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1.
旨在建立可以定量计算奶山羊精液中X、Y精子数量的双重TaqMan荧光定量PCR方法,用以检测经过分离的奶山羊精液X和Y精子的数量和比例,为性控技术的开发和生产应用提供技术支撑。本研究选择X、Y染色体中特异基因F9及ZFY片段设计引物,建立标准曲线,优化荧光定量PCR反应体系和条件。通过对阳性标准品梯度稀释以及对60支已知纯度的性控精液进行测定(3次重复)来检验方法的敏感性和可靠性。结果显示,所建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法特异性和重复性好,X和Y精子检测灵敏性分别为47和51 copies·μL-1;利用该方法对商品化的奶山羊性控冷冻精液中X和Y精子的数量和比例进行计算,其结果与销售公司提供的X和Y精子的纯度无显著差异(P>0.05),表明该方法结果可靠。本研究建立的计算奶山羊X、Y精子数量的双重TaqMan荧光定量PCR方法特异性和重复性好,灵敏度高,结果可靠,为计算奶山羊精液分离后X、Y精子数量及比例提供了快速可靠的方法。 相似文献
2.
雾霾降低道路的能见度,降低了道路行驶安全性,导致车辆易发生侧滑漂移。通过分析研究车辆制动过程的重要组成部分,以及汽车的制动性能状况,明确雾霾天气影响车辆制动,并以图表的形式直观清晰地展现雾霾对制动过程的影响。通过对雾霾进行影响交通行驶安全等级划分,将雾霾各项参数具体化,并采用控制变量方法对各个影响因素分别进行数据计算分析,最终得出汽车综合制动过程曲线,用计算机仿真实验模拟雾霾天气下车辆实际行驶状况,可降低交通事故的发生概率。 相似文献
3.
绒山羊的绒毛品质、产量与皮肤毛囊的生长发育密切相关。本研究旨在构建绒山羊(Capra hircus)成纤维细胞生长因子5基因(fibroblast growth factor 5,FGF5)的毛囊特异性表达载体,并证明其表达的有效性。分别以绒山羊基因组和c DNA为模板,利用PCR方法克隆角蛋白关联蛋白6-1(keratin associated protein 6-1,KAP6-1)基因的启动子和FGF5基因的编码区序列(coding sequence,CDS),并将这两个元件连接到去除CMV启动子的真核表达载体p EGFP-N1上,FGF5与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因表达框之间以猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)2A(P2A)相连,构建毛囊特异性表达载体p EGFP-N1-KF。表达载体转染绒山羊胎儿成纤维细胞后,对细胞表达产物进行q RT-PCR和Western blot检测。酶切鉴定结果表明,载体p EGFP-N1-KF构建成功;q RT-PCR结果表明,FGF5正常表达;Western blot结果显示,P2A能够有效剪切FGF5和EGFP融合蛋白。表明成功得到了绒山羊FGF5基因的毛囊特异性表达载体并在绒山羊胎儿成纤维细胞中能正常表达。本实验为进一步研究绒山羊FGF5基因在毛囊发育和周期调控中的作用提供了技术支持。 相似文献
4.
参考凯恩斯的消费理论建立函数模型,运用阿尔蒙估计法对安徽省农民纯收入及农民价格消费指数与消费支出进行估计分析,并就扩大农村居民消费给出建议。 相似文献
5.
为研究表皮生长因子(EGF)和胰岛素(Insulin)对牛卵母细胞体外发育的影响以及体细胞共培养对体外受精胚胎体外发育的影响,将获取的牛卵泡卵母细胞在含有30μg,LEGF或50mg/L Insulin或30μg/LEGF+50mg/L Insulin的成熟培养液中进行成熟培养,比较不同生长因子对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响;将受精卵用颗粒细胞单层培养系统或牛输卵管上皮细胞单层培养系统进行体外培养,比较体细胞共培养系统对体外受精胚胎体外发育的影响。结果表明,成熟培养液中添加30μg/LEGF或者30μg/LEGF+50mg/L Insulin可以显著提高卵母细胞的成熟率和受精后的卵裂率(P〈0.05);输卵管上皮细胞共培养系统可以显著提高受精后的囊胚发育率(P〈0.05),可以用于牛体外受精胚胎的体外培养。 相似文献
6.
