大血藤RAPD条件的优化

在进行大血藤遗传多样分析时,首先要建立大血藤RAPD反应优化体系,有必要就反应条件进行探索。以改进SDS法抽提藤本药用植物大血藤叶片总DNA,进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析,分别测试了镁离子、dNTP、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量和牛血清白蛋白浓度对反应结果的影响。通过各因子的组合研究,得出大血藤RAPD分析较适宜的扩增条件是:15μLPCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10mmol·L-1Tris·HClpH9 0,50mmol·L-1KCl,0 1%TritonX 100,1 5mmol·L-1MgCl2);25 01×10-9mol·s-1Taq酶(上海华美公司);10ng模板DNA;15pmol引物(上海Sangon公司);2g·L-1BSA;dATP,dCTP,dGTP和dTTP各0 15mmol·L-1。图4表2参8     

余甘子基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以余甘子叶片为材料,研究了余甘子基因组DNA提取方法及RAPD反应条件.结果表明,采用改良的SDS方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析.在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:0.6mmol·L-1Mg2+、500-600μmol·L-1dNTP、300nmol·L-1随机引物、25ngDNA、1.00-1.25UTaqDNA聚合酶.     

鼠尾草属植物基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化.结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为20μl反应体系中,10×buffer 2.0μl,模板DNA 20 ng,Mg 浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U.扩增反应程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1main,72℃延伸2main;40个循环;72℃后延伸10main,4℃保存.     

基因组DNA的提取及RAPD条件优化

提取了木奈基因组 DNA,并以其为模板对影响 RAPD扩增的重要参数进行优化试验 ,以期建立木奈 RAPD反应的优化体系 .结果表明 ,PCR扩增体系最佳条件是 :2 0 μL体积中 ,2 0 0 μmol·L- 1 d NTP、2 .5 mmol· L- 1 Mg Cl2 、0 .2 μmol· L- 1随机引物、2 5 .0 ng·μL- 1 DNA模板、1 -2 U Tag酶     

甘薯品种鉴定中指纹图谱的建立和应用

应用RAPD分析技术体系,构建了甘薯品种的指纹图谱.结果表明,在20μLPCR反应体积中,含有10mmol·L-1Tris-HCl(pH8.3)、50mmol·L-1KCl、2.5mmol·L-1MgCl2、100μmol·L-1dNTP、0.3μmol·L-1引物、40ng模板、1.5UTaq酶的反应体系适合甘薯RAPD分析.利用上述甘薯RAPD分析的指纹图谱,鉴定了10个供试品种.     

黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立

以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi     

芫荽RAPD体系优化

以芜萎基因组DNA为模板,对RAPD扩增反应条件进行优化,以期建立适合芜荽的RAPD的最优反应体系,结果表明:PCR扩增体系(总体积20μL)为:模板DNA1.0 ng·μL-1,dNTP 0.45 mmol·L-1,随机引物1.3μmol·L-1,Taq酶0.6 U,Mg2+2.0 mmol·L-1,退火温度39℃,...     

杜鹃花属植物基因组DNA RAPD-PCR反应体系的优化

试验通过系统比较研究,确立了杜鹃属植物RAPD-PCR的最佳反应体系,即20μL反应体系中:模板DNA(10 g.L-1)1.5μL;10×PCR buffer 2μL;Taq酶(0.5 U.μL-1)0.3μL;引物(0.8μmol.L-1)4μL;MgCl2(25 mmol.L-1)1.8μL;dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.0 mmol.L-1)0.6μL。经试验验证,该反应体系重复性高,扩增条带亮度均匀,弥散现象少。     

白桦ISSR-PCR反应体系的优化

以白桦基因组DNA为模板,研究了ISSR的影响因素,建立一套适宜于白桦的ISSR优化反应体系及程序。即20μL反应体系中,Mg2+浓度范围为0.5~3.0mmol·L-1,dNTPs浓度范围为0.10~0.30mmol·L-1,Taq聚合酶浓度范围为1.0~2.0U,模板DNA浓度为30~120ng,同时含有RNA的模板DNA对ISSR扩增也略有影响,引物浓度范围为0.2~0.4μmmol·L-1。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度为49℃。反应程序为:第一个循环基因组DNA经94℃预变性5min;30个循环为94℃变性30s,49℃退火30s,72℃延伸30s;最后一个循环完成后,在72℃延伸7min。     

