早竹TB1同源基因的克隆和表达分析

竹笋的形成和生长发育过程涉及侧枝形态发生,探讨侧枝发育有关基因在竹笋发育过程中的作用,对于阐明竹笋发育基因调控机制有重要意义.利用禾本科TB1同源基因在序列上的保守性,在基因上游的非编码区设计简并引物,通过RT-PCR技术, 从早竹笋中克隆到一个1 296 bp的cDNA序列,该序列包含1个编码349个氨基酸的阅读框,在氨基酸水平上与玉米TB1相似性达64.7%,定名为PpTB1.序列分析比对表明,PpTB1基因的编码产物含有保守的SP区、TCP区和R区,属于基因家族的1个成员.进化分析进一步表明,竹子TB1相似基因是玉米TB1基因的同源基因,且竹子TB1同源基因的分歧时间介于水稻和现有其他TB1同源基因之间.RT-PCR分析表明,该基因在笋、叶片和花中均有表达.原位杂交分析表明,PpTB1在笋的侧芽中表达较多.研究表明,PpTB1很可能与禾本科其他植物的TB1同源基因相似,在竹笋发育过程中,参与侧枝的形成.另外,TB1同源基因也可能在竹子分类和进化研究上有重要价值.     

余甘子基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以余甘子叶片为材料,研究了余甘子基因组DNA提取方法及RAPD反应条件.结果表明,采用改良的SDS方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析.在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:0.6mmol·L-1Mg2+、500-600μmol·L-1dNTP、300nmol·L-1随机引物、25ngDNA、1.00-1.25UTaqDNA聚合酶.     

龙眼胚性愈伤组织长期继代培养及其染色体数目变异

从龙眼幼胚培养诱导并筛选出的松散型胚性愈伤组织 ,在继代培养基上已培养 6 a以上 ,所保持的若干愈伤组织仍具有强烈的体细胞胚胎发生能力 .经细胞学检查 ,其中个别愈伤组织系的部分愈伤组织团发现有2 n=3x=4 5,或 2 n=4 x=6 0等染色体数目的变异细胞 ,这对于离体筛选龙眼细胞突变体很有价值     

荔枝基因枪转化及其GUS瞬时表达研究

以幼胚来源的荔枝EC作为受体材料,采用基因枪轰击的方法将外源gus基因转入荔枝,并对不同条件下的GUS瞬时表达进行了详细研究。结果表明:在其它参数不变的条件下,轰击距离、真空度、可裂膜片压力、金粉用量、质粒DNA用量等理化参数显著影响GUS瞬时表达;渗透处理可显著促进GUS瞬时表达。因此,荔枝EC基因枪转化的适宜条件为在轰击距离6 cm、真空度84.66 k Pa、可裂膜片压力7 584.23 k Pa、轰击1次的情况下,每次轰击用1μg质粒DNA包裹600μg金粉对事先用0.25 mol/L前处理4 h的荔枝EC轰击,并在轰击后渗透处理20 h。另外,经50 mg/L潮霉素筛选得到荔枝抗性愈伤组织,并通过体胚发生途径获再生植株,且GUS染色显示获得了稳定表达GUS蛋白的细胞系和植株。     

荔枝体细胞胚胎发生的研究进展

荔枝体细胞胚胎发生体系的建立对于荔枝生物技术的发展是十分必要的。本文对荔枝体细胞胚胎发生的研究作了简单综述,并概括了荔枝体细胞胚胎发生的培养过程、影响因素以及出现的问题。     

荔枝基因枪转化研究初报

荔枝是我国南方重要的亚热带木本果树之一 .近 2 0 a来 ,国内外不少学者致力于将生物技术手段应用于荔枝品种改良研究[1 ,2 ] ,以期为荔枝育种开辟新途径 .2 0 0 0年以来 ,在已建立的荔枝体胚再生系统 [1 - 3] 的基础上 ,笔者采用基因枪法进行 gus基因 (β- gluccuronidaes gene)转化荔枝胚性愈伤组织的研究 ,初步探讨了荔枝基因枪转化的主要影响因素 ,为进一步建立荔枝遗传转化体系提供重要依据 .试验选取旺盛生长的荔枝 (“下番枝”、“元红”等品种 )胚性愈伤组织 ,将它平铺于 9cm培养皿内 (离中心约 2 cm的圆内 ) ,预处理 4h,用基因枪轰…     

荔枝转基因悬浮细胞再生松散性胚性愈伤组织的原生质体分离与初步培养

以荔枝优良品种下番枝转gus和hpt基因悬浮细胞再生的松散性胚性愈伤组织(TSFEC)为试材,进行原生质体分离研究及初步培养。结果表明:潮霉素会延长荔枝TSFEC原生质体分离的酶解时间,比一般的酶解时间多2 h,但对原生质体产量和存活率的影响不大;TSFEC培养时间对原生质体分离的影响很大,其中以培养15-20 d时的原生质体产量最大,为(10.1-10.5)×107个.g-1,此时原生质体的活力最高,存活率可以达到93.1%-93.4%;酶解方式对原生质体产量和活力影响都不大,常规的酶解方式酶解的最适宜时间为14 h。     

矮秆一串红离体培养快繁技术

以带腋芽的幼嫩茎段为外植体 ,研究矮秆一串红的离体快繁技术 .结果表明 :附加 1.5 mg· L-1BA和0 .1mg· L-1NAA的 MS固体培养基可诱导腋芽萌发 ,诱导率达 90 %以上 ;附加 2 .0 mg· L-1BA和 0 .1mg·L-1NAA的 MS固体培养基为适宜的芽苗继代增殖培养基 ;在附加 1.5 mg· L-1NAA的 1/ 2 MS生根培养基上 ,芽苗 7d后即可生根 .幼苗移栽成活率在 85 %以上