罗非鱼肝脏乙酰胆碱酯酶的双水相萃取

乙酰胆碱酯酶是监测环境中有机磷和氨基甲酸酯类农药的重要靶标物质.应用聚乙二醇(PEG)/磷酸氢二钾(K2HPO4)双水相体系对罗非鱼肝脏乙酰胆碱酯酶的萃取分离进行了研究.采用单因素试验,探讨了PEG1000的质量分数、K2HPO4的质量分数、pH值及NaCl的质量分数对酶萃取的影响,并通过正交试验进一步优化萃取条件.结果表明:K2HPO4质量分数、PEG质量分数、pH值对酶的萃取影响最大.室温下在K2HPO4质量分数为15.0％、PEG1000质量分数为22.0％、pH值为7.0的双水相体系中,酶的分配系数最大、可达5.65,萃取率为72％.放大试验结果表明,该双水相体系对乙酰胆碱酯酶的萃取效果比较稳定,是提取分离乙酰胆碱酯酶的一种新方法.     

K2HPO4对烟草抗赤星病的诱导作用

[目的]为研究K2HPO4诱导寄主植物产生抗病性的机理提供参考。[方法]分别用10、20、30、40、50mmol/LK2HPO4处理烟草1、3、5、7、9d后对烟草接种赤星病菌,研究不同处理烟草赤星病的发生情况。[结果]10～50mmol/LK2HPO4诱导处理后,烟草赤星病的病情指数分别为8.27、4.54、5.38、5.76、7.01,5个处理的诱导抗病效果分别为33.47%、63.48%、56.72%、53.66%、43.60%;K2HPO4诱导处理后1d接种即可使烟草产生抗性,诱导处理后3d接种的诱导抗病效果最好,达62.92%;K2HPO4诱导烟草产生的赤星病抗性具有系统性。[结论]K2HPO4可有效诱导烟草产生赤星病抗性,且其最佳使用浓度为20mmol/L。     

高取代度魔芋葡甘聚糖磷酸酯的干法制备

[目的]研究高取代度魔芋葡甘聚糖磷酸酯的干法制备,为其多糖衍生物实际应用于絮凝、离子交换等领域提供参考。[方法]以细化的魔芋粉为原料,以NaH2PO4和Na2HPO4混合物为磷酸酯化试剂,在干法条件下,制备魔芋葡甘聚糖磷酸酯,并采用正交试验法优化魔芋葡甘聚糖磷酸酯最佳工艺。[结果]正交试验结果袁明,影响魔芋葡甘聚糖磷酸酯取代度因素次序依次为磷酸盐用量〉反应温度〉反应时间〉磷酸盐配比〉催化剂用量〉pH值。制备高取代度魔芋葡甘聚糖磷酸酯的最佳工艺条件：磷酸盐用量为3．50％,反应温度为170℃,反应时间为4h,NaH2PO4和Na2HPO4摩尔比为1：2,催化剂用量为3．00％,pH值为4．00;魔芋葡甘聚糖磷酸酯取代度达0．17。[结论]该方法获得较高取代度的魔芋葡甘聚糖磷酸酯可以应用于实际生产。     

枯草杆菌B_s501抗稻瘟病菌条件优化

[目的]提高枯草芽孢杆菌的拮抗作用。[方法]通过正交试验和单因素试验研究了枯草杆菌Bs501的发酵基础培养基和最适发酵条件,明确了几丁质的添加量及添加时机,分析了二价金属离子对枯草杆菌发酵液的影响。[结果]枯草杆菌在LB培养基上培养12 h达到对数生长末期,随后生长曲线快速下降,56 h出现小波峰。各因子对枯草杆菌Bs501生长量的影响为蛋白胨>蔗糖>酵母膏>K2HPO4,它们对枯草杆菌Bs501的抑菌活性为蔗糖>蛋白胨>酵母膏>K2HPO4。最佳基础培养基确定为3%蔗糖、1%蛋白胨、0.5%酵母膏0、.45%K2HPO4。最适发酵条件为:起始pH值7.0、培养温度30℃、发酵时间48 h。培养12 h添加0.5%几丁质诱导枯草芽孢杆菌Bs501产生拮抗物质的效果最显著。Ca2+可显著提高发酵液的抑菌活性。[结论]该研究为枯草芽孢杆菌的工业深层发酵提供了技术参考。     

