绿头鸭线粒体ND2基因全序列测定及其研究

1材料与方法1．1材料野生绿头鸭咀样4份（雌雄各2份）,采自吉林省吉林市。1．2总DNA提取采用酚氯仿抽提法提取总DNA,0．7％琼脂糖凝胶电泳检测,-20℃保存。     

麻疯树cpSSR标记技术的建立与体系优化

1材料与方法 1．1材料采自我国西南10个地区的麻疯树野生居群的枝条扦插（表1）,摘取幼叶用于提取总DNA。     

甜瓜总DNA提取方法比较研究

分别以甜瓜品种"东方蜜1号"的成熟干种子、萌动种子、子叶和真叶为材料,选用4种不同的提取方法进行总DNA提取试验.结果表明:包括干种子在内的不同生长期的材料均能提取到总DNA,刚展平子叶的提取效果最好;4种提取方法中以尿素提取法最为简便,效果最佳.经PCR检验,干种子和子叶提取的总DNA均可用于PCR扩增.     

基于LiCl法优化酿酒葡萄叶片的RNA提取

为获得纯度高、质量好的酿酒葡萄植株叶片RNA以用于荧光实时定量分析,为后续以酿酒葡萄叶片RNA为材料研究相关转录水平的调控提供技术保障,以经典酿酒葡萄赤霞珠叶片为试验材料,比较分析了重蒸酚法、Trizol法、改良的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和LiCl法（基于改良的SDS法）4种方法对酿酒葡萄叶片RNA提取的影响。结果表明,重蒸酚法提取RNA浓度较低,完整性较差,存在部分降解;Trizol法提取的RNA则有部分DNA污染;改良CTAB法提取浓度较高,但蛋白和DNA污染严重;LiCl法提取结果显示,28S的条带亮度是18S的2倍,条带无拖尾,完整性较好,存在DNA污染和少量的蛋白污染。进一步在LiCl法基础上利用醋酸钠、DNAase消化、苯酚抽提法进一步优化,并采用荧光实时定量验证,结果表明,醋酸钠的加入RNA质量无明显改善;然而,经氯仿和水饱和酚（体积比1∶1）抽提2次,氯仿抽提1次,氯仿和水饱和酚（体积比1∶1）抽提1次,并经DNAase进行消化,最终提取出质量浓度为173.611μg/mL、A260/280为1.803纯度高、完整性较好且无蛋白和DNA污染的葡萄叶片总RNA;...     

小麦DNA提取方法的比较

以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法提取小麦基因组DNA,通过对小麦DNA提取方法的比较,为满足大批量材料进行SSR分子标记的检测寻找最优方法.结果表明,NaOH法提取DNA用时短、方法简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3省略了65℃温浴,并将两次氯仿:异戊醇抽提改为1次抽提,既缩短了试验时间和降低了成本,提取的DNA又可以满足进行分子标记检测的需要.     

三叶木通叶片保存时间对基因组DNA提取效果的影响

为了考察三叶木通叶片保存时间与基因组DNA提取质量的关系,以低温保存1个月和6个月的三叶木通〔Akebia trifoliata(Thunb)Koidz〕叶片为材料,采用改良的CTAB法提取其基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测获得的DNA质量。结果表明:低温保存1个月三叶木通叶片中提取的DNA质量较高,检测条带清晰,可用于后期的分子生物学研究。结论:三叶木通叶片保存时间过长,其核酸结构易发生改变而降解,从而影响DNA的提取质量。     

樟树干叶DNA提取方法的研究

利用硅胶干燥的樟树幼叶为材料,用改良的CTAB法进行DNA提取实验,并以樟树新鲜嫩叶为对比。结果表明,加入质量分数为3%可溶性PVP粉与材料充分研磨,在提取缓冲液中加入体积分数为2%的β-巯基乙醇,能有效地去除材料中的多酚类物质;用氯仿/异戊醇(24∶1)提取裂解液2次所获得的上清,加入1/20体积5 mol/L的NaC l,并用无水乙醇沉淀DNA,可以有效地去除多糖的干扰,所提取的DNA产率和纯度均较高。尽管干叶提取的DNA的平均产率(373 ug/g)和纯度(A260/A280比值为1.54~1.92)比鲜叶提取的DNA的平均产率(467 ug/g)和纯度(A260/A280比值为1.6~1.9)略低,但两者的RAPD-PCR扩增的条带都清晰、稳定、明亮,完整性好。     

