弥散性神经内分泌细胞标志物在不同生殖周期小鼠卵巢中的表达

【目的】研究卵巢内弥散性神经内分泌系统细胞的分布情况。【方法】采用间接免疫荧光染色法检测弥散性神经内分泌细胞广谱、共同的标志物S100蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)在不同生殖周期小鼠卵巢中的表达情况。【结果】S100蛋白和NSE在动情周期次级卵泡和囊状卵泡外膜细胞、妊娠期囊状卵泡外膜细胞和部分黄体细胞中表达,阳性细胞散在或成簇分布,一些细胞具有明显的突起,细胞核不着色。【结论】小鼠卵巢中存在弥散性神经内分泌细胞;弥散性神经内分泌物质在卵泡不同发育阶段发挥着不同的调控作用;在卵巢的发育过程中伴随着部分细胞神经内分泌化。     

弥散性神经内分泌细胞标志物在妊娠期山羊黄体细胞中的共存

【目的】探讨S-100蛋白、5-羟色胺(5-HT)、神经特异性烯醇化酶(NSE)和突触素(SYP)4种弥散性神经内分泌细胞标志物在黄体细胞中的共存情况。【方法】采取妊娠中期(50~70 d)奶山羊卵巢,常规方法制备石蜡切片,采用免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜观察,对4种弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了检测。【结果】S-100蛋白与SYP共存于同一黄体细胞中,表达呈强阳性,阳性细胞主要分布在黄体周边,占总阳性细胞的56.57%。S-100蛋白与5-HT、5-HT与SYP、NSE与SYP、5-HT与NSE、S-100蛋白与NSE共存的细胞呈弱阳性,分别占总阳性细胞的18.42%,15.67%,4.31%,4.30%和0.73%,均匀分布于整个黄体中。【结论】S-100蛋白、5-HT、NSE和SYP在山羊黄体细胞中有两两共存现象。     

奶山羊周期黄体中催产素的免疫组化定位

运用免疫组化 ABC法对奶山羊周期黄体中催产素 (OT)的定位进行了研究。结果表明 ,奶山羊周期黄体中存在数量较多的 OT免疫反应阳性细胞。OT阳性细胞根据胞质内反应颗粒着色的深浅可分为强阳性、中等阳性和弱阳性细胞 3种。阳性细胞在形态上以圆形、卵圆形为主 ,另有相当数量的细胞具有突起 ,小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞则多呈现为长梭形。从分布上看 ,强阳性细胞主要分布于黄体周边 ,少数散布于中央区域 ,中等阳性及弱阳性细胞则均匀分布于整个黄体组织中。连续切片 HE染色的对照观察显示 ,奶山羊周期黄体中的 OT主要是由大黄体细胞分泌 ,小黄体细胞也可产生少量的 OT。     

奶山羊周期黄体中催产素的免疫组化定位

运用免疫组化ABC法对奶山羊周期黄体中催产素（OT）的定位进行了研究，结果表明，奶山羊周期黄体中存在数量较多的OT免疫反应阳性细胞，OT阳性细胞根据胞质内反应颗粒着色的深浅可分为强阳性，中等阳性和弱阳性细胞3种，阳性细胞在形态 以圆形，卵圆形为主，另有相当数量的细胞具有突起，小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞则多呈现为长梭形，从分布上看，强阳性细胞主要分布于黄体周边，少数散布于中央区域，中等阳性及弱阳性细胞则均匀分布于整个黄体组织中，连续切片HE染色的对照观察显示，奶山羊周期黄体中的OT主查由大黄体细胞分泌，小黄体细胞也可产生少量的OT。     

