山羊-绵羊异质体细胞克隆胚中线粒体DNA的杂合性分析

摘要：线粒体是哺乳动物细胞中唯一存在有核外遗传物质的细胞器，其功能的正常表达需要核与线粒体的相互作用。线粒体 DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)编码电子传递链所需酶中的一些多肽亚基及多种 tRNA 和 rRNA，其余的亚基由核基因编码。异种体细胞核移植可能导致重构胚中 mtDNA 的杂合现象。本实验采用 PCR-限制性片段长度多态性（PCR-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP）的方法分析以山羊胎儿成纤维细胞为核供体，以去核的绵羊 MⅡ 期卵母细胞为核受体构建的异质克隆胚中线粒体的来源及组成比例。结果表明： 8-cell之前的异质克隆胚中供受体 mtDNA 的比例变化不大，1-cell、2-cell、4-cell、8-cel异质克隆胚中核供体细胞 mtDNA 占受体细胞 mtDNA 的比例分别为2.5±0.8 %；2.8±0.6 %；1.9±0.4 %；1.7±0.6 %， 彼此之间差异不显著（P>0.05）；然而，异质克隆囊胚中核供体细胞 mtDNA 的比例下降为0.3±0.1 %，与前四者相比差异显著（P<0.05）。     

甘薯糖蛋白对小鼠血脂水平的影响

为了研究甘薯糖蛋白对小鼠血脂水平的影响。先用含8.0%猪油的高脂鼠料诱导小鼠成为高脂血,再将其平均分为四组,一组用普通鼠料饲养作为对照,其他三组分别用含0.5%、1.0%及1.5%甘薯糖蛋白的鼠料饲养,在第15天和第30天对每只小鼠采血,用全自动生化分析仪测定其中的甘油三酯及血清胆固醇的浓度。结果发现用含1.0%甘薯糖蛋白的鼠料饲养15d就能明显降低高脂血模型小鼠血液中的血清总胆固醇水平,继续饲养30d能显著降低其中的甘油三酯水平;如果用含1.5%甘薯糖蛋白的鼠料饲喂,则只需15d就能同时降低两者的水平。因此甘薯糖蛋白具有显著降低高脂血模型小鼠血脂的作用。     

无角道赛特绵羊精液低温和冷冻保存试验

采用不同成分的稀释液对无角道赛特14号种公羊鲜精进行了低温保存(4℃)和冷冻保存(-196℃)试验。结果表明:在4℃条件下,精液在A、B、C和D四种稀释液中分别保存72h、72h、144h和192h后,仍然满足输精要求,从而确定D液为最佳稀释液(30g/L葡萄糖、14g/L柠檬酸钠、3g/L乙二胺四乙酸钠、2g/LvE、50mL/L卵黄)。在冷冻保存试验中,C液为细管精液冷冻保存最佳稀释液(56g/L蔗糖、52g/L乳糖、4g/L乙二胺四乙酸钠、2g/LvE、50mL/L甘油、50mL/L卵黄),冻后精液的活力为0.48;在上述实验基础上,给C液中分别添加催产素(添加后浓度为20IU/100mL)、前列腺素(添加后浓度为0.1mg/100mL)及催产素 前列腺素(20IU/100mL 0.1mg/100mL)进行细管精液冷冻保存,其冻后活力分别为0.55、0.48、0.52,说明含20IU/100mLOT的C液对无角道赛特绵羊精液的冷冻保存效果最好。     

AS-PCR在牛羊异种核移植上的应用

利用PCR反应延伸过程中,3′端碱基不配对,PCR反应不能启动的等位基因特异性PCR分析法(AS-PCR)原理,采用生物软件DNASTAR分析牛、羊线粒体细胞色素b(Cytb)基因,以牛、羊碱基差异较大位点作为上游引物的3′端来设计引物,进行PCR扩增反应,分析牛羊异种克隆胚中线粒体的变化情况。结果表明,AS-PCR法是一种快速、有效鉴定异种重构胚中线粒体异质性的方法。     