寒富苹果不同材料DNA的提取方法

实验利用改良CTAB法以寒富苹果的冬芽、半木质化韧皮部、老枝韧皮部、成熟叶片和秋梢嫩叶为材料提取总DNA。结果表明：5种不同的材料都能提取出DNA且A260／A280值都在1．8以上,所提DNA电泳带纹清晰、亮度高且DNA的产量在70-160μg／g之间。清晰明亮的PCR产物电泳结果也表明所提取的DNA完全满足ISSK分析的要求。     

大豆不同组织材料的DNA提取

以大豆叶片、愈伤组织和干种子为材料进行大豆基因组DNA提取的比较试验.结果表明:从以上3种组织材料中均能提取到较高质量的DNA,利用愈伤组织为材料提取的DNA质量比叶片和种子略好,从愈伤组织中可以提取到质量较高的模板DNA.     

思茅松不同组织DNA的提取

以思茅松(Pinus kesiya var.langbianensis)嫩针叶、半木质化韧皮部、木质化韧皮部及成熟针叶为实验材料,采用高盐沉淀法提取思茅松的总DNA.结果表明:除成熟针叶外,其它3种组织中次生物质含量少,均为提取DNA的极好材料,DNA的得率达到21.32～29.85 μg·g-1,A260/A280值在1.6左右.清晰明亮的RAPD产物也表明所提取的DNA无论在质量还是数量上均可满足DNA分子标记的要求.因此,根据不同季节,可选择不同的植物组织来提取高质量的DNA.     

利用微卫星标记分析湖羊GDF8区域的遗传多样性

[目的]分析湖羊GDF8区域的遗传多样性。[方法]选择位于湖羊第2号染色体GDF8区域可能与生长性能相关性较大的4个微卫星标记(BMS1591、TEXAN-2、FCB128、BM81124)对湖羊的生长性状进行研究。[结果]4个微卫星标记在湖羊中的杂合度较高、有效等效基因个数较多、多态信息含量丰富,都达到了高度多态水平(PIC>0.5)。[结论]供试4个微卫星标记可以用于湖羊生长性状的遗传多样性评估。     

7个微卫星标记对5个肉用绵羊品种的遗传多样性分析

[目的]为肉用绵羊的品种资源保护和杂交利用提供理论依据。[方法]利用7个微卫星标记分析国外3个绵羊品种和我国2个地方绵羊品种的遗传多样性,研究其品种内遗传变异和种间遗传关系。[结果]从5个绵羊品种中共检测到105个等位基因,在各群体中每个微卫星座位上均可检测到5个以上等位基因,说明7个微卫星标记含有丰富的遗传信息。位点平均杂合度和品种平均杂合度分别为0.790 1~0.889 7和0.795 1~0.867 5,属于高度杂合位点和高度杂合品种。7个位点均为高度多态位点,PIC为0.762 6~0.879 6,而5个绵羊品种的平均PIC为0.770 3~0.865 0。NJ系统树分析表明3个国外绵羊品种遗传关系较近。[结论]7个微卫星标记均具有高度多态性,可用于绵羊品种的遗传多样性和系统发生关系的分析。     

