龙眼胚性愈伤组织长期继代培养及其染色体数目变异

从龙眼幼胚培养诱导并筛选出的松散型胚性愈伤组织，在继代培养基上已培养6a以上，所保持的若干愈伤组织仍具有强烈的体细胸胚胎发生能力，经细胞学检查，其中个别愈伤组织系的部分愈伤才发现有2n=3x=45或2n=4x=60，等染色体数目的变异细胞，这对于离体筛选龙眼细胞突变体很有价值。     

荔枝胚性愈伤组织及其体胚发生过程中染色体数目的变化

荔枝胚性愈伤组织及其体胚发生过程中,各离体培养物染色体数目均出现广泛的变异.除正常的荔枝体细胞染色体数目2n=2x=30外,还出现大量染色体数目异常的细胞.植物生长调节剂、培养时间、外植体种类及基因型等对染色体数目变异有一定的影响.愈伤组织染色体数目变异虽然在一定程度上影响荔枝体胚的再生植株频率,但胚性愈伤组织仍能分化形成大量的胚状体.     

龙眼荔枝属间原生质体电融合

由龙眼的幼胚培养诱导、筛选出松散型胚性愈伤组织 ,由之建立了胚性悬浮细胞系 ;用同样的方法建立了荔枝的松散型胚性愈伤组织系 .龙眼的胚性悬浮细胞和荔枝的胚性愈伤组织在含纤维素酶和果胶酶各 10 .0g· L-1的 CPW- 13M的酶解液中酶解 ,经纯化后可得到较为纯净的原生质体 .采用电融合方法进行两种原生质体融合处理 ,获得了适宜的融合参数 ,融合率达 2 0 %以上 .融合产物经初步培养 ,形成了多细胞团     

荔枝、龙眼胚性愈伤组织的细胞组织学观察

通过石蜡切片观察荔枝、龙眼胚性愈伤组织的结构和胚性细胞分裂生长的方式 .结果表明 :荔枝胚性愈伤组织中具有旺盛分裂能力和再生能力的胚性细胞主要分布在外缘 ,胚性愈伤组织的增殖生长为单细胞外起源 ;而龙眼胚性愈伤组织的胚性细胞大多处于内部 ,胚性愈伤组织的增殖生长为内起源 .还对荔枝、龙眼胚性愈伤组织应用于遗传转化等问题进行了探讨     

龙眼胚性愈伤组织AGO6基因克隆及其在体胚发生过程中的表达分析

依据龙眼胚性愈伤组织转录组数据库Unigene序列,利用RT-PCR结合RACE技术,以龙眼胚性愈伤组织c DNA为模板,获得Dl AGO6基因的c DNA全长序列,共3 168 bp(登录号为KF819529),完整开放阅读框2 700 bp,编码900个氨基酸。生物信息学分析表明:Dl AGO6的c DNA所编码的氨基酸序列含有2个高度保守的PAZ和PIWI结构域,具有典型的AGO类蛋白的结构特征;与拟南芥AGO6蛋白序列有较高的同源性。龙眼体胚发生过程中Dl AGO6表达量的q PCR分析表明:Dl AGO6在龙眼松散型胚性愈伤组织时期的表达量最高,在鱼雷形胚时期表达量最低,推测DLAGO6在龙眼松散型胚性愈伤组织阶段的高表达量,可能与细胞的旺盛分裂有关。     

51份龙眼种质的胚性愈伤组织诱导及其离体保存

对福建龙眼的主要栽培品种、地方品种及特异株系共51份种质的幼胚进行培养,诱导胚性愈伤组织作为种质资源离体保存的材料,并进行限制生长保存试验.结果表明:MS+2 mg.L-12,4-D培养基适用于绝大部分品种的不同直径的龙眼幼胚胚性愈伤组织的诱导,平均诱导率为48.3%;直径2-4 mm的幼胚最适宜于胚性愈伤组织诱导.在添加1 mg.L-1活性炭的培养基上进行为期7-10 d的过渡培养,能减少直径<2 mm和直径>6 mm的幼胚因褐变导致的死亡,从而提高愈伤组织诱导率.龙眼胚性愈伤组织在常规继代培养中的周期为20 d左右,且品种间的差异较大.在MS+1 mg.L-12,4-D培养基中附加20 g.L-1甘露醇,于16℃低温下进行限制生长保存,可以使龙眼继代培养周期由原来的20 d延长至60 d.     