无角陶赛特羊冻精制作技术

对无角陶赛特种公羊 (n =10 )精液品质、精液保存稀释液和冷冻精液制作技术进行了研究。结果表明 :精液密度为 2 0 .0 3± 0 .2 5亿个 /ml,活率 (冻前为 0 .80± 0 .0 6 ,冻后为 0 .5 1± 0 .0 1) ,畸形率 (冻前为 10 .1± 1.0 3,冻后为 2 9.6±0 .3) ,死精子百分率为 14 .1± 7.1;冻精的平均菌落数小于 5 0 0个 /剂。从 3种精液稀释液中选出了一种最佳稀释液 (三羟基氨基甲烷 卵黄 葡萄糖 柠檬酸 ) ;从 3种冷冻保护剂中筛选出甘油为理想的抗冻保护剂 ,其最佳浓度为 4 %～ 6 %。     

复合纳米抗菌肽防治羊皮下脓肿病的效果

抗菌肽具有抗菌谱广、不易产生耐药性、无残留等优点,而金黄色葡萄球菌是羊和兔皮下脓肿病的主要病原菌之一。通过对羊皮下脓肿组织样本分离到的金黄色葡萄球菌进行体外抗菌肽抑菌活性检测,同时建立试验兔金黄色葡萄球菌皮下脓肿模型,使用抗菌肽进行防治,最后在羊场开展抗菌肽防治羊皮下脓肿病的试验。结果发现抗菌肽对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为3 900μg/mL,抑菌圈直径达到40 mm,抗菌效价U=1.3×10⁷。试验兔防治试验发现,预防组：预防性饲喂抗菌肽能避免金黄色葡萄球菌皮下脓肿病的发生;治疗组：饲喂抗菌肽可使致病后的试验兔14 d内康复。抗菌肽防治羊皮下脓肿病发现,预防试验：预防组发病率为0.6%(n=834),而对照组发病率为12.4%(n=780);治疗试验：发病后采用抗菌肽结合简单外科手术治疗,14 d内治愈率达95.5%(n=110),3个月内复发率为0,而未用抗菌肽,仅采用简单外科手术治疗,14 d内治愈率为36.4%(n=110),3个月内复发率为77.3%(n=110)。说明抗菌肽具有较好的防治羊皮下脓肿病的效果。     

热激损伤对牛孤雌激活胚胎后续发育的影响

为了研究早期胚胎核与胞质对热激的应激反应,以及产生应激后二者之间的相互作用对胚胎体外发育、合子期激活基因的表达及胚胎细胞凋亡的影响。本研究将孤雌激活胚随机分为2组分别于38.5或41℃培养7h;随后将二者核进行置换,使用正常培养的胚胎与热激胚胎进行核置换,分别构建热激核-正常胞质重构胚以及热激胞质-正常核重构胚,检测了核质置换胚胎的体外发育率、合子激活基因的表达和胚胎凋亡情况。结果,当正常核移入41℃热激的卵胞质,重构胚的发育率显著下降;热激后的核质置换胚胎中存在合子基因激活不完全的现象,这种情况主要存在于热激胞质-正常核重构胚中;热激能诱导胚胎发生细胞凋亡,早期胚胎的胞质对热激更敏感,并在后期的诱导凋亡中起到主导作用。这些结果表明,虽然热激对核和胞质都有损伤,但胞质对热激损伤更为敏感。早期胚胎受到热激后导致发育能力降低的易感性主要是由胞质所引起的;早期胚胎受到热激可能会损伤到卵胞质中的母源因子,即使与正常核构成重构胚也依然会导致合子基因表达异常;并且胞质受到热激损伤会在热激诱导的凋亡机制中起到比核更大的作用。     