女贞RAPD-PCR实验条件的优化

采用单因素梯度试验对影响女贞(Ligustrum lucidum Ait.)RAPD扩增的若干重要影响因素(包括Mg Cl2、d NTPs、随机引物、Taq DNA聚合酶浓度、模板DNA用量,以及退火温度与循环次数等)进行了优化。优化后的女贞RAPD-PCR反应体系为:每25μL体积中含10×反应buffer 2.5μL,2.5 mmol·L-1Mg Cl23.0μL,0.2 mmol·L-1d NTPs 0.5μL,2.0 U Taq酶0.4μL,0.4μmol·L-1引物1.0μL,DNA模板60 ng。PCR扩增程序:在94℃条件下预变性4 min,然后依次在94℃条件下变性30 s,38℃条件下退火45 s,72℃条件下延伸2 min;进行40个循环,最后在72℃条件下延伸10 min,并于16℃条件下保存。以该优化的RAPD反应体系对木犀科女贞属植物不同居群间的女贞种质材料的扩增,均能获得丰富而清晰的条带,且重现性好。     

贵州野生淡黄花百合RAPD反应体系的建立

以贵州林下野生淡黄花百合(Lilium sulphureum Baker)幼嫩叶片为材料,采用改良的CTAB法提取百合基因组DNA,得到了较高质量的DNA.并对影响随机扩增多态DNA性(RAPD)反应的主要因素进行了优化,建立并优化了野生淡黄花百合的RAPD反应体系及程序.优化的20μL反应体系中包含20 ng模板DNA,2.0 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTPs、1.0 U Taq DNA聚合酶、10×Buffer 2μL、0.4 μmol/L随机引物、ddH2O补足至20μL.优化的RAPD扩增程序为94℃3 min;94℃50 s,37℃40 s,72℃80 s,40个循环;72 ℃ 10 min,4℃保存.该反应体系具有较好的稳定性及可重复性,适合贵州野生淡黄花百合遗传多样性研究.     

木豆随机扩增多态性DNA的反应体系研究

[目的]分析影响木豆RAPD-PCR反应中的主要因素,优化反应条件。[方法]以木豆品种ICPL87091为试材,以木豆基因组DNA为模板,通过对PCR反应体系中各种参数的优化设置,分析比较各种因素对RAPD扩增结果的影响,建立适宜的反应体系。[结果]试验得到了较为理想的适宜木豆的反应体系。优化的木豆RAPD反应条件为:模板DNA浓度30 ng,随机引物1.6μmol/L,dNTPs(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)各0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶1.0 U,反应体积为25μl。循环体系为:先94℃1 min,35℃2 min,72℃2 min,5个循环;然后94℃30 s,37℃1 min,72℃1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]利用这一反应体系可有效地进行木豆随机扩增多态性DNA分析,极大地提高了实验结果的可重复性。     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化（摘要）（英文）

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度（10、20、30、40、50 ng）、引物浓度（5、10、15、20、25 pmol/μl）、dNTP浓度（0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mmol/L）,TaqDNA聚合酶量（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 U）及镁离子浓度（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L）5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]用改良的CTAB法提取红豆杉基因组DNA,所得DNA质量较好,无杂质存在,条带整齐一致,而且能够取得比较理想的RAPD扩增效果。通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA10 ng,Mg2 ＋2.0 mmol/L,引物15pmol/μl,dNTP0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

泰国茉莉香米纯度的RAPD鉴定

[目的]针对现有的泰国茉莉香米品种纯度检测方法的不足,建立特异、灵敏、准确、具有实用性的泰国茉莉香米品种纯度检测方法。[方法]通过对影响RAPD结果的模板DNA、Mg2＋离子、随机引物、dNTPs和Taq酶的浓度条件进行优化、以及随机引物的筛选,建立了泰国茉莉香米法定品种KDML105和RD15的双引物协同RAPD检测方法。[结果]得到最适宜的RAPD反应体系为：反应体积25μl,模板DNA浓度4-32ng/μl、随机引物浓度200μg/L、Mg2＋浓度2.0mmo1/L、dNTPs浓度200μmol/L和Taq酶1.0U。通过两条DNA分子标记的双隐性特征可以区分茉莉香米和非茉莉香米品种。[结论]该技术可以有效地弥补了感官法和水煮法的不足,具有操作简单、快速灵敏、费用低等优点,适合在日常检验中推广使用。     

