谷子种子DNA快速提取新方法

为满足谷子高通量分子标记检测的需要,探究在不使用液氮研磨情况下,无需经过发芽,改进CTAB方法,直接从干种子中提取DNA。结果显示,采用新方法对谷子种子提取的DNA经过分光光度计以及琼脂糖电泳检测得出,A_(260/280)值在1.88~1.92,质量浓度在1 662.85~2 551.89 ng/μL;并以此为模板进行SSR-PCR扩增,结果显示,所得条带清晰、多态性丰富。该方法提取的谷子种子DNA质量稳定,能够满足分子标记检测的要求,同时简化了操作流程,实现了谷子种子DNA的高通量快速提取,为谷子高通量分子标记检测奠定了基础。     

小麦干种子基因组DNA的提取及效果研究

分别采用试剂盒和CTAB法提取小麦干种子基因组DNA,DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测。结果表明,试剂盒提取DNA操作过程快速简便、成本较低,DNA产率和纯度优于CTAB法。通过多重PCR技术分别以小麦LMW-GS亚基Glu-B3位点和黑麦碱secalin-p基因的特异引物进行扩增,均能够扩增出清晰的目标条带,提取的基因组DNA能够满足分子检测的实验要求。     

小麦不同部位DNA提取的比较研究

[目的]探讨小麦不同取材部位对DNA提取质量和产率的影响。[方法]分别以小麦的种子、根尖和幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法分别提取小麦3个部位的基因组DNA,用0．8％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模版进行RAPD扩增。[结果]采用小麦叶片提取DNA的产率最高,种子次之,根尖最低。3个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为756μg/ml;其次是种子,为233μg/ml;根尖获得的DNA浓度最低,为90μg/ml。小麦不同部位提取的DNA模板对RAPD扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。[结论]小麦3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。     

半粒小麦种子DNA提取的研究

本研究以半粒小麦无胚种子为材料,提取DNA并进行PCR扩增检测,同时将剩下的半粒小麦有胚种子进行催芽试验.结果表明:从半粒小麦无胚种子和小麦幼叶中都能提取出质量较高的DNA;用λDNA进行浓度检测发现,小麦幼叶提取的DNA浓度高于半粒小麦无胚种子提取的DNA浓度;分别用所提取的小麦DNA作为PCR扩增模板均能够得到理想的特异条带,满足分子检测的需要;催芽试验表明,半粒小麦有胚种子也能够正常生根发芽,可作为染色体分选、原位杂交和繁殖的材料.     

小麦DNA提取方法的比较

目的 用4种方法 对小麦DNA进行提取,从中选取最好的方法 ,满足小麦材料进行分子标记的检测.方法 以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法,提取小麦基因组DNA.结果 NaOH法提取DNA用时短,方法 简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3在省略了65℃温浴并将两次氯仿∶异戊醇抽提改为一次抽提,缩短了试验时间,降低了试验成本,提取的DNA可以满足实验需要.结论 试验表明,用CTAB法3提取小麦DNA,既缩短了时间又满足进行分子标记检测的需要.     

小麦DNA提取方法的比较

以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法提取小麦基因组DNA,通过对小麦DNA提取方法的比较,为满足大批量材料进行SSR分子标记的检测寻找最优方法.结果表明,NaOH法提取DNA用时短、方法简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3省略了65℃温浴,并将两次氯仿:异戊醇抽提改为1次抽提,既缩短了试验时间和降低了成本,提取的DNA又可以满足进行分子标记检测的需要.     

玉米种子纯度鉴定中DNA提取方法的比较研究

分别以玉米干种子胚、幼芽和幼苗为材料提取DNA,并对所得DNA的纯度和质量进行检测,结果显示,利用玉米干种子胚提取的DNA质量及分子量大小与幼苗法相当,完全可以满足SSR分子标记对玉米杂交种纯度的鉴定。     

利用改良CTAB法提取小麦干种子总DNA

利用改良CTAB法提取小麦干种子总DNA,总DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR和酶切检测,证实该法是提取小麦总DNA的有效方法,其总DNA样品质量可满足下游分子生物学实验要求。     

玉米干种子基因组DNA提取方法的改进

为了实现玉米干种子基因组DNA快速提取,针对玉米干种子淀粉含量高的特点,对传统核酸CTAB提取方法进行了优化与改良,将提取的DNA进行分光光度计及琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示,DNA的OD_(260)/OD280值为1.79~1.95,OD_(260)/OD230值为1.90~2.15;琼脂糖凝胶电泳图谱清晰,条带无拖尾现象,说明采用改良方法提取的DNA质量高、无降解。以改良方法提取的DNA样品作为模板进行分子标记检测试验,结果清晰稳定,进一步证明采用改良CTAB法直接从玉米干种子中提取的DNA可以满足SSR和SNP等分子试验的要求。     