GnRH、OT、SYN及S-100蛋白在卡拉库尔羊周期黄体细胞中的共存

 【目的】研究卡拉库尔羊周期黄体中OT、GnRH两种生殖激素以及突触素（synaptophysin,SYN）、S-100蛋白两种DNES（dispersed or diffuse neuroendocrine system,DNES）细胞标志物在同一细胞中的共存。【方法】采用免疫荧光双标记法分别用OT、GnRH、SYN和S-100蛋白的单克隆抗体两两组合对黄体组织进行染色观察与分析。【结果】OT与GnRH、OT与S-100、OT与SYN、GnRH与S-100及GnRH与SYN 5种组合的免疫荧光染色双阳性细胞在黄体组织中广泛存在;在5种双阳性细胞两两之间的10种组合中,有9种组合的双阳性细胞间表现为高相关性（相关系数0.7以上）。【结论】发情周期卡拉库尔羊黄体组织中,广泛存在DNES细胞;OT和GnRH广泛存在于黄体的DNES细胞中,DNES细胞可能是OT和GnRH的分泌细胞,黄体细胞具有生殖内分泌细胞和DNES细胞的双重属性。     

鼻咽免疫组织化学标记 Ⅱ.神经内分泌性标记

应用神经特异性烯醇化酶和多种激素标记物的免疫组化技术,在鼻咽部发现有两类神经内分泌细胞,即上皮性神经内分泌细胞(存在于披复上皮和陷窝腺体)和小细胞性神经内分泌细胞(弥散分布或灶状聚集于固有膜和陷窝腺体周围)。作者对这两类细胞的来源、生物学特性和病理意义作了探讨。     

山羊骨髓间充质干细胞的分离培养及向神经细胞诱导分化的研究

采用体外细胞培养技术将山羊胎儿骨髓中的干细胞从骨髓血中分离并培养扩增;分别用含β-巯基乙醇或当归的培养液诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,免疫组织化学鉴定神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达.结果表明,通过贴壁培养法,可使低丰度的山羊骨髓间充质干细胞在体外实现分离扩增;诱导后的细胞强表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶.还建立了一种简单易行的体外分离与培养山羊骨髓间充质干细胞的方法,同时表明山羊骨髓间充质干细胞同样具有分化为神经细胞的潜能,为今后对某些疾病的治疗提供了理想的动物模型.     

棕色田鼠视网膜结构及其神经元特异性烯醇化酶分布研究

通过H-E.染色法和免疫组化方法,对棕色田鼠视网膜结构及神经元特异性烯醇化酶的分布特性进行研究.结果表明,棕色田鼠的视网膜结构呈典型的脊椎动物视网膜结构类型,由外向内分别为色素上皮、视锥视杆层、外核层、外网层、内核层、内网层、节细胞层、神经纤维层.视网膜中神经元特异性烯醇化酶阳性分布在内网层、内核层、靠近内核层的外网层区、节细胞层、神经纤维层,其中内网层阳性最强,有4个阳性亚层.视锥视杆层和外核层没有神经元特异性烯醇化酶分布,这可能与感光细胞的分泌有关.     

5-HT与NSE和SYN在牛周期黄体细胞中的共存

【目的】探讨弥散性神经内分泌细胞标记物在牛黄体细胞中的共存现象,以期为黄体细胞的内分泌研究提供理论依据。【方法】采集黄牛黄体,常规方法制备石蜡切片,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法,结合免疫组化双标记法染色后,镜检拍照,研究牛周期性黄体细胞中5-HT与NSE和SYN的共存情况。【结果】黄体组织中含有这3种标记物的单标记和5-HT与其他两者的双标记免疫反应阳性细胞,其主要以散在形式分布于黄体中,细胞形态多呈圆形、椭圆形和梭形,阳性细胞平均数由多至少依次为:5-HT、NSE、SYN/5-HT、SYN和NSE/5-HT;在黄体细胞以外的卵巢细胞中未观察到这3种物质的存在。【结论】牛黄体组织中存在5-HT、NSE、SYN 3种标记物和SYN/5-HT、NSE/5-HT双标记免疫反应阳性细胞,提示黄体组织在发生的同时也存在着部分细胞的神经内分泌分化。     