湖羊GDF9基因多态性和产羔性能的关系

[目的]研究湖羊GDF9基因多态性和产羔性能的关系。[方法]以湖羊为试验对象,对湖羊GDF9基因做PCR-SSCP多态性检测,分析多态性对湖羊产羔性能的影响。[结果]检测出3种基因型,定义为GG、AG、AA。基因型测序显示,在152 bp处发生了A被G碱基替换而发生突变。GG基因型频率、AG基因型频率和AA基因型频率分别为0.107、0.883和0.010。湖羊GG、AG和AA基因型的第1,2胎平均产羔数分别为2.068、2.025和1.500。3种基因型对第1胎产羔数没有影响;第2胎产羔数GG、AG与AA之间有显著性差异,表明GDF9基因对湖羊第2胎产羔数有影响。从第1、2胎的平均产羔数来看,差异不显著,但GG和AG基因型的产羔数相对AA基因型较高。[结论]GDF9基因对绵羊正常的繁殖是必需的,且该基因对湖羊产羔数有一定影响。     

7个绵羊微卫星DNA标记在绵(山)羊群体中的多态性检测

选择分别位于绵羊2,4,6,9,17和19号染色体上的7个微卫星标记OarFCB11,OarFCB128,MAF70,OarAE101,MAF33,OarFCB48和OarFCB304,对湖羊、同羊及长江三角洲白山羊的典型群随机样本相应位点进行了PCR检测。结果表明,每个微卫星座位发现7个以上等位基因,且均存在多态;湖羊、同羊、长江三角洲白山羊群体杂合度(H)分别为0.9092,0.9177和0.8867,相应的群体基因平均多态信息含量(PIC)分别为0.9024,0.9116和0.8774,有效等位基因数(Ne)分别为11.7723,12.4538和11.6104,均以同羊为最高;以产生有效条带为标志,随机样本的PCR扩增效率存在明显的群体间和座位间差异,以长江三角洲白山羊和OarFCB128座位为最高;以7个座位微卫星等位基因频率推算群体间标准遗传距离,山羊与绵羊群体间遗传距离远大于绵羊群体之间,湖羊、同羊间亲缘距离系数R为0.1998。研究结果提示:选择的7个微卫星DNA座位均为多态座位;以7个微卫星标记为测度,湖羊、同羊及长江三角洲白山羊具有丰富的遗传多态性;7个微卫星标记可进一步用于绵山羊近缘种间遗传分析研究。     

利用微卫星标记对3个绵羊品种肉用性状多态性的研究

[目的]研究3个绵羊品种肉用性状的多态性。[方法]利用微卫星标记技术研究新疆地区无角陶塞特、萨福克与中国美利奴绵羊群体的遗传多态性,并对所列举微卫星位点的多态性进行统计分析。[结果]所测3个绵羊群体的基因频率分布不均匀,其有效等位基因数在12～15,不同等位基因间片段大小的差异不等。3个品种绵羊群体的变异程度很高,各绵羊品种的杂合度为0．8214-0．9252。所选4个微卫星座位均表现出了高度多态性,多态信息含量（PIC）为0．7923～0．9167,是普遍适合于绵羊肉用生产性状的多态标记。[结论]该研究为进一步寻找与生产性能相关的遗传标记提供了理论依据。     

应用两类遗传标记方法分析湖羊和同羊的遗传多样性

随机抽取湖羊 6 3只、同羊 6 5只分别进行 14个结构基因座和 7个微卫星标记的遗传检测 ,比较由两种遗传标记获得的群体基因平均杂合度 (H)、多态信息含量 (PIC)及群体有效等位基因数 (Ne)。结果表明 :由微卫星等位基因频率获得的群体基因平均杂合度、多态信息含量及有效等位基因数显著大于由结构基因座获得的 ,且在两群体中变化趋势一致。提示 :结构基因座和微卫星标记是绵羊群体遗传多样性研究的可靠遗传标记 ,而微卫星标记揭示更为丰富的遗传变异 ;两绵羊群体在结构基因座和微卫星DNA两个层次上具相当的遗传多样性 ;微卫星标记可有效用于近缘群体间的遗传分析。     