SSR标记技术在玉米品种纯度鉴定上的利用研究

采用玉米单粒种子DNA的提取新方法,对提取的DNA经4.5%PA胶进行电泳检测。结果表明:此法具有快速、DNA分子量大、不降解和纯度高等优点,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹鉴定技术在玉米种子纯度及玉米分子标记辅助育种中的广泛应用提供了基础。     

小麦种子规模化DNA提取及检测体系的优化

以小麦种子分子检测农业行业标准(NY/T 2859-2015)为基础,开发小麦种子快速、规模化提取DNA方法,优化反应体系中各组分含量,为小麦真实性快速执法提供技术支撑。通过对SDS、CTAB、高盐低p H、快速提取和试剂盒5种方法提取的DNA质量、浓度和PCR扩增效果进行比较,发现改进的高盐低p H方法提取种子的DNA质量、浓度能够满足小麦真实性鉴定中42对SSR引物重复鉴定的需求,是利用96孔深孔板和自动化移液工作站规模化、高通量提取DNA的较优方法。进一步优化结果显示该方法在65℃温浴条件下比室温的浓度高出25%,但两种温度条件下提取的DNA质量及浓度均能够满足品种鉴定的需求;沉淀时用0.5倍提取液体积的预冷异丙醇沉淀浓度最高,用室温的异丙醇沉淀的最佳体积是提取液体积的0.6倍。对标准中42对引物的最佳引物浓度和模板浓度均进行了优化,综合所有42对引物的优化结果发现,反应体系为20μL时,引物终浓度为0.437 5μmol/L,模板终浓度为10 ng/μL时扩增效率相对较高,扩增产物稳定,能够满足多重电泳的需求。     

作物种子DNA的提取及分子标记分析

为寻找适用于分子标记快速检测作物种子DNA的方法.本研究采用改良CTAB法、SDS法和碱提法分别提取4种农作物(玉米、水稻、大豆和高粱)种子DNA,用于RAPD、SSR标记检测.结果表明CTAB法较SDS法更适合于提取玉米胚和高粱种子DNA用于RAPD检测;碱提法提取大豆和水稻种子DNA纯化后,用于RAPD检测得到清晰扩增条带.三种DNA提取方法对作物种子提取的DNA均适用于SSR标记检测.根据分子标记方法选择不同DNA的提取方法提取作物种子DNA,才能快速获得准确有效的分子标记检测结果.     

整粒和半粒青稞种子DNA的提取及RAPD检测

【目的】从青稞种子中提取高质量的基因组DNA。【方法】以半粒无胚青稞种子和整粒青稞种子为材料,用6种不同的方法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,紫外分光光度计法检测DNA的浓度和纯度,并对提取的DNA进行了RAPD-PCR扩增检测,同时将剩下的半粒有胚青稞种子进行萌发实验。【结果】从半粒和整粒青稞种子中都可以提取到高质量的DNA,用提取的DNA作为RAPD-PCR扩增检测模板,得到的扩增产物条带清晰,多态性条带丰富,其质量满足RAPD分子标记的要求。【结论】高盐低p H法提取的DNA质量最好,是这6种方法中的最佳方法;半粒青稞有胚种子也能够正常生根发芽,可作为遗传实验的材料。     

5种主要农作物DNA快速提取方法研究

以玉米、小麦、大豆、高梁,水稻的种子和幼苗的4种处理组织为材料,利用碱煮法对DNA提取程序进行了研究,建立了一种简单、快速的DNA提取程序。该程序提取的DNA可用SSR引物进行扩增,扩增产物质量良好,并且能满足这5种常见作物的分子标记研究。     

甜瓜半粒干种子DNA提取方法的优化

[目的]优化甜瓜半粒干种子DNA提取方法,为甜瓜相关分子研究提供技术支持.[方法]以甜瓜半粒干种子为材料,比较改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和尿素法4种提取方法的DNA提取效果,并对改良CTAB法中的提取液CTAB浓度、裂解时间、苯酚抽提次数等进行优化,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测DNA的质量和纯度.最后通过SSR分析验证优化后改良CTAB法提取DNA的效果.[结果]4种提取方法中,改良CTAB法提取的DNA提取率最高,且DNA质量和纯度均高于其他提取方法.优化得到改良CTAB法的最佳提取条件为:提取液CTAB浓度2%,裂解时间20 min,苯酚抽提1次[先用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提1次,再用氯仿/异戊醇(24:1)抽提1次].在此条件下,提取的甜瓜半粒干种子DNA质量和纯度较好,以此为模板进行SSR分子标记分析时,电泳条带稳定、清晰,基本无杂带,可清楚区分品种间的差异.[结论]优化后的改良CTAB法提取甜瓜半粒干种子DNA效果较好,可满足甜瓜种子分子标记和遗传多样性分析等分子实验需求.     