K2HPO4对辣椒抗白粉病的诱导效应

采用磷酸氢二钾（K2HPO4）处理辣椒后,接种辣椒白粉病菌Leveillula taurica（Lev．）Arn,以研究K2HPO4诱发辣椒对白粉病产生抗病性的能力。结果表明,10～50mmol／L K2HPO4均有明显的诱导效果,其中20nmol／L K2HPO4处理产生的诱导抗病性最显著,病情指数由对照的10．53降至4．62,发病率由57．89％下降到22．22％,诱导效果为56．02％。20mmol／L K2HPO4诱导处理辣椒植株后3d表现出最佳诱导抗性,其诱导效果为57．61％;K2HPO4还能有效诱导辣椒对白粉病产生系统抗性。     

高良姜中黄酮类化合物的提取及精制研究

[目的]探索提取高良姜中黄酮类化合物的最佳方法。[方法]通过单因素试验及正交试验确定乙醇浸提高良姜中黄酮类化合物的最佳提取条件,并利用双水相体系萃取精制黄酮类化合物。[结果]高良姜中黄酮类化合物提取工艺的最佳单因素水平为提取温度70℃,溶剂浓度40%,固液比1∶300,提取时间4 h。正交试验结果显示影响高良姜中黄酮类化合物提取的各因素的顺序为固液比>温度>提取时间>酶用量>乙醇浓度。最佳提取条件为固液比1∶450,温度80℃,提取时间5 h,酶用量3%,乙醇浓度50%。最佳双水相萃取条件为:PEG浓度24%,硫酸铵浓度12%,温度25℃,pH值7.00。[结论]试验结果可为高良姜中黄酮类化合物的提取分离及纯化提供技术参数。     

丙醇-硫酸铵双水相体系集成提取桑叶中植物多酚的研究

[目的]为双水相技术的应用和桑叶开发提供依据。[方法]将桑叶粉碎,用石油醚超声波提取30 min过滤,滤渣中加入丙醇与水混合溶液60 ml和13.2 g的硫酸铵形成双水相体系,以超声提取植物多酚,测定其中植物多酚含量,计算植物多酚得率。[结果]在丙醇-水双水相体系中,当(NH4)2SO4用量为0.30 g/ml,醇-水比为0.6时,可获得稳定的双水相和较高植物多酚得率。超声时间达20 min时,桑叶植物多酚得率达到最大。该法对桑叶中植物多酚的提取率为1.83%,提取物植物多酚含量为24.1%,明显高于回流提取法。[结论]超声波与丙醇-硫酸铵双水相体系耦合提取桑叶中的植物多酚,可缩短提取时间、提高得率,降低提取温度,有利于热敏成分的分离,获得高纯度高活性的生物活性物质。     

K2HPO4诱导黄瓜抗炭疽病研究

研究了磷酸盐(K2HPO4)诱导黄瓜对黄瓜炭疽病(Colletotrichumlagenarium)的抗病性表现。结果表明,50mmol/L的K2HPO4有较好的诱导效果,诱导效果可达57.81%,并于诱导处理后第3天表现出最佳诱导抗性;K2HPO4诱导黄瓜对炭疽病的抗性具有系统性;1~100mmol/L的K2HPO4对炭疽菌菌丝生长无抑制作用,但50mmol/L以上浓度可抑制孢子萌发。     