体外定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

[目的]分离和克隆小鼠骨髓间充质干细胞,并诱导分化为神经元样细胞。[方法]利用Percoll密度梯度离心的方法进行小鼠骨髓间充质干细胞分离及培养,分别采用β-巯基乙醇和BHA诱导分化为神经元样细胞。用神经元特异性烯醇化酶和神经纤维丝蛋白免疫细胞化学方法对已分化的神经元样细胞进行鉴定和分化率分析。[结果]经2种诱导剂诱导的小鼠骨髓间充质干细胞均出现神经元样细胞的分化,胞体呈神经元状,伸出较长轴突样和树突样突起且有分支。而且免疫细胞化学鉴定显示,诱导分化后的神经元样细胞神经元特异性烯醇化酶染色和神经纤维丝蛋白免疫细胞化学染色均呈阳性,β-巯基乙醇诱导分化细胞表达NSE的阳性率为（86.8±2.7）%;诱导分化细胞表达Neurofilament200 kD的阳性率为（75.2±2.3）%;BHA诱导分化细胞表达NSE的阳性率为（80.5±2.2）%;诱导分化细胞表达Neurofilament200 kD的阳性率为（73.2±1.6）%。[结论]小鼠骨髓间充质干细胞能够在诱导剂β-巯基乙醇和BNA的诱导下体外诱导分化为神经元样细胞。     

抗凋亡因子cFLIP在延边黄牛性周期黄体中表达的研究

为了研究延边黄牛黄体中抗凋亡因子(Cellular FLICE-like inhibitory protein:cFLIP)的变化情况及其与细胞凋亡的关系,本实验采用免疫染色方法,观察cFLIP在延边黄牛周期黄体中的表达变化,并从组织化学角度分析了cFLIP作为抗凋亡因子参与延边黄牛的黄体退化。     

不同药物处理方法对绵羊超数排卵的影响

针对不同激素和方法对绵羊超数排卵效果的影响进行研究,结果表明,FSH法和PMSG法可移胚数分别为93(7.75)和21(1.75),差异显著;FSH减量法和恒量法的黄体数分别为148(12.33)和112(9.33),回收卵数分别为133(11.08)和63(5.25),可移胚数分别80(6.67)和63(5.25).FSH超数排卵效果优于PMSG,FSH减量法优于FSH恒量法.运用FSH减量法不但可增加黄体数量,还可增加可移胚的数量.     

腹腔镜检查山羊超排反应准确性的手术评价

用手术法评价了192例超排山羊卵巢反应的腹腔镜检查结果。结果表明用腹腔镜检查计数超排羊的黄体数时,其准确性随黄体数和未排卵大卵泡数(直径>5 mm)的增多而降低;计数大卵泡时,其准确性随大卵泡数的增多而降低,但黄体的多少对大卵泡计数准确性无影响;超排羊卵巢体积较大时黄体及大卵泡计数的准确性降低;被检羊膘情较好且检查前饥饿不足时,对黄体及大卵泡计数的准确性有不利影响。     

大熊猫卵巢OB-Rb、NPY的蛋白表达与分布研究

为了探究瘦素长型受体(OB-Rb)与神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)在大熊猫生殖调控中的作用,运用HE法、免疫组化SABC法观察了5例大熊猫卵巢组织学结构及OB-Rb、NPY在卵巢的表达与分布。结果显示:大熊猫卵巢各级卵泡数量较少,尤以中晚期生长卵泡更甚,原始卵泡和闭锁卵泡相对多见。OB-Rb和NPY在卵巢上均有表达,其中OB-Rb主要分布在颗粒细胞、卵泡膜细胞及黄体的粒黄体细胞;NPY阳性纤维和产物不均匀分布于卵巢各个部位,呈串珠状或点状。NPY阳性神经纤维主要位于血管周围、卵泡、黄体以及颗粒细胞中。大熊猫卵巢卵泡数量少的特征可能与其生殖能力低下有关;OB-Rb和NPY参与了卵巢卵泡发育的调控。     