葡萄愈伤组织诱导及其染色体加倍

以葡萄叶片为外植体,在附加不同浓度2,4-D6、-BA及秋水仙素的MS、B5培养基上,均可诱导出愈伤组织;对颗粒状愈伤组织进行染色体鉴定结果表明:在加有秋水仙素的培养基上诱导的颗粒状愈伤组织均存在广泛的染色体变异,除2n=2x=38和2n=4x=76外,还有一些非整倍体细胞.其变异情况因品种、培养基而异.在加有20 mg/L秋水仙素,并附加1.0 mg/L 2,4-D和0.5 mg/L6-BA的B5培养基上,可获得加倍率高的愈伤组织;但诱导多倍化的愈伤组织均未分化成苗,这可能与愈伤组织染色体变异有关,或与诱导分化成苗的培养基、培养条件等因素有关.     

龙眼胚性愈伤组织体胚发生同步化调控及组织细胞学观察

以龙眼“红核子”胚性愈伤组织为材料 ,对龙眼体细胞胚胎发生进行同步化调控 ,并采用石蜡切片进行组织形态学观察 .结果表明 ,通过控制培养基中 2 ,4-D质量浓度可以调控龙眼体胚的发育进程 ;龙眼胚性愈伤组织的胚胎发生一般是内起源 ,且起源于单细胞     

龙眼胚性愈伤组织继代过程中的衰老与死亡规律初步研究

在常规离体培养中，龙眼胚性愈伤组织继代周期短，需每隔20d继代一次。这样短的周期对离体种质保存来说过于频繁，为避免增加愈伤组织被污染的机会及快速生长分裂带来的高变异率，本研究试图通过对龙眼胚性愈伤组织生长规律和继代过程中生理活性变化的研究，找出能够延缓龙眼胚性愈伤组织生长并且能够延长继代周期，保持愈伤组织遗传稳定性的方法，以达到能够长期保存龙眼胚性愈伤组织的目的。     

黄花蒿试管苗再生途径及多倍体诱发的研究

为建立黄花蒿品种改良及微繁殖技术体系，以黄花蒿嫩茎、叶为外植体，研究了蒿体培养、试管苗再生途径和多倍体诱发技术．结果表明，在只含6—BA的培养基上，外植体愈伤组织通过胚状体途径发育成植株；2，4—D与6—BA配合使用时形成致密的愈伤组织，愈伤组织转入含细胞分裂素的分化培养基上培养，产生不定苗；带腋芽茎段培养在附加6—BA或KT培养基上，腋芽增殖快，可建立胶芽微繁体系；用0．05％的秋水仙碱溶液浸泡带芽点愈伤组织48h，诱发串达60％，并获得了2n＝4x＝36的多倍体试管苗．     

荔枝与龙眼核型的比较研究

荔枝的核型公式为２ｎ＝３０＝２２ｍ（２ｓａｔ）＋６ｓｍ＋２ｓｔ，龙眼的核型公式是２ｎ＝３０＝１６ｍ（２ｓａｔ）＋８ｓｍ＋６ｓｔ．荔枝的ｓａｔ染色体位于第２对，而龙眼的ｓａｔ染色体则位于第１２对．核型的不对称性，龙眼大于荔枝．按Ｓｔｅｂｂｉｎｓ分类，荔枝为２Ａ核型，龙眼是２Ｂ核型．     

龙眼AFLP银染体系的建立与优化

[目的]优化龙眼AFLP银染体系中的影响因素。[方法]以23份龙眼品种和2份龙眼近缘植物龙荔为试材,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的几个影响因素(DNA提取、酶切与连接、电泳与银染)进行研究,建立起龙眼AFLP银染分析体系。[结果]用紫外分光光度计检测样品DNA质量和浓度,发现提取的DNA吸光度A260/A280比值在1.8左右,A260/A230的比值大于2.0,说明所提取的DNA样品纯度较高,无蛋白质或盐类的污染。酶切与连接中采用37℃水浴5 h,然后转入65℃水浴2 h的方法能保证酶切充分,又能防止酶切过度。电泳和银染时用4℃预冷的显影液进行显影,可以降低显影速度。[结论]采用该技术体系得到的AFLP指纹式样清晰,重复性强,适宜用作龙眼品种鉴别和遗传多样性分析。     

