双拷贝抑制素基因免疫对肉牛卵泡和黄体的影响

 【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组, 每组肉牛分别注射0.75（T1）、1.5（T2）、2.25（T3）、3.0 mg/头（T4）pcISI质粒、3.0 mg/头 pcMV-S空质粒（C1）和3 mL/头 生理盐水（Ｃ2）,初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）;T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,各剂量组成熟卵泡直径均高于对照组,除了T1外,其它3组两侧成熟卵泡均与对照组差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,4个剂量组黄体直径均高于对照组,且均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3黄体最大,T1最小,且T3与T1差异显著（P＜0.05）。加强免疫后10 d（BM10）抑制素抗体与成熟卵泡大小相关显著（r＝0.629,P＜0.05）,与黄体大小相关极显著（r＝0.651,P＜0.01）。【结论】双拷贝抑制素pcISI基因免疫可促进肉牛卵泡和黄体发育,2.25mg为最佳免疫剂量,抑制素抗体水平与卵泡和黄体发育有一定的相关性。     

黄牛对抑制素pCISI基因免疫的反应性

为分析抑制素基因免疫对黄牛的影响,优化免疫方法,将3.0 mg抑制素真核融合表达质粒pCISI以不同纯度并配以不同的免疫佐剂分2次导入72头母黄牛体内,采用ELISA法检测血样中抗抑制素抗体效价。结果表明:抗体阳性牛占59.72%(43/72);添加佐剂的重组质粒较空质粒组免疫效果明显(P<0.05),普鲁卡因佐剂显著优于脂质体(P<0.05);高纯度疫苗组阳性牛的比例略高于低纯度组,但差异不明显(P>0.05)。这说明应用抑制素质粒pCISI免疫黄牛后可产生抗抑制素抗体。     

抑制素基因免疫对南阳黄牛生殖激素的影响

选择40头南阳黄牛,用3.0 mg抑制素基因重组质粒(pCIS,免疫组,n=30)或同剂量的生理盐水(对照组,n=10)间隔21 d注射2次,分别在首次免疫当天、首次免疫后第10天和第21天、加强免疫后第10天和第45天收集血清,应用放射免疫法(RIA)测定处理后不同时期血清中激素水平.结果表明:在5个采血时间点内,加强免疫后第10天抗体阳性牛比率最高,为37.5%,与其他采血时间点有显著差异.免疫组促卵泡素(FSH)平均含量比对照组高,但差异不显著;17-β雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平在加强免疫后2组有显著性差异.另外.抑制素抗体阳性牛的FSH、E2和P4比阴性牛高,但差异不显著.这些结果说明抑制素基因重组质粒可促进肉牛产生特异性抗体,且对FSH、E2和P4水平有影响.     

不同因素对抑制素基因免疫肉牛反应性的影响

为探讨佐剂、质粒纯度和免疫次数3种因素对抗抑制素抗体效价的影响，以分析抑制索基因免疫是否使内牛产生免疫应答，利用已构建的抑制索真核融合表达质粒pCISI对内牛进行了免疫试验．结果表明，抑制素pCISI基因免疫内牛后佐剂处理组比无佐剂组免疫效果明显．对抗体P/N（待测血样的吸光值P与阴性血样吸光值N的比值）来说，普鲁卡因佐剂显著优于脂质体，但就抗体阳性率来说，普鲁卡因和脂质体差异不显著．无论是抗体P/N值还是抗体阳性率，高纯度组的效果略高于低纯度组，但差异不明显．随着免疫次数的增加抗体P/N值和抗体阳性率均升高，两者差异显著，说明了抑制素基因免疫内牛可诱导产生抗抑制素抗体，纯度对抗体的产生和抗体阳性牛比例没有影响，但免疫佐剂与免疫次数有影响．     

抑制素基因免疫对母羊生殖内分泌的影响

用抑制素基因重组质粒(pCIS)免疫生产母羊,剂量分别为每只0.2 mg、0.4 mg和0.8 mg,以生理盐水为对照.结果表明:免疫组抗抑制素抗体阳性率达46.7%.加强免疫后第45天,免疫组的促卵泡素(FSH)水平显著高于对照组(P＜0.05).首次免疫后第20天与加强免疫后第45天抗体阳性羊的促卵泡素水平显著高于抗体阴性羊(P＜0.05).与对照组相比,免疫组的雌激素(E2)与孕激素(P)水平无显著变化(P＞0.05).抑制素基因免疫能调节绵羊的促卵泡素水平,但对雌激素与孕激素的水平无显著影响.     