油葵种子DNA提取和RAPD反应体系的优化

[目的]为利用RAPD技术进行油葵的亲缘关系分析及杂种鉴定奠定基础。[方法]以6种杂交油葵种子为试材,采用改良的CTAB法提取油葵基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的RAPD-PCR反应体系。[结果]采用改良CATB法提取的油葵DNA质量好、得率高,且无蛋白质和酚类的污染。油葵的最适RAPD-PCR反应体系为:2.0μl 10×Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、150μmol/LdNTPs、1.5UTaq酶、2.0 ng/μl DNA模板、0.25μmol/L引物,总体积为20.0μl。利用该体系对不同含油量的6个油葵杂交种进行扩增,均表现为带形清晰稳定、带数适宜。[结论]该RAPD技术体系适用于各种油葵杂交种的DNA分析。     

油茶DNA提取及RAPD分析最佳反应体系的建立

[目的]为建立油茶RAPD分析的最佳反应体系。[方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA。通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度。建立油茶的RAPD反应程序,通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系。[结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法。油茶RAPD分析的最佳反应体系为:1.0 UTaq DNA聚合酶、1.5 mmol/L MgCl22、00μmol/L dNTP1、0 pmol/L随机引物2、0 ng DNA模板2、μl 10×PCR buffer,加重蒸水至20μl。油茶的RAPD反应程序为:95℃预变性3 min;94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40循环;72℃延伸7 min。[结论]该研究所用DNA纯度较高,反应条件控制严格,试验中扩增稳定性较好,是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系。     

苦楝RAPD反应体系的优化

以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2＋,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明：当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为：94℃预变性2 m in;然后38个循环（94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s）;最后72℃延伸8 min,4℃保存.     

珍稀濒危竹种筇竹(Qiongzhuea tumidinoda)RAPD反应条件的优化

以宜宾筇竹为材料建立了筇竹RAPD反应优化体系,用于筇竹遗传多样性分析,以改进的CTAB法提取筇竹叶片总DNA,分别测试了镁离子浓度、dNTP浓度、引物浓度、模板DNA含量、DNA聚合酶量对反应结果的影响。通过对各因子的组合比较,建立了筇竹RAPD反应优化体系:20μL PCR反应体积,10×Taq酶配套缓冲液(2μL);1.25 U Taq酶;75 ng模板DNA;45 ng引物;1.88 mmol/L MgCl2;0.19 mmol/L dNTP。     

含笑属RAPD反应条件优化及遗传多态性分析

[目的]确立含笑属植物RAPD反应的最优条件,确定7种含笑属植物的亲缘关系。[方法]采用改进的CTAB法提取木兰科含笑属7种植物叶总DNA,进行RAPD分析,分别研究了模板DNA、引物、dNTP、Mg;^2＋和Taq DNA聚合酶用量对RAPD反应的影响。[结果]RAPD最优反应体系为：反应体积20μl,内含125ng模板DNA,0．3μmol／L引物,0．5U Taq聚合酶,1．5mmol／L MgCl2,0．1mmol／L dNTP,2μl 10x buffer。应用Nei距离法计算各种间的相似系数,采用UPGMA法进行聚类分析,7种含笑种可分为3大类,[结论]筛选的最佳RAPD反应条件可为含笑属植物的分类和遗传多样性分析提供理论依据。     

蝴蝶兰RAPD反应体系的建立

为建立一个稳定的蝴蝶兰RAPD反应体系,对RAPD反应体系中模板DNA、Taq DNA聚合酶用量、随机引物浓度、Mg2+浓度和dNTPs浓度等各项参数进行筛选比较。结果表明,最佳反应体系为:25μl反应体系中,其中含模板DNA(20 ng/μl)1.5μl,Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0.4μl,随机引物(20μmol/L)1μl,Mg2+(25 mmol/L)2.5μl,dNTPs(10 mmol/L)0.5μl,10×PCR Buffer2.5μl,ddH2O 16μl。