SPF莱航鸡种群的微卫星多态性分析

【研究目的】利用5个微卫星位点对两个SPF莱航鸡封闭群进行了遗传检测,探讨群体内的遗传多态性,以期为实验用鸡遗传质量监测提供理论依据。【方法】PCR扩增后用ABI-3100Avant全自动基因分析仪进行电泳检测,用Genemapper3.1软件进行片段大小分析,收集电泳结果并进行基因分型。【结果】5个微卫星标记在A、B两个鸡群中共检测到20个等位基因,平均为4个;两个鸡群的平均杂合度为0.6211,平均多态信息含量为0.6663,表明所选标记在SPF莱航鸡群中有较高的多态性;adl176位点的180峰仅出现在A群中,188、191两峰在两个群体中的频率相差极大,可作为品系鉴定的理想引物。【结论】大部分微卫星具有多态性,若进行大范围筛查,必能找到一些特异位点为遗传监测所用。     

小尾寒羊微卫星标记的多态性及其与繁殖性能的相关性研究

[目的]为小尾寒羊的选育和利用提供参考。[方法]选取与小尾寒羊FecB基因紧密连锁的5个微卫星位点(OarHH55、OarJ1A、McM53、BM1329、BM143),分析其在小尾寒羊群体中的多态性,并初步探索其与小尾寒羊高繁殖性能的关系。[结果]5个微卫星位点在小尾寒羊群体中的平均纯合度为0.37,平均杂合度为0.63,说明小尾寒羊微卫星位点存在一定程度的变异。其中,McM53的纯合度最小、杂合度最大,而OarHH55的纯合度最大、杂合度最小。5个微卫星位点均为高度多态性,其中OarHH55、OarJ1A、McM53和BM143的多态信息含量均大于0.6,接近0.7,是较理想的基因选择标记。[结论]该研究结果对小尾寒羊和其他绵羊繁殖性能进行标记辅助选择具有借鉴意义。     

利用微卫星DNA多态性预测引进肉用绵羊品种杂种优势

【目的】利用微卫星DNA在不同绵羊群体中的多态性预测引进肉用绵羊品种与小尾寒羊的杂种优势。【方法】利用5个微卫星基因座对4个国外引进肉羊品种及小尾寒羊5个群体的等位基因频率、群体多态信息含量、有效等位基因数、杂合度和遗传距离进行了遗传检测，并测定4个引进肉羊与小尾寒的杂交效果。【结果】5个微卫星基因座在白头萨福克、黑头萨福克、道赛特、得克赛儿及小尾寒羊5个群体中存在多态性，可以用于绵羊遗传多样性的评估；从不同品种看，道赛特羊的遗传变异程度最大，而小尾寒羊的遗传变异程度相对较小；经遗传关系分析，在引进的4个肉羊品种中，与小尾寒羊杂交优势由大到小依次为白头萨福克、黑头萨福克、道赛特、得克赛儿，与实际杂种优势测定结果相符。【结论】利用微卫星DNA多态性预测引进肉用绵羊品种与小尾寒羊的杂种优势是可行的，将对今后绵羊育种具有重要的应用价值。     

绵羊和山羊基于两种标记的遗传分化初步研究

对湖羊、同羊及长江三角洲白山羊的随机样本分别进行14个结构基因座和7个微卫星标记的遗传检测,比较由2种遗传标记获得的群体基因平均杂合度、多态信息含量及群体有效等位基因数,分别根椐2种类型的基因频率资料,计算3个群体间的标准遗传距离并加以比较.结果表明由微卫星等位基因频率获得的群体基因平均杂合度、多态信息含量及有效等位基因数显著大于由结构基因座获得的,由结构基因座资料计算的3个群体间标准遗传距离为0.026 8～0.248 7,微卫星标记资料计算的3个群体间标准遗传距离为0.232 1～1.231 3,绵山羊群体间显著大于绵羊间.结构基因座和微卫星标记一致揭示了3群体内的遗传变异程度由大到小依次为同羊、湖羊、长江三角洲白山羊;微卫星标记较结构基因座标记更能表达近缘种间进化趋异水平;可将FCB11、MAF33、AE101、FCB128及FCB304位点作为研究绵山羊近缘种间遗传分化的标志性位点.