聚乙二醇/K_2HPO_4双水相法提取牦牛血中的IgG

【目的】探讨牦牛血中IgG的最佳提取工艺.【方法】以牦牛血液为原料,在单因素试验的基础上,选取聚乙二醇浓度、K2HPO4浓度、NaCl浓度和pH为自变量,IgG的含量为响应值,根据响应面Box-Behnken试验设计原理,采用四因子三水平的分析法模拟得到二次多项式回归方程的预测模型.优化聚乙二醇/K2HPO4双水相法提取牦牛血中IgG的工艺条件.【结果】聚乙二醇/K2HPO4双水相法提取牦牛血中IgG的最佳工艺条件为聚乙二醇13%(w/w)、K2HPO417%(w/w)、NaCl 11%(w/w)、pH 6.0,在此条件下IgG质量浓度达13.82mg/mL,与预测值14.04mg/mL的相对误差为1.59%.【结论】回归模型具有高度显著性,方程对试验拟合较好,可以对IgG的含量进行很好的分析和预测;各因子对IgG含量影响大小依次是PEG浓度NaCl浓度K2HPO4浓度pH;     

丝状真菌的混合菌群降解原油的条件与效果

[目的]优化丝状真菌混合菌群降解原油的环境条件。[方法]从原油污染的土壤和海水中分离并筛选到对原油降解率较高的丝状真菌菌株,由S-3（HyphochytriumZopf）、T-1（Dictyuchus leitgeb）和T-2（Pythiwm pringsheim）构建混合菌群X3,通过单因素试验和正交试验确定菌群降解原油的最佳环境条件以及3种菌株不同接种比例对原油降解的影响效果。[结果]单因素试验结果表明,菌群X3的最适氮源为（NH4）2SO4,最适磷源为K2HPO4,最适pH值范围为6.0～7.0,最适摇床转速130～195 r/min。正交试验表明,S-3、T-1和T-2菌株的最适接种比例为1∶0.4∶1,优化后的最佳原油降解条件为：（NH4）2SO41.0 g/L、K2HPO41.5 g/L、pH值6.0、接种量0.5%,原油浓度1.25 g/L。在对原油污染的土壤和海水进行的室内修复试验中,X3菌群对原油的降解率分别达到72%和66%。[结论]混合菌群X3在石油污染生物修复中具有实际应用价值。     

枯草芽孢杆菌生防菌产孢条件的优化

[目的]探讨枯草芽孢杆菌生防菌的最优产孢条件。[方法]通过单因素试验及正交试验设计对枯草芽孢杆菌发酵培养基和发酵条件进行了优化。[结果]枯草芽孢杆菌的优化培养基为:葡萄糖1.500%,淀粉1.000%,花生饼1.500%,MnSO4.H2O 0.005%,无水MgSO40.050%,KH2PO40.150%,K2HPO4.3H2O 0.300%,CaCO30.050%;最适培养条件为:最佳移种时间18～20 h,温度37℃,pH7.5,转速250 r/min,接种量10%。[结论]为提高枯草芽孢杆菌的芽孢产量及降低生产成本提供了参考。     

铆钉菇菌丝体液体培养条件及产胞外多糖的研究

[目的]为食用菌液体培养和胞外多糖的研究提供基础。[方法]研究铆钉菇菌丝体的最佳液体培养条件,并对其产胞外多糖的情况进行测定。[结果]铆钉菇菌丝体深层发酵适宜的培养基组成为:蔗糖20 g/L、酵母浸膏2 g/L、K2HPO40.5 g/L、MgSO40.5g/L、Vc 0.001 g/L,适宜培养温度28℃,pH值7.0。铆钉菇菌丝体液体培养7 d,菌丝体干重为28.0 g/L,胞外多糖产量为3.27 g/L。[结论]铆钉菇菌丝体液体培养可很好地生长,并产生较多的胞外多糖。     

黑曲霉固态发酵豆粕的工艺条件研究

[目的]优化黑曲霉（Aspergillus oryzae）固态发酵豆粕的培养条件。[方法]采用单因素试验考察黑曲霉固态发酵豆粕的影响因素,建立优化的发酵工艺。[结果]确定的黑曲霉固态发酵豆粕的培养条件为：当固态物料中含有10%麸皮,9%玉米粉,1%葡萄糖及0.15%K2HPO4和0.01%MgSO4时,在28℃恒温条件下培养48~72 h,每隔6 h翻料1次,大豆肽含量最高可达6.159 mg/g。[结论]该研究可以为大豆肽的发酵法生产提供参考。     

