素-A,其特征吸收峰均在3 400,1 620,1 560,1 240,860cm-1处.该方法精确度和准确度都较高,可用于猪硫酸软骨素的纯化.     

沼泽红假单胞菌产类胡萝卜素发酵条件优化

利用单因素试验与正交试验的方法,对沼泽红假单胞菌B9(Rhodopsedomonas palustris B9)产类胡萝卜素培养基和培养条件进行优化。结果表明:最佳培养基成分为:KH2PO40.6g,K2HPO40.9g,酵母膏1.5 g,蛋白胨2.3g,MgSO40.2g,CaCl20.3g,NaCl0.5g,最佳培养条件为:接种量为8%,温度为26℃,pH值为自然pH值。培养7d后,类胡萝卜素产量可达2.863mg·g-1(以干重计)。     

聚乙二醇/硫酸铵双液相萃取法提取三七总皂苷的研究

[目的]采用聚乙二醇/硫酸铵双液相体系对三七总皂苷提取方法进行研究。[方法]通过单因素试验考察了聚乙二醇分子量、聚乙二醇浓度、硫酸铵浓度和pH值对三七总皂苷相比、分配系数和回收率的影响。[结果]最佳萃取工艺条件为：聚乙二醇分子量6000,聚乙二醇质量分数24%,硫酸铵质量分数9%,pH值4.5。在此最优条件下,三七总皂苷平均回收率为88.50%,平均分配系数为4.04。[结论]该方法操作简便,成本低,耗时少,分离效果好。     

天女木兰种子蛋白双向电泳体系的建立

【目的】探索一套适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系,为研究其种子萌发过程中的蛋白表达差异奠定基础。【方法】比较蛋白的不同提取方法(酚提取法、三氯乙酸-丙酮-酚提取法、三氯乙酸-丙酮法和Tris-HCl法)、IPG胶条pH梯度(pH3～11NL、pH3～10和pH4～7)、裂解液中的尿素浓度(6,7,8,9mol/L)和分离胶浓度(10%和12.5%)等条件,对天女木兰种子蛋白双向电泳结果的影响,筛选适宜的双向电泳条件。【结果】以Tris-HCl法提取种子蛋白,在IPG胶条pH为4～7、裂解液中尿素浓度为9mol/L、分离胶浓度为12.5%的条件下,可以获得分辨率高、背景清晰、重复性好的天女木兰种子蛋白双向电泳图谱。【结论】建立了适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系。     

响应面法优化大肠杆菌CD-2产偶氮还原酶培养基的条件

在摇瓶条件下,对大肠杆菌CD-2发酵生产过程中的主要培养基组成对产偶氮还原酶的影响进行了研究。根据响应面法,以单因子试验结果为基础,利用Plackett-Burma设计对影响E.coli CD-2产偶氮还原酶的相关因子进行了评估,并筛选出具有显著效应的3个因子:pH值、MgCl2、Na2HPO4。用最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用design expert 7.0统计软件的Box-Behnken设计以及响应面分析法,确定E.coli CD-2优化后的最佳培养基组成:甘露醇2 g.L-1、氯化铵3 g.L-1、接菌量5%、pH值为6.5、KH2PO42 g.L-1、Na2HPO46 g.L-1、MgCl20.99 g.L-1,优化后的酶活达到2.429 U.mL-1,是初始酶活的2.85倍。从而增强了E.coli CD-2所产的偶氮还原酶实际应用于污水处理的能力。     

龙眼果醋酒精发酵条件的优化

在单因素的基础上探讨了温度、氮源、酵母接种量及龙眼汁含糖量和初始pH对酒精发酵的影响,以龙眼汁含糖量、温度和酵母接种量3个影响酒精发酵的主要因素设计3个因素5个水平的正交试验并进行了优化.结果表明,按固形物含量∶(NH4)2HPO4=900∶1的比例添加(NH4)2HPO4,龙眼汁初始pH为4-5时的最佳发酵条件为:温度27℃,龙眼汁含糖量20%,酵母接种量0.1%,酒精发酵后,酒精含量高达11.6%,VC含量为0.268 mg.mL-1,氨基酸态氮含量为1.13 mg.mL-1.     