抑制素质粒DNA免疫对跑山鸡产蛋性能和蛋品质的影响

为了探索抑制素质粒(pcISI)DNA免疫跑山鸡能否提高其产蛋性能及产蛋品质,在某养鸡场随机对自由敞放野养在山林的跑山鸡进行口服含有抑制素真核表达质粒pcISI菌落的试验。结果表明:抑制素基因疫苗可以提高跑山鸡的产蛋性能,且对鸡蛋品质无影响,可以大规模应用在蛋鸡生产中。     

非抗性筛选抑制素基因疫苗免疫对奶牛产后子宫复旧的影响

将24头产后7 d的荷斯坦奶牛随机分为4组,高、中、低剂量免疫组(记为T1、T2、T3)分别注射1010、109、108 CFU/mL无抗性基因的抑制素真核表达质粒基因疫苗(重组菌C500(pXAIS))各3 mL,对照组(CK)注射10%生理盐水3 mL。初次免疫28 d后进行加强免疫。用B超诊断仪检测产后奶牛子宫恢复情况。结果表明:加强免疫能提高抗抑制素抗体P/N值,各免疫组P/N值均高于对照组,其中T1和T2组均与对照组差异显著(P0.05),加强免疫7 d,后T1组抗体阳性率最高,达83.33%;抑制素基因疫苗免疫30 d内,前21 d子宫颈和子宫孕角恢复较快,后7 d恢复较慢,各免疫组奶牛产后子宫颈恢复时间短于对照组,但差异不显著(P0.05);各免疫组产后子宫孕角恢复时间比对照组短,且T1组的恢复时间(28.75±1.92)d)与对照组((33.75±1.09)d)差异显著(P0.05)。以上结果表明,在本试验条件下,非抗性筛选的抑制素真核表达质粒基因疫苗免疫产后奶牛,加强免疫后能引起较好的免疫应答,且能促进奶牛产后子宫复旧。     

抑制素基因免疫对母羊生殖内分泌的影响

用抑制素基因重组质粒（pCIS）免疫生产母羊，剂量分别为每只0．2mg、0．4mg和0．8mg，以生理盐水为对照。结果表明：免疫组抗抑制素抗体阳性率达46．7％。加强免疫后第45天，免疫组的促卵泡素（FSH）水平显著高于对照组（P〈0．05）。首次免疫后第20天与加强免疫后第45天抗体阳性羊的促卵泡素水平显著高于抗体阴性羊（P〈0．05）。与对照组相比，免疫组的雌激素（E2）与孕激素（P）水平无显著变化（P〉0．05）。抑制素基因免疫能调节绵羊的促卵泡素水平，但对雌激素与孕激素的水平无显著影响。     