线粒体损伤对山羊-绵羊异种核移植胚早期发育的影响

【目的】研究线粒体损伤对核移植胚早期发育的影响。【方法】用经光敏化染料罗丹明-123损伤的山羊胎儿成纤维细胞和绵羊卵母细胞,构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,于38.5℃、相对湿度100%、体积分数5%CO2条件下培养,统计其2-细胞期、8-细胞期和囊胚期的发育率。【结果】山羊核供体线粒体损伤并不影响囊胚期前核移植胚的发育率(P0.05);绵羊卵母细胞线粒体损伤,使核移植胚2-细胞期的发育率下降(P0.05),但不影响8-细胞期和囊胚期的发育率(P0.05);核供体和卵母细胞线粒体都损伤的核移植胚发育率的变化规律与卵胞质受体线粒体损伤的核移植胚一致。【结论】在异种核移植胚的早期发育中,核供体线粒体损伤不影响核移植胚的发育,但卵母细胞受体线粒体损伤明显影响核移植胚的发育率。     

“一带一路”背景下兽医法规课程教学改革的探讨

"一带一路"倡议下,动物及动物产品市场日益国际化。对动物医学专业学生加强畜牧兽医法律法规方面知识的培养对推动双边或多边畜牧业贸易,维护"一带一路"区域乃至世界畜产品安全和畜牧业经济的稳定发展具有重要意义。然而兽医法规是以兽医学和法学为基础内容的一门学科,涉及到的范围比较广,内容比较深,为了利用有限的课时掌握所有内容,必须对课程教学进行改革。本文从教材更新、资源共享、教学方法及考核方式等方面进行了探讨。     

波尔山羊供体和受体异地饲养鲜胚移植研究

为了进一步扩大良种波尔山羊的推广,提高胚胎移植效率,该文就饲养在不同牧场间的供体和受体实现鲜胚移植进行了系统研究,得到了以下结果:①洪体运输1h、2～3 h、＞4h、0h(对照)收集胚胎,分别得到可用胚胎数为15.8枚±4.3枚、13.0枚±5.7枚、13.8枚±6.6枚和14.2枚±6.3枚,不同运输时间回收可用胚胎数之间无显著性差异(P＞0.05).回收可用胚胎移植后,受体妊娠率分别为71.6％、67.6％、76.7％和80.7％,胚胎成羔率分别为74.1％、67.2％、69.9％和71.5％,供体不同运输时间回收胚胎移植妊娠率和胚胎成羔率无显著差异(P＞0.05).②胚胎在20℃,36.5℃和38.5℃运输2h后移植,受体妊娠率分别为42.0％、64.5％和66.7％,胚胎成羔率分别为41.7％、63.6％和66.7％.20℃运输胚胎受体妊娠率和胚胎成羔率显著低于36.5℃和38.5℃下运输胚胎(P＜0.01);胚胎在36.5℃分别运输0.5 h、1h、2h后移植,受体妊娠率分别为72.5 ％68.7％和64.9％,胚胎成羔率分别为69.1％、67.8％和63.0％,受体妊娠率和胚胎成羔率之间无显著性差异(P＞0.05).③受体在手术前2～4h通过卡车运输到另一畜牧场,运输时间分别为0.5 h、1h、≥2h,胚胎移植后受体妊娠率分别为61.2％、49.6％和42.0％.随着受体运输时间的延长,受体妊娠率呈下降趋势,运输时间超过2h的妊娠率显著低于运输0.5 h的妊娠率(P＜0.05).胚胎成羔率分别为60.9％、45.6％和32.0％,随着受体运输时间的延长,胚胎成羔率显著下降(P＜0.05或P＜0.01).从以上研究得出以下结论:山羊供体和受体饲养在不同饲养场,欲进行鲜胚移植,选择供体运输是最好的方法,其次为胚胎运输后移植.受体运输对胚胎移植效果(即受体妊娠率及胚胎成羔率)均有不利影响,不宜在生产中采用.