山羊卵母细胞无血清体外成熟培养

为研究无血清培养系统对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌激活胚胎早期发育力的影响,分别以0.3%牛血清蛋白(BSA)(mV)、1%聚乙烯醇(PVA)(mV)和1%胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠(ITS)(VV)代替成熟培养液中胎牛血清(FBS),以添加5?S的OM为对照组,对来源于屠宰场的卵巢卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养。成熟率PVA添加组(50.00%)显著低于FBS组(83.23%)(P<0.01)、BSA组(71.19%)和ITS组(76.79%),与FBS组无显著差异(P>0.05);成熟卵母细胞用离子霉素联合6-DMAP激活,在SOFaa中进行孤雌胚培养,BSA、PVA、ITS及FBS各组的卵裂率依次为61.90%、46.97%、79.07%和83.58%,囊胚率分别为25.00%、19.70%、55.81%和60.45%。结果表明:在OM基础培养液中添加BSA或PVA,卵母细胞的成熟率明显低于添加FBS,且卵裂率和囊胚发育率也低于对照组(P<0.05或P<0.01);添加ITS,卵母细胞成熟率虽低于对照组,但孤雌胚卵裂率和囊胚发育率与对照组接近(P>0.05)。表明以ITS代替FBS,可用于山羊卵母细胞体外成熟培养。     

转EGFP基因猪胎儿神经干细胞的体外分化

 【目的】获得转EGFP基因神经干细胞并监测其自我更新、增殖和多向分化潜能;通过用EGFP对神经干细胞进行标记和体外追踪实验,为EGFP作为示踪标记对神经干细胞进行体内移植研究奠定基础。【方法】利用神经干细胞培养技术体系,从胎龄30 d猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入神经干细胞,诱导转基因神经干细胞贴壁分化,观察其体外增殖、分化特点。采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。【结果】成功分离培养出神经干细胞,获得转EGFP基因神经干细胞,神经干细胞在表达EGFP的同时仍具有多向分化潜能。神经干细胞中Nestin表达强阳性,NogoA、DCX、CyclinD2、CD133、Hes1、Oct4、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2);能分化为脂肪细胞(表达LPL和PPARγ-D)、成骨细胞(表达Osteonectin和Osteocalcin)、肌细胞(表达myf-5、myf-6和myoD)、内皮细胞(表达CD31、CD34、CD144和eNOS)和软骨细胞(表达COL2A1)。【结论】从猪胎儿大脑组织分离神经干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因神经干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,可以用EGFP对神经干细胞进行标记、追踪,作为示踪标记进行神经干细胞体内移植研究。     

添加V_(B_(12))、V_E、V_C对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05)和精子顶体完整率(P0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P0.01)和顶体完整率(P0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。     

国内外引进安格斯肉牛的利用现状

介绍了国内外安格斯牛的发展利用现状,重点论述了安格斯肉牛引进我国后消化吸收、利用研究现状,为国内安格斯牛在不同地区之间的引种及发展战略研究提供必要的技术资料。     

无角陶赛特母羊超排效果影响因素分析

为了加快国内引进无角陶赛特绵羊的杂交改良和扩繁,将MOET技术应用于生产,迅速增加现有种羊的群体.进行了不同厂家生产的FSH超排、青年羊和经产羊超排、母羊重复超排、母羊诱导发情后超排、黄体退化及超排母羊发情延迟对收集胚胎及可用胚胎数的影响比较.结果表明:用加拿大FSH(剂量160～200 mg/只)超排效果比较成功,可以收获12.91枚±7.80枚胚胎/卵和8.64枚±7.99枚可用胚胎;经产羊的超排效果优于处女羊(P＜0.05);连续超排和手术会降低总胚胎/卵回收数,但是对可用胚胎数无明显影响;用观察自然发情母羊超排,可以回收到较高的总胚胎/卵数(13.83枚±4.64枚)和可用胚胎数(12.00枚±5.76枚),显著高于诱导发情母羊和未知发情周期母羊超排后获得的总胚胎/卵数(7.00枚±4.9枚和5.94枚)和可用胚胎数(4.22枚±3.42枚和3.19枚±2.56枚)(P＜0.05);超排处理母羊发情推迟24 h获得的总胚胎/卵数和可用胚胎数(0.92枚±1.51枚和0.42枚±0.90枚)显著低于正常发情母羊(P＜0.01;超排后黄体正常母羊获得的胚胎/卵数和可用胚胎数分别为8.83枚±5.75枚和6.66枚±5.41枚,显著高于黄体退化母羊(5.88枚±5.09枚和3.59枚±4.30枚)(P＜0.01).结论:在胚胎移植中,通过使用加拿大FSH(Fotropin V)再结合选择经产母羊、自然发情母羊进行超排处理,冲胚时选择按时发情母羊及黄体正常母羊,可以收获到理想的总胚胎/卵数和可用胚胎数.     