牛卵巢黄体类型与卵泡生长发育关系的组织学研究

本试验通过对牛卵巢不同黄体类型和各级卵泡生长发育状况的组织学观察 ,探讨了不同黄体类型对各级卵泡生长发育的影响 试验结果表明 :1)不同类型黄体之间 ,黄体功能的强弱不同 黄体功能由强至弱依次为圆锥状型 (Ⅰ型 )、火山口状型 (Ⅱ型 )、蘑菇状型 (Ⅲ型 )、扁平片状型 (Ⅳ型 )、表面无黄体型 (Ⅴ型 ) 2 )黄体类型对生长发育过程中各级卵泡的数量有一定的影响 Ⅴ型腔前卵泡总数和有腔卵泡总数与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的腔前卵泡总数和有腔卵泡总数之间差异极显著 (p <0 0 1) ,而Ⅰ、Ⅱ型之间差异不显著 Ⅲ、Ⅳ之间差异显著 ,Ⅰ、Ⅱ型与Ⅲ、Ⅳ型之间差异显著 (p <0 0 5) 3)黄体类型对各级卵泡平均直径均无显著影响     

抑制素基因免疫黄牛的黄体发育与免疫纯度及剂量的关系

为探讨双拷贝抑制素pcISI基因疫苗纯度和剂量对肉牛黄体发育的影响,将150头同期发情的南阳黄牛随机分为8个试验组和2个对照组,试验组用pcISI按2种纯度、4种剂量(0.75、1.50、2.25、3.00 mg/头)进行免疫处理,2个对照组分别用空质粒和生理盐水进行处理;初次免疫21 d后进行加强免疫。结果表明:无论用高纯度还是低纯度疫苗免疫,2.25 mg/头剂量处理对黄体的作用效果最明显,且抗体水平与黄体发育密切相关,2.25 mg/头抑制素融合表达质粒组的黄体显著大于0.75 mg/头组(P<0.05),抗体阳性牛两侧黄体显著比抗体阴性牛的大(P<0.05)。     

“复方益孕液”治疗奶牛不孕症疗效及作用机理

选取产后60 d以上不发情,患有持久黄体和卵巢机能减退的不孕奶牛50例进行复方益孕液临床治疗试验,利用电化学发光免疫方法对部分患牛治疗前后血清雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平进行检测.结果表明,复方益孕液治疗奶牛持久黄体和卵巢机能减退后,发情率分别为83.3%和77.3%,受胎率分别为80.0%和76.5%,显著高于对照组(P<0.01).持久黄体患牛在处理后血清中E2水平不断升高,最高值为(17.81±7.32)pg/mL,P4水平逐渐降低.最低值为(0.75±0.46)ng/mL;卵巢机能减退患牛在处理后血中E2和P4水平均升高,最高值分别为(14.16±9.45)pg/mL和(4.23±1.85)ng/mL.结果表明复方益孕液对治疗奶牛持久黄体和卵巢机能减退引起的不孕症疗效显著,且具有微调体内激素,溶解黄体和诱导发情作用.     

双拷贝抑制素基因免疫对肉牛卵泡和黄体的影响

 【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组, 每组肉牛分别注射0.75（T1）、1.5（T2）、2.25（T3）、3.0 mg/头（T4）pcISI质粒、3.0 mg/头 pcMV-S空质粒（C1）和3 mL/头 生理盐水（Ｃ2）,初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）;T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,各剂量组成熟卵泡直径均高于对照组,除了T1外,其它3组两侧成熟卵泡均与对照组差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,4个剂量组黄体直径均高于对照组,且均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3黄体最大,T1最小,且T3与T1差异显著（P＜0.05）。加强免疫后10 d（BM10）抑制素抗体与成熟卵泡大小相关显著（r＝0.629,P＜0.05）,与黄体大小相关极显著（r＝0.651,P＜0.01）。【结论】双拷贝抑制素pcISI基因免疫可促进肉牛卵泡和黄体发育,2.25mg为最佳免疫剂量,抑制素抗体水平与卵泡和黄体发育有一定的相关性。