为了加快国内引进无角陶赛特绵羊的杂交改良和扩繁,将MOET技术应用于生产,迅速增加现有种羊的群体.进行了不同厂家生产的FSH超排、青年羊和经产羊超排、母羊重复超排、母羊诱导发情后超排、黄体退化及超排母羊发情延迟对收集胚胎及可用胚胎数的影响比较.结果表明:用加拿大FSH(剂量160~200 mg/只)超排效果比较成功,可以收获12.91枚±7.80枚胚胎/卵和8.64枚±7.99枚可用胚胎;经产羊的超排效果优于处女羊(P<0.05);连续超排和手术会降低总胚胎/卵回收数,但是对可用胚胎数无明显影响;用观察自然发情母羊超排,可以回收到较高的总胚胎/卵数(13.83枚±4.64枚)和可用胚胎数(12.00枚±5.76枚),显著高于诱导发情母羊和未知发情周期母羊超排后获得的总胚胎/卵数(7.00枚±4.9枚和5.94枚)和可用胚胎数(4.22枚±3.42枚和3.19枚±2.56枚)(P<0.05);超排处理母羊发情推迟24 h获得的总胚胎/卵数和可用胚胎数(0.92枚±1.51枚和0.42枚±0.90枚)显著低于正常发情母羊(P<0.01;超排后黄体正常母羊获得的胚胎/卵数和可用胚胎数分别为8.83枚±5.75枚和6.66枚±5.41枚,显著高于黄体退化母羊(5.88枚±5.09枚和3.59枚±4.30枚)(P<0.01).结论:在胚胎移植中,通过使用加拿大FSH(Fotropin V)再结合选择经产母羊、自然发情母羊进行超排处理,冲胚时选择按时发情母羊及黄体正常母羊,可以收获到理想的总胚胎/卵数和可用胚胎数. 相似文献
7.
为了研究早期胚胎核与胞质对热激的应激反应,以及产生应激后二者之间的相互作用对胚胎体外发育、合子期激活基因的表达及胚胎细胞凋亡的影响。本研究将孤雌激活胚随机分为2组分别于38.5或41℃培养7h;随后将二者核进行置换,使用正常培养的胚胎与热激胚胎进行核置换,分别构建热激核-正常胞质重构胚以及热激胞质-正常核重构胚,检测了核质置换胚胎的体外发育率、合子激活基因的表达和胚胎凋亡情况。结果,当正常核移入41℃热激的卵胞质,重构胚的发育率显著下降;热激后的核质置换胚胎中存在合子基因激活不完全的现象,这种情况主要存在于热激胞质-正常核重构胚中;热激能诱导胚胎发生细胞凋亡,早期胚胎的胞质对热激更敏感,并在后期的诱导凋亡中起到主导作用。这些结果表明,虽然热激对核和胞质都有损伤,但胞质对热激损伤更为敏感。早期胚胎受到热激后导致发育能力降低的易感性主要是由胞质所引起的;早期胚胎受到热激可能会损伤到卵胞质中的母源因子,即使与正常核构成重构胚也依然会导致合子基因表达异常;并且胞质受到热激损伤会在热激诱导的凋亡机制中起到比核更大的作用。 相似文献
8.
9.
研究鼠胚成纤维细胞系STO (SIM-6-thiogunanie-oualiain)诱导为多功能干细胞(induced pluripotent stem cells),(STO-iPSCs).通过磷酸钙法将连接有Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc 4个转录因子的慢病毒载体FUW-OSKM转染293FT细胞包装病毒,然后用病毒感染STO细胞,以干细胞培养条件培养.挑取诱导15d的克隆并在有饲养层和无饲养层的培养体系中培养.对获取的STO-iPSCs进行生物学特性分析,具有典型胚胎干细胞的形态特征,碱性磷酸酶染色呈阳性;qPCR结果表明,表达很高的原癌基因Nanog和Oct4 mRNAs;免疫细胞化学表明,表达胚胎干细胞特异性标志Nanog和Oct4,并且能够体外诱导分化为神经细胞.实验获得了STO-iPSCs,建立了STO-iPSCs无饲养层培养体系. 相似文献
10.
山羊皮肤组织细胞分离与培养的研究 总被引:11,自引:0,他引:11
本实验研究了山羊皮肤组织细胞的分离,培养,纯化方法和生长特征,获得了传统代培养的山羊皮肤上皮细胞与成纤维细胞,组织块贴附培养和分散单细胞接种培养均能获得原代山羊皮肤细胞。用150IU/mL胶原酶ITCM199液37℃下培养消化10h,可较好地分解组织块,产生接种浓度的分散单细胞。 相似文献