卵泡颗粒细胞维持山羊卵母细胞减数分裂抑制状态的研究

通过在卵母细胞体外成熟过程中添加不同浓度的卵丘细胞或其外围壁层颗粒细胞进行共培养,对山羊卵母细胞成熟过程中卵泡颗粒细胞对卵母细胞减数分裂抑制作用及作用机制进行了探索.结果表明,成熟液中添加105和106个/mL卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞的卵母细胞体外成熟率与对照组相比差异不显著(P>0.05),但添加5×106个/mL(41.2%)和107个/mL(24.6%)卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞组的成熟率显著降低(P<0.05);添加5×106和107个/mL卵丘细胞组和颗粒细胞组卵丘不能正常扩展,卵母细胞核状态观察,停留在GV期;Rp-cAMP(Rp-cyclic adenosine monophosphothioate)膜渗透性cAMP对抗剂,诱导了107个/mL的卵丘细胞组(71.6%)和外围壁层颗粒细胞组(71.3%)的卵母细胞体外成熟率与对照组(72.O%)差异不显著(P>0.05).在山羊卵母细胞体外成熟过程中,添加一定浓度的卵丘细胞及其外层的颗粒细胞可以提高卵母细胞胞质内的cAMP的水平,抑制卵母细胞减数分裂的启动,使卵母细胞停留在GV期.     

安哥拉山羊级进杂交后代生活力初步观察

对安哥拉山羊及其级进杂交后代的生长发育、繁殖力、抗病性、采食习性等进行初步观察研究，结果表明：在试验场良好的饲养条件下，各代杂种羊生长发育正常，但繁殖力、抗病性、采食能力随级进杂交代数的增加有降低的趋势。据此，笔者认为，在陕北特定的生态经济条件下，培育毛用山羊新品种，级进杂交代数不宜太高，到Ｆ３代应停止级进，进行横交固定，而且在整个育种中，应始终注意饲养问题，以保证新品种培育成功。     

山羊卵母细胞无血清体外成熟培养研究

摘要：为了研究无血清培养系统对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌激活胚胎早期发育力的影响，分别以0.3% BSA(m/v)、1% PVA(m/v)、1% ITS(v/v)代替成熟培养液中FBS，以添加5% FBS的OM为对照组，对来源于屠宰场的COCs进行体外培养。成熟率PVA添加组（50.00%），显著低于FBS组（83.23%）（P﹤0.01），BSA组（71.19%）和ITS组（76.79%）与FBS组无显著差异（P＞0.05）；成熟卵母细胞用离子霉素联合6-DMAP激活，在SOFaa中进行孤雌胚培养，BSA、PVA、ITS及 FBS各组的卵裂率依次为61.90%、46.97%、79.07%和83.58%，囊胚率分别为25.00%、19.70%、55.81%和60.45%。实验结果指出:在OM基础培养液中添加BSA或PVA卵母细胞的成熟率明显低于添加FBS，且卵裂率和囊胚发育率也低于对照组(P<0.05或 P<0.01)；添加ITS，卵母细胞成熟率虽低于对照组，但孤雌胚卵裂率和囊胚发育率与对照组接近（P>0.05）。结论：以ITS代替FBS，可以用于山羊卵母细胞体外成熟培养。     

绒山羊成纤维细胞生长因子5基因(FGF5)毛囊特异性表达载体的构建及转染胎儿成纤维细胞

绒山羊的绒毛品质、产量与皮肤毛囊的生长发育密切相关。本研究旨在构建绒山羊(Capra hircus)成纤维细胞生长因子5基因(fibroblast growth factor 5,FGF5)的毛囊特异性表达载体,并证明其表达的有效性。分别以绒山羊基因组和c DNA为模板,利用PCR方法克隆角蛋白关联蛋白6-1(keratin associated protein 6-1,KAP6-1)基因的启动子和FGF5基因的编码区序列(coding sequence,CDS),并将这两个元件连接到去除CMV启动子的真核表达载体p EGFP-N1上,FGF5与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因表达框之间以猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)2A(P2A)相连,构建毛囊特异性表达载体p EGFP-N1-KF。表达载体转染绒山羊胎儿成纤维细胞后,对细胞表达产物进行q RT-PCR和Western blot检测。酶切鉴定结果表明,载体p EGFP-N1-KF构建成功;q RT-PCR结果表明,FGF5正常表达;Western blot结果显示,P2A能够有效剪切FGF5和EGFP融合蛋白。表明成功得到了绒山羊FGF5基因的毛囊特异性表达载体并在绒山羊胎儿成纤维细胞中能正常表达。本实验为进一步研究绒山羊FGF5基因在毛囊发育和周期调控中的作用提供了技术支持。     

性控奶山羊精液X和Y精子分离比例检测方法的建立

旨在建立可以定量计算奶山羊精液中X、Y精子数量的双重TaqMan荧光定量PCR方法,用以检测经过分离的奶山羊精液X和Y精子的数量和比例,为性控技术的开发和生产应用提供技术支撑。本研究选择X、Y染色体中特异基因F9及ZFY片段设计引物,建立标准曲线,优化荧光定量PCR反应体系和条件。通过对阳性标准品梯度稀释以及对60支已知纯度的性控精液进行测定（3次重复）来检验方法的敏感性和可靠性。结果显示,所建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法特异性和重复性好,X和Y精子检测灵敏性分别为47和51 copies·μL^-1;利用该方法对商品化的奶山羊性控冷冻精液中X和Y精子的数量和比例进行计算,其结果与销售公司提供的X和Y精子的纯度无显著差异（P>0.05）,表明该方法结果可靠。本研究建立的计算奶山羊X、Y精子数量的双重TaqMan荧光定量PCR方法特异性和重复性好,灵敏度高,结果可靠,为计算奶山羊精液分离后X、Y精子数量及比例提供了快速可靠的方法。