砂生槐单粒种子DNA的快速提取及RAPD检测

为探讨快速提取种子DNA的有效方法,以砂生槐单粒种子为试验材料,在传统CTAB法基础上建立一种快速提取DNA的方法,并通过紫外分光光度法、凝胶电泳和RAPD-PCR检测所提基因组DNA。结果表明:快速法提取得到了质量较好、浓度及纯度较高的DNA,可以满足分子生物学实验的要求。此方法操作方便、快捷,是一种有效的砂生槐种子的DNA提取方法。     

棉花不同组织DNA的不同提取方法比较

[目的]研究棉花不同组织DNA提取的最佳方法。[方法]以棉花嫩叶、种子、黄化苗作为研究对象,比较CTAB法、SDS法、SDSCTAB法提取DNA的效果。[结果]若对DNA的量没有要求,棉花嫩叶、种子、黄化苗等组织均应选用SDS-CTAB法提取DNA。若对DNA的量有一定要求,如浓度需大于100 ng/μl,质量大于20 000 ng的情况下,针对不同试验材料推荐使用的提取方法是:棉花嫩叶用CTAB法,棉花种子SDS法,棉花黄化苗CTAB法。[结论]为快速高通量地检测转基因棉花基因漂移距离和频率提供参考。     

藜麦基因组DNA提取方法的比较

为了快速获取高质量的藜麦基因组DNA,采用改良的CTAB法、SDS法和高盐低pH值法等3种方法分别提取藜麦不同组织(叶、茎、根部)的基因组DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法测定比较所提DNA的质量和产量,同时进行了PCR-SSR、SSCP等分子检测。用不同方法提取藜麦不同组织部位DNA的结果表明:不同提取方法的凝胶检测条带均比较清晰,且无明显降解;改良的CTAB法所提取的DNA产率最高,SDS法其次,而高盐低pH值法最低;不同方法提取的叶片DNA产率均明显高于根部和茎部;改良的CTAB法和高盐低pH值法所提取的DNA质量较好,多酚类化合物和多糖等杂质去除得比较完全。PCR-SSR和SSCP检测结果表明:不同方法和不同组织所提取的DNA均能跑出良好的条带,适合进行后续的分子生物学研究。     

藜麦基因组DNA提取方法的比较（英文）

为了快速获取高质量的藜麦基因组DNA,采用改良的CTAB法、SDS法和高盐低p H值法等3种方法分别提取藜麦不同组织(叶、茎、根部)的基因组DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法测定比较所提DNA的质量和产量,同时进行了PCR-SSR、SSCP等分子检测。用不同方法提取藜麦不同组织部位DNA的结果表明:不同提取方法的凝胶检测条带均比较清晰,且无明显降解;改良的CTAB法所提取的DNA产率最高,SDS法其次,而高盐低p H值法最低;不同方法提取的叶片DNA产率均明显高于根部和茎部;改良的CTAB法和高盐低p H值法所提取的DNA质量较好,多酚类化合物和多糖等杂质去除得比较完全。PCR-SSR和SSCP检测结果表明:不同方法和不同组织所提取的DNA均能跑出良好的条带,适合进行后续的分子生物学研究。     

太行花DNA提取的优化和适用分子标记检测

比较了常规CTAB法、改良CTAB法和SDS法对太行花叶片总DNA的提取效果,并对改良CTAB法提取的DNA在多种分子标记中的适用性进行了测试.结果表明:常规CTAB法提取的DNA难以完全溶解,且有褐化现象;SDS法提取的DNA产率及纯度都很低;改良CTAB法提取的DNA产率高且稳定,无明显降解,杂质少,OD260/OD280值在1.8左右.以改良CTAB法提取的DNA为模板,应用叶绿体和线粒体通用引物扩增出了特异性的高效产物,ISSR和RAPD引物对总DNA的扩增也获得理想结果.因此,改良CTAB法适用于太行花总DNA提取,其产物能满足核、叶绿体和线粒体基因组分子实验的要求.