猪脾转移因子对肉鸡免疫效果的影响研究

为研究猪脾转移因子（TF）对肉鸡疫苗的免疫增强作用，在肉鸡免疫过程的不同时间加入不同剂量转移因子作对比试验，并在对照组A、试验组B1、试验组B2三组鸡群做ND抗体检测、IB抗体检测、IBD抗体检测，脾脏、法氏囊重量测定和出栏效果检测。结果表明，添加不同剂量TF的试验组B1和B2在ND抗体检测、IB抗体检测、IBD抗体检测，脾脏、法氏囊重量测定和出栏效果等方面显著高于对照组A，差异显著（P<0.05），试验组B1和试验组B2之间差异不显著（P>0.05）；由此可知，TF可作为禽疫苗免疫增强剂，促进免疫器官的生长，提高免疫水平，增强机体抗病能力。     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为探索在猪圆环病毒2型(PCV-2)阳性猪场免疫猪圆环病毒疫苗对猪场实际临床生产中猪瘟疫苗免疫效果的影响,遂将某规模化猪场的一栋存在PCV-2感染的150头产房仔猪随机分为试验组和对照组,每组75头,试验组在14日龄免疫某进口PCV-2杆状病毒载体灭活疫苗,对照组不免疫,并分别在PCV-2疫苗免疫前和猪瘟疫苗二免后30天每组随机采血18头仔猪检测猪瘟抗体。结果显示:PCV-2疫苗免疫前两组仔猪的猪瘟抗体水平无明显差异,猪瘟疫苗二免后30天,试验组的猪瘟抗体平均值和猪瘟抗体离散度均显著好于对照组。表明,PCV-2的感染会对猪的免疫系统造成损害从而抑制猪瘟疫苗的免疫应答,在PCV-2阳性猪场免疫猪圆环病毒疫苗能够显著增强猪瘟疫苗的免疫效果。     

Endocrine and ovarian responses in water buffalo cows immunized against inhibin and subjected to the Ovsynch protocol

The aim of this study was to investigate the feasibility of stimulating ovarian follicle development in order to improve fertility in water buffalo cows by immunization against inhibin. The experiment was carried out in early summer(May) and included 24 multi-parity crossbred Murrah-Swamp buffaloes that were divided into immunized(n=11) and control(n=13) groups. Each immunized cow was administered with a 2-m L immunogen of mineral oil adjuvant containing 2 mg of recombinant inhibin α-subunit fusion protein. The controls were treated with the adjuvant only. All animals received Ovsynch protocol treatment, starting on the day of the antigen administration, and they were artificially inseminated upon behavioral estrus. As a result, all of the immunized buffaloes generated antibodies against inhibin during the experimental period and had higher plasma concentrations of follicle-stimulating hormone(FSH), activin, and estradiol(E2) related to estrous expression. A higher proportion of immunized animals expressed estrus behavior than did the controls(72% vs. 30%, P0.05). On average, inhibin-immunized buffaloes had significantly more large follicles(≥9 mm in diameter) than the controls(mean±SEM; 1.2±0.1 vs. 0.84±0.1, respectively; P0.05) and a slightly higher mean total number of follicles(≥2 mm; 11.4±0.7 vs. 9.0±1.1, respectively; P=0.09) and small(2–4 mm) follicles(8.81±0.6 vs. 6.84±1.0, respectively; P=0.12). A higher percentage of cows ovulated in the immunized group than in the control group(91%(10/11) vs. 54%(7/13), respectively; P0.05). Moreover, inhibin-immunized cows had slightly larger corpus luteum(CL) than the controls 9 days after ovulation and significantly higher(P0.01) post-ovulation peak plasma progesterone(P4) concentrations. Immunization against inhibin also marginally increased the conception rate 42 days after insemination(45.8% vs. 15.4%; P0.05). These results demonstrate that immunization against inhibin, coupled with the treatment with the Ovsynch protocol, can constitute a new technique to increase fertility in water buffalo cows.     

Effect of Inhibin α(1-32)Gene Immunization on the Follicular Development and Reproductive Hormones in Rats

A total of 40 rats, aged in 30 days, were divided into 4 groups and immunized (intramuscularlyinjection) with 0 μg(control), 15 μg (group 1), 25 μg (group 2) or 40 μg(group 3) of inhibin α(1-32) re-combinant expression plasmid pcINH in combination with liposome. Booster was given without liposome onday 20 after primary immunization. The results showed that 50%(13/26) rats were detected in positive anti-body against inhibin. However, the increase of immunization dosage and booster did not promote the ratio ofantibody positive rats. The number of matured follicles above 0.8 mm in diameter in the antibody positive ratswas 2.3 more than that in the negative rats (P＞0.05). The concentration of blood plasma FSH increased dis-tinctively on day 10 after primary immunization (P＜0.05), but no increase was observed after booster immu-nization. The 17-β-estradiol levels in blood plasma of rats between the positive and the negative groups had noremarkable differences (P＞0.05). These results suggested that recombinant inhibin expression plasmid couldstimulate animal body to produce antibody against inhibin.     