营养成分对维氏固氮菌合成褐藻酸钠的影响

报道了各种营养成分对维氏固氮菌(Azotobacter vinelandii)产褐藻酸钠及对褐藻酸钠中甘露糖醛酸与古洛糖醛酸比值(M/G)的影响。认为调节培养基中的磷酸氢二钾、酵母膏至最佳浓度,可使蔗糖合成褐藻酸钠的转化率达40％以上。培养基中磷酸氢二钾、钼酸钠、硫酸钙的浓度显著影响细菌褐藻酸钠的M/G值。     

枯草杆菌B_s501抗稻瘟病菌条件优化

[目的]提高枯草芽孢杆菌的拮抗作用。[方法]通过正交试验和单因素试验研究了枯草杆菌Bs501的发酵基础培养基和最适发酵条件,明确了几丁质的添加量及添加时机,分析了二价金属离子对枯草杆菌发酵液的影响。[结果]枯草杆菌在LB培养基上培养12 h达到对数生长末期,随后生长曲线快速下降,56 h出现小波峰。各因子对枯草杆菌Bs501生长量的影响为蛋白胨>蔗糖>酵母膏>K2HPO4,它们对枯草杆菌Bs501的抑菌活性为蔗糖>蛋白胨>酵母膏>K2HPO4。最佳基础培养基确定为3%蔗糖、1%蛋白胨、0.5%酵母膏0、.45%K2HPO4。最适发酵条件为:起始pH值7.0、培养温度30℃、发酵时间48 h。培养12 h添加0.5%几丁质诱导枯草芽孢杆菌Bs501产生拮抗物质的效果最显著。Ca2+可显著提高发酵液的抑菌活性。[结论]该研究为枯草芽孢杆菌的工业深层发酵提供了技术参考。     

反相高效液相色谱法测定小鼠心肌中ATP、ADP和AMP含量及分析

建立同时测定小鼠心肌组织中ATP（三磷酸腺苷）、ADP（二磷酸腺苷）和AMP（一磷酸腺苷）含量的高效液相色谱方法。采用反相高效液相色谱模式,使用SepaxBio-C18（250ram×4．6mmID,μm,200A）色谱柱,以60mmoL·L^-1磷酸二氢钾、60mmoL·L^-1磷酸氢二钾组成的缓冲液（pH=6．68）为流动相等比洗脱,流速：O．6mL·min^-1紫外检测波长为259Nm,带宽为30nm。三种目标组分在10min内实现基线分离,平均加标回收率均在99％以上,线性范围为1-200mg·L^-1检出限分别为20、20、25ng。该法简便、准确,易于移植。     

复合酶法提取南瓜多糖及其抗氧化性的研究

[目的]优化复合酶法提取南瓜多糖的工艺条件,研究南瓜多糖的抗氧化性。[方法]采用单因素试验设计研究了不同提取时间、温度、料液比、pH值对南瓜多糖提取率的影响,并通过正交试验确定了提取南瓜多糖的最佳复合酶配比和最佳提取条件。采用水杨酸法检测南瓜多糖对羟基自由基（.OH）和改进的邻苯酚自氧化法检测其对超氧阴离子自由基（O-2）的清除效果。[结果]当纤维素酶的浓度为1.0%、果胶酶为1.5%、木瓜蛋白酶为1.0%时,以及温度为40℃、pH=4.6、料液比为1∶30、提取时间为30 m in的条件下南瓜多糖的提取率最高;南瓜多糖对.OH具有较好的清除效果,对O-2有部分清除作用。[结论]该研究为南瓜多糖的研究及应用提供了基础资料。     

几种离子对豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶活性和最适PH值的影响

在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ８．０的１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｃｉｎｅ缓冲液中，当离子浓度＜１５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｋ＋和Ｎａ＋离子是豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶（ＡＳＡＬ）的激活剂，其最适浓度约为７５ｍｍｏｌ／Ｌ，可分别提高酶活性４０％和３５％。Ｍｇ２＋离子是ＡＳＡＬ的抑制剂，能拮抗Ｋ＋和Ｎａ＋离子的激活效应。ＨＰＯ二４离子可显著降低酶活性，抑制效应与ＨＰＯ二４离子浓度呈正相关。在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ６．６～８．０的１００ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液中，ＡＳＡＬ的最适ｐＨ值约为７．４，而在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ７．４～８．６的Ｔｒｉｃｉｎｅ缓冲液中，ＡＳＡＬ的最适ｐＨ值约为８．２。