龙眼种质资源的RAPD分析

利用RAPD技术对龙眼的95份种质资源和一份荔枝种质资源进行研究。从200条随机引物中筛选出18条多态性引物,共扩增出197条带,DNA扩增带的多态性为100%,这表明96份材料的遗传多样性和遗传资源的丰富性。利用SPSS13.0统计软件对RAPD表型数据矩阵进行分析。根据欧氏距离(ED)法计算各样品间的遗传距离,采用UPGMA(类平均法),进行分析,建立亲缘关系聚类树状图。结果表明,RAPD标记能在分子水平揭示龙眼的遗传背景与亲缘关系。     

龙眼体细胞胚胎发生过程中特异表达蛋白的双向电泳分析

以龙眼品种红核子LC2胚性细胞系为材料,进行体细胞胚胎(简称体胚)发生及其同步化调控,获取体胚发生过程中各个主要发育阶段的培养物(胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚、早期成熟胚、中期成熟胚、晚期成熟胚),采用双向电泳对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析.结果表明:(1)龙眼胚性愈伤组织中,pI为4-5的酸性蛋白表达种类最多,在体胚发育的过程中逐渐消失,相反,pI为5-6的微酸性蛋白的表达逐渐增多;(2)体胚发育后期,尤其是成熟胚晚期,分子质量大的蛋白大量减少,分子质量较小的蛋白增多并逐渐积累;(3)虽然在各个发育阶段都会出现一些新的特异蛋白,但是没有改变蛋白质种类逐渐减少的趋势;(4)发现了一些有差异的特异蛋白点,尤其是成熟胚后期,有一系列大分子质量的蛋白消失,新出现了一部分分子质量较小的蛋白,其中几种表达量很大,可能与体胚发育有密切关系.     

气象条件与龙眼产量丰歉的关系Ⅰ．目标产区的选择及气象产率的分析

采用二阶多项式平滑平均的平稳化处理方法及相关系数系统聚类方法，对福建省２０个龙眼主产县（市）１９７２—１９９４年年产率的聚类分类结果表明：当阈值ｒ＝０．６９２７或Ｐ＝０．００１时，分别以福州、莆田、泉州为代表划分出３个显著的类区群，经对照龙眼品种的过氧化物同工酶谱发现，同类区不同主产县（市）主栽品种酶谱完全一致，而类区间则各不相同；当阈值ｒ＝０．５３６８或Ｐ＝０．０１划分为２个类区时，其类区间主栽品种恰分属于两酶学分类的品种群．据此，推论主栽品种的不同是形成龙眼产率差异的主要原因，且主栽品种的占有比例及其代表性应作为目标产区的选择标准，并选定分类地位最高（ｒ＝０．９４９３）的鲤城与晋江做为目标产区．再则，对目标区鲤城３６年（１９５８－１９９４年）龙眼产率的功率谱分析，其序列的２．１、２年振动周期均呈极显著，证实了有关龙眼的隔年结果或俗称的“大小年”现象．为排除非气象条件导致的周期成分，以龙眼产率ＩＹ（ｔ）为因变量及落后一个单位时间的产率ＩＹ（ｔ－１）为自变量确定出二者的经验关系为线性（Ｐ＜＜０．０１），并依此推导出气象产率的计算公式为ＱＹ（ｔ）＝ＩＹ（ｔ）＋０．７３５８．ＩＹ（ｔ－１）－１．７２０４     

农业供给侧结构性改革下的泸县龙眼产业转型升级研究

在当前农业供给侧结构亟需改革的背景下,分析泸县龙眼产业的现状,发现其存在的问题,并针对泸县龙眼产业的转型升级提出了相应的建议,以促进泸县龙眼产业的发展,为全国龙眼产业的发展提供一些切实可行的经验。     

