库尔勒香梨的苹果褪绿叶斑病毒cDNA探针检测技术研究

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明,当探针浓度为400ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度。Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,并对库尔勒地区香梨带毒情况进行了检测。结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,两种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号,库尔勒香梨样品有45%的带苹果褪绿叶斑病毒。     

辣椒不同组织总RNA提取方法的比较

采用3种不同方法分别提取辣椒不同组织部位的总RNA,以期筛选适合于辣椒总RNA提取的材料与方法。1.2%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测结果表明,方法二提取的辣椒叶片和茎总RNA样品的28 S和18 S条带明亮,质量好,产率高;对于辣椒幼果,方法三的提取效果最好;辣椒总RNA的提取效果具有组织特异性,不同组织部位RNA提取需有不同方法。     

库尔勒香梨的苹果茎痘病毒cDNA探针检测技术研究

 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表     

用CTAB-PVP法提取棉花各组织总RNA的研究

针对棉花组织总RNA难以提取、不同组织的提取方法难以统一的问题，借鉴Jaakola等的越橘果实总RNA提取方法（即CTAB-PVP法），对棉花组织总RNA的提取效果进行了分析。实验结果表明：得到的棉花纤维、胚珠、叶片、胚根、花瓣、下胚轴和花药各组织的RNA完整性好，其D260／D280比值为1．7～2．0，产率30～180pg／g（鲜质量）；用开花后15d纤维的RNA为材料进行反转录，再利用RT-PCR和3’RACE技术进行克隆，各获得1个大小为542和712bp的cDNA克隆，经序列分析鉴定，这2个片段分别编码棉花微管结合蛋白和微丝结合蛋白。     

一种改进的苹果总RNA高效提取方法

在改进的CTAB提取法基础上,结合总RNA的LiCl沉淀法,摸索出了一套适合苹果组织总RNA提取和纯化的方法。该方法得到的苹果总RNA完整性好,纯度和得率高,且成本低,容易操作。解决了RNA易降解以及木本植物组织中多酚和多糖含量高导致的在提取过程中RNA被氧化和共沉淀从而导致RNA产率低的问题。     

番茄组织总RNA提取方法研究

从RNA的完整性、纯度和产量等方面比较了TRIzol,RNAplant,TRIpure等3种RNA提取试剂对番茄不同组织部位总RNA的提取效果.结果表明,RNAplant能从成熟组织中获得较高质量和产量的总RNA,用该方法提取的番茄老化组织总RNA经RT-PCR能成功进行内参检测.     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

净信科技多样品动物组织研磨方法的优化

将小鼠的不同脏器用传统的组织研磨方法和近年来开发出来的全自动样品快速研磨机进行匀浆，产物提取总RNA后，用01igodT进行反转录，然后利用小鼠β-Actin基因的特异引物和Taqman探针进行定量，结果发现对于较难捣碎的组织如小鼠尾巴和肌肉，用传统的组织研磨方法和未优化的多样品组织匀浆方法制备的RNA产量没有差别；对于较易磨碎的组织如小鼠心、肺和胃组织，未优化的多样品组织匀浆方法制备的RNA产量反而不如传统的组织研磨方法；通过降低多样品组织捣碎仪匀浆时的温度或匀浆时加入提取RNA的RNAisoPlus等优化措施后，多样品组织匀浆方法制备的RNA产量比传统的组织研磨方法有所提高，不同样品中获得的D-hctinRNA拷贝数趋于一致。利用优化的多样品组织匀浆方法制备RNA具有快速、和产量高、样品处理过程中人为因素少等优点，特别适合于大量RNA样品的制备。     

白皮松总RNA3种提取方法的比较研究

[目的]对白皮松（Pinus bungeana）松针总RNA提取方法做比较,以得到完整的、高质量的白皮松总RNA。[方法]采用Trizol法、RNA提取试剂盒法和LiC l沉淀法3种方法提取白皮松总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的完整性和提取纯度。[结果]LiC l沉淀法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280均在1.80～2.00,28S、18S条带清晰。[结论]LiC l沉淀法能高效地从白皮松针叶组织中分离出纯度高、完整性好的RNA样品。     

白皮松总RNA三种提取方法的比较研究

[目的]对白皮松（Pinus bungeana）松针总RNA提取方法做比较,以得到完整的、高质量的白皮松总RNA。[方法]采用Trizol法、RNA提取试剂盒法和LiCl沉淀法3种方法提取白皮松总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的完整性和提取纯度。[结果]LiCl沉淀法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280均在1.80～2.00,28S、18S条带清晰。[结论]LiCl沉淀法能高效地从白皮松针叶组织中分离出纯度高、完整性好的RNA样品。     

多样品组织研磨仪在提取菊科植物各组织中总RNA的应用

通过多样品组织研磨仪处理菊科植物组织,从其根、茎、叶和花蕾中提取纯度高、完整性好的RNA。总RNA浓度与纯度通过分光光度计检测,总RNA的质量与完整性通过琼脂糖凝胶电泳检测。通过与传统研磨破碎方法处理得到的结果进行对比,发现多样品组织研磨仪处理的菊科植物组织在确保所提取的RNA高质量和完整性的前提下,能够从相应的植物组织中获得更高含量的RNA。     

用改良的TRIZOL法快速提取仿刺参和中间球海胆的总RNA

用改良的TRIZOL法和普通TRIZOL法分别提取仿刺参Apostichopus japonica体壁、肠、体腔液和中间球海胆Strongylocentrotus intermedius的管足、性腺、齿间肌的总RNA。结果表明:用普通TRIZOL法提取时间长,电泳条带不很清晰,存在降解且各个组织提取的状况不稳定,杂质量多;而用改良TRIZOL法能够快速提取仿刺参、海胆组织的总RNA,电泳后得到的28S rRNA和18S rRNA条带清晰、完整性好、纯度高、得率高,其A/A为2.04~2.14,总RNA浓度为44.96~115.02 ng/μL。     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