可得然胶高产菌株的亚硝基胍诱变育种及其发酵条件的优化

[目的]研究用亚硝基胍(NTG)对产可得然胶菌株进行诱变育种及发酵条件优化,为可得然胶产量提升的研究提供参考。[方法]以土壤杆菌HS615(Agrobacterium sp.)为出发菌株,通过NTG诱变筛选高产菌株,再利用单因素和正交试验设计优化发酵培养基,提高得率。[结果]根据致死率确定了NTG的诱变条件为0.5 mg/mL,NTG处理30 min。其次根据菌落颜色和大小确定了初筛平板培养基为1.0%葡萄糖,0.2%酵母粉,0.05%苯胺蓝,初始pH为7.0。经过NTG诱变得到1株可得然胶得率比出发菌株高11.79%的高产菌株。单因素和正交试验设计优化发酵培养基成分为11.0%蔗糖,0.3%玉米浆,0.2%KH_2PO_4,0.2%K2HPO4,0.2%NH_4Cl,0.2%CaCO_3,0.1%MgSO_4·7H_2O,此时可得然胶得率为5.67%,比优化前提高了6.78%,比初始产量提高了19.37%。[结论]该研究可为可得然胶高产菌株筛选及发酵条件优化提供参考依据。     

克雷伯氏菌胞外多糖发酵条件的优化研究

[目的]对克雷伯氏菌（Klebsiella sp.）K13胞外多糖的发酵条件进行优化。[方法]通过单因素试验和正交试验对培养条件和培养基组成进行优化。[结果]胞外多糖制备的优化培养基组成为：10×盐溶液（含Na2HPO4 100.00 g/L,FeSO4.7H2O 0.01 g/L,MgSO4.7H2O 2.00 g/L,CaCl2.2H2O 0.01 g/L,KH2PO4 30.00 g/L,K2SO4 10.00 g/L,NaCl 10.00 g/L）,葡萄糖30.00 g/L,蛋白胨0.50 g/L,牛肉膏0.50 g/L,油酸1.50 g/L。最佳发酵参数为：初始pH 7.0,发酵温度24℃,接种量10%,装液量200 ml/500 ml,培养时间50 h。优化后,其胞外多糖产量可达6.70 g/L。[结论]该研究可以为后期批量制备新型生物寡糖奠定技术基础。     

嗜热纤维素分解菌TH3-9固体发酵产纤维素酶条件初步研究

[目的]探讨嗜热侧孢霉TH3-9突变株固体发酵产纤维素酶的最佳条件。[方法]采用单因和正交试验对嗜热侧孢霉TH3-9突变株固体发酵产纤维素酶条件进行研究,并测定CMC酶和滤纸酶(FPA)活力。[结果]单因子试验表明,该突变株产CMC酶和FPA酶的最适条件是:碳源为麸皮+甘蔗渣,氮源为(NH4)2SO4,培养温度45℃,培养时间3 d,起始pH值5.5,含水量60%。正交试验表明,最适产酶培养基为:麸皮+甘蔗渣(1∶2)40 g,(NH4)2SO41.0 g,K2HPO40.1 g,MgSO4.7H2O 0.03 g,含水量60%,pH值5.5;在45℃下培养3 d后测得的CMC酶和FPA酶活力最高,分别达832.56和70.38 IU。[结论]该突变株在高温下能利用廉价天然纤维素类物质生产纤维素酶。     

酶法水解螺旋藻蛋白研究

[目的]研究木瓜蛋白酶对螺旋藻蛋白的水解作用。[方法]采用正交试验设计分析温度、酶浓度、pH值、水解时间对水解度的影响,利用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25层析测定螺旋藻多肽分子量。[结果]木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白的最适宜工艺参数为:温度55℃,酶与底物比0.4%,时间3 h,pH值6.0。[结论]当水解度为82.6%时,2个螺旋藻多肽洗脱峰的分子量分别为2 992和231 Da。