龙眼果肉水溶性提取物对正常小鼠免疫调节作用的影响

目的从体液免疫、细胞免疫和NK细胞活性等不同角度研究龙眼水溶性提取物对正常小鼠免疫调节作用的影响。方法以120只雄性昆明种小鼠为研究对象,按体重随机分5组,阴性对照组、龙眼水溶性提取物低、高剂量组(130mg·d-1、380mg·d-1)和龙眼果肉低、高剂量组(150mg·d-1、450mg·d-1),每组24只,连续35d。测定淋巴器官相对质量、脾淋巴细胞转化值、血清溶血素值、NK细胞活性和脾脏抗体生成细胞数等免疫学指标以及血清丙二醛水平、总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活力等抗氧化指标。结果与阴性对照组比较,龙眼水溶性提取物低、高剂量组血清溶血素值和脾淋巴细胞转化值显著升高(P0.05),而龙眼果肉各剂量组效果均不显著(P0.05);高剂量龙眼水溶性提取物NK细胞活性显著增强(P0.05),但龙眼果肉剂量组无显著效果(P0.05)。龙眼果肉高剂量组血清丙二醛水平显著降低(P0.05),龙眼水溶性提取物各剂量组则差异不显著(P0.05);龙眼果肉高剂量组和龙眼水溶性提取物高剂量组血清总抗氧化能力分别极显著(P0.01)和显著(P0.05)提高。结论一定剂量的龙眼水溶性提取物能显著提高正常小鼠的体液免疫和细胞免疫能力及抗氧化活性,但抗氧化活性非其免疫调节作用的主要机制。     

Identification of Intergeneric Hybrid Plants Between Oryza sativa and O. minuta via GISH and RAPD

To transfer desirable resistance traits from O. minuta to O. sativa, intergeneric hybrid plants between O. sativa (AA, 2n=2X=24) and O. minuta (BBCC, 2n=4X=48) were produced by embryo rescue after sexual cross. Morphological observation and chromosome counts indicated their hybrid status (ABC, 2n =3X=36). Genomic in situ hybridization (GISH) was further applied to confirm the parentage of the chromosomes of F1 hybrids. Chromosomes of O. minuta and O. sativa were distinguishable in the hybrids in different fluorescence colors. GISH indicated that A and BC chromosomes were not randomly assembled in a cell.RAPD profiles unequivocally revealed their hybrids with double parent patterns. The results of blast tests showed that the hybrids had obtained disease resistance from O. minuta, and had a level of susceptibility between the parents.     

延边黄牛及利延杂交牛的染色体研究

采用外周血淋巴细胞培养及染色体制片技术，对延边黄牛及其利延杂交牛染色体核型和C带进行了研究．结果表明：两种牛二倍体染色体2n=60，公牛核型为2n=60，xy；母牛为2n=60，xx，其中29对常染色体均为端着丝粒染色体，X性染色体为较大的亚中着丝粒染色体，Y性染色体为较小的中着丝粒染色体．     

龙眼果实采后呼吸强度、细胞膜透性和品质的变化

研究了采后福眼龙眼果实在(20±0.5)和(4±0.5)℃温度下的呼吸强度、细胞膜透性和品质的变化.结果表明:龙眼果实属于非呼吸跃变型果实;在(20±0.5)℃下贮藏2d,果实呼吸强度下降,之后明显上升;果实采后果皮细胞膜透性快速增加,果实易失重、衰老、腐烂和果皮褐变,贮藏后期果肉自溶;果肉可滴定酸和VC含量快速下降,总糖和蔗糖含量下降,还原糖含量先升后降,可溶性固形物含量在贮藏前期下降而后期上升,可溶性固形物和可滴定酸比值先升后降;贮藏后期果肉可滴定酸含量增加.而(4±0.5)℃低温贮藏可显著降低果实呼吸强度,抑制病原菌生长,延缓果实衰老和果皮细胞膜透性增加,延迟果皮褐变,减少果实失重和果肉营养成分变化,抑制果肉自溶,保持果实较高的品质,延长果实贮藏期.