松辽黑猪脏器总RNA提取方法的改进及应用

[目的]改进松辽黑猪脏器总RNA的高效快速提取方法,为检测脏器组织RNA提供基础。[方法]采用液氮研磨,利用Trizol使细胞膜破裂,并通过氯仿、异丙醇、无水乙醇处理,使RNA与杂质分离,得到高质量的RNA。[结果]得到的松辽黑猪脏器总RNA浓度和纯度都比较高,并且未被降解。[结论]该方法提取的RNA质量没有DNA污染、纯度高、没有降解、完整性好,稳定可靠,并且用时少。     

一种简单高效提取棉花不同组织总RNA的方法

目前,虽然已经报道了几种比较有效的提取棉花组织总RNA的方法,但是这些方法往往费时费工,又很难同时适用于棉花不同组织的总RNA提取。以CTAB法为基础进行技术改良,同时结合LiCl沉淀等,总结出了一种简单、快速又普遍适用于棉花各组织总RNA的提取方法。试验证明,此法提取到的RNA纯度高、完整性好,适用于逆转录合成cDNA第一链、RT-PCR分析以及Northern杂交等分子实验。     

木薯总RNA提取初步研究

为了筛选适合木薯不同部位总RNA提取的方法,采用常规CTAB法、TRIZOL和RNAplant试剂对木薯叶片和块根总RNA进行提取,并采用两步法进行RT—PCR检测。结果表明,采用常规CTAB法提取木薯总RNA耗时长、效率低,不利于提取大批量材料,但其RNA纯度较高,能产生理想的条带。TRIZOL有利于提取木薯叶片的总RNA而不能提取块根总RNA;RNAplant试剂可以提取木薯各部位的RNA,但纯度不高,且有DNA污染,需要用DNase I处理才能进行RT—PCR检测。TRIZOL和RNAplant试剂混合可以很好地提取木薯各部位总RNA,条带清晰,很少出现降解现象,但仍然无法消除DNA。因此,可根据木薯不同部位要求,选用合适的方法提取总RNA。     

荔枝果肉总RNA的提取及实时定量PCR分析

荔枝果肉因含糖量高、水分大和含较高活性的氧化酶而难以提取高质量的总RNA。以妃子笑荔枝不同发育期果肉为试材,经过多种提取方法比较和改进,发现市售RNA提取试剂盒改进提取步骤后均可快速得到质量较高的总RNA,果肉总RNA完整性好、质量高,平均浓度都在20μg/g以上,符合进一步分子生物学试验的要求。以反转录后得到的cDNA为模板,进一步的实时定量PCR反应表明以未纯化的RNA反转录的cDNA为模板没有信号,而经纯化后即可得到有规律的基因表达。     

甘蔗种质总RNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗种质RNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。本实验是以成熟甘蔗的叶片为材料,通过对前人的植物RNA提取方法进行改良,寻求最佳的甘蔗总RNA提取方法。通过改良最后得到的异硫氰酸胍法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点。用该法提取得到的甘蔗总RNA经琼脂糖凝胶电泳可获得28S、18S和5S rRNA3条带,并且28S rRNA的亮度大于18S rRNA的亮度。表明该方法提取的RNA完整性好,纯度高。另外对所得部分甘蔗种质的总RNA进行RT-PCR检测,可特异扩增出目标片段,说明用异硫氰酸胍法Ⅲ提取的甘蔗种质总RNA,可以直接用于后续的分子生物学试验。     

黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA提取方法的比较

目的筛选适合黄花石蒜花蕊和花葶组织中总脱氧核糖核苷酸(RNA)的提取方法。方法采用CTAB法、SDS法和植物总RNA提取试剂盒法对黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA进行提取并比较其效果。结果 CTAB法和SDS法均不能提取到完整的RNA;植物总RNA提取试剂盒能有效地去除蛋白质、多糖及DNA,28S条带的荧光亮度是18S条带的2倍左右,OD260/280值在1.8~2.0之间,花蕊和花葶的产率分别为304.1μg/g和255.8μg/g,并且试剂盒法提取的总RNA通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。结论试剂盒法适合黄花石蒜花蕊和花葶组织总RNA的提取,提取的总RNA质量高、完整性好、产率高,符合后续实验的要求。     

洋葱不同组织RNA提取方法比较分析

探讨洋葱不同组织总RNA提取的最优方法,以期为今后开展洋葱的分子生物学研究奠定基础。以洋葱品种W470发育旺盛时期的叶片、根、鳞茎为材料,比较Ta KaRa试剂盒法、TIANGEN试剂盒法、TRIzol法、p BIOZOL法等4种RNA提取方法提取洋葱RNA的效果。凝胶电泳结果显示,除了TIANGEN试剂盒法不能提取洋葱根的总RNA,其他方法在洋葱不同组织中均可提取到不同质量的RNA。对不同方法提取洋葱RNA浓度、纯度进行检测发现,Ta KaRa试剂盒法提取洋葱叶片的总RNA浓度为342.31μg/g,p Biozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA浓度分别为1 119.39、171.85μg/m L。经RT-PCR验证,Ta KaRa试剂盒法提取的洋葱叶片总RNA、p BIozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA均成功扩出洋葱β-actin基因片段。由结果可知,Ta KaRa试剂盒适合提取洋葱叶片的总RNA,p BIOZOL法适合提取洋葱鳞茎、根的总RNA且质量能够满足后续试验要求。