抑制素基因免疫诱导单胎绵羊孪生的研究

应用抑制素基因免疫重组质粒 (PCIS)免疫绵羊 ,首次免疫后 ,绵羊能够产生抗抑制素抗体 ,加强免疫后抗体增加显著 (P <0 0 5 ) ,免疫羊的抗体阳性率可达 4 6 7%。免疫组与对照组促卵泡素 (folliclestimutatinghormone ,FSH)的含量在加强免疫第 4 5天时差异显著 (P <0 0 5 )。在首次免疫第 2 0天与加强免疫第 4 5天 ,抗体阳性羊的促卵泡素含量显著高于抗体阴性羊 (P <0 0 5 )。免疫羊的双羔率达 39 2 % ,显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,比对照组提高 2 9 2 %。     

抑制素基因免疫对黄牛孪生的影响

为增强肉牛的繁殖力,应用本实验室构建的抑制素真核融合表达质粒pCISI,提纯后辅以不同的免疫佐剂注入96头母黄牛体内,采用AMI-900兽用B超对其中84头发情牛进行卵泡检测,并对其中78头妊娠牛进行早期胚胎数目检测。结果发现:抑制素质粒pCISI能促进双大卵泡发育(80.95%,68/84),诱发排双卵(60.71%,51/84),诱导黄牛孪生(41.03%,32/78);普鲁卡因佐剂(48.78%)比脂质体(32.43%)效果明显。研究表明,抑制素基因免疫能有效提高黄牛的繁殖率。     

抗凋亡因子cFLIP在延边黄牛性周期黄体中表达的研究

为了研究延边黄牛黄体中抗凋亡因子(Cellular FLICE-like inhibitory protein:cFLIP)的变化情况及其与细胞凋亡的关系,本实验采用免疫染色方法,观察cFLIP在延边黄牛周期黄体中的表达变化,并从组织化学角度分析了cFLIP作为抗凋亡因子参与延边黄牛的黄体退化。     

促孕散对不孕奶牛血清中微量元素和白介素的影响

【目的】探讨经促孕散对不孕奶牛治疗前后血清中微量元素（Cu、Fe、Mn、Zn）与白介素（IL-1、IL-6）的含量变化规律。【方法】利用火焰法、原子吸收光谱法和酶联免疫吸附法检测实验组和正常组治疗前、后血清中微量元素和白介素的含量。【结果】①促孕散治疗持久,黄体有效率为91.67%,卵巢静止有效率为88.89%,②持久黄体型治疗前血清中Cu、Zn含量显著高于正常组（P＜0.05）,Mn含量极显著低于正常组（P＜0.01）,治疗后血清中含量接近正常,且含量水平差异不显著（P＞0.05）,Fe、IL-1、IL-6含量治疗前后与正常组比较差异不显著,③卵巢静止型治疗前血清中Mn含量低于正常组（P＜0.01）,IL-1含量高于正常组（P＜0.05）,治疗后逐步与正常组含量水平差异不显著（P＞0.05）,Cu、 Fe、Zn、IL-6含量治疗前后与正常组比较差异不显著（P＞0.05）。【结论】促孕散对不孕奶牛血清中部分微量元素和白介素含量有微调作用,在奶牛不孕症治疗效果上有不可忽视的作用。     

奶牛体内性控胚胎生产的研究

为探讨奶牛合理的超排方法,采用分离的X冻精对17头超数排卵的荷斯坦奶牛进行人工授精,生产体内性控胚胎。结果表明,处理Ⅰ组在头均获卵数、可用胚及退化胚几个方面都低于处理Ⅱ组,但差异不显著(P>0.05);头均黄体数和未受精数,Ⅰ组高于Ⅱ组(P>0.05);青年牛头均获卵数、可用胚和退化胚方面都高于经产牛组,但差异不显著(P>0.05);青年牛头均未受精卵数显著高于经产牛(P<0.05),头均黄体数低于经产牛,但差异不显著(P>0.05)。