桃小食心虫基因组DNA提取方法比较研究

以桃小食心虫(Carposina niponensis Walsingham)为材料,分别采用CTAB法,冰KAc法,SDS-PK法和试剂盒法提取桃小食心虫的基因组DNA.通过电泳、紫外光谱分析和ISSR-PCR扩增等检测手段,比较分析了DNA纯度.结果表明:CTAB法和SDS-PK法提取的DNA质量明显优于冰KAc法和试剂盒法,适用于PCR扩增.与其他方法比较,SDS-PK法提取的DNA经过PCR扩增后得到的多态性位点最多.因此,SDS-PK法是实验室提取桃小食心虫基因组有效、经济实用的方法.     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1／fD2和01I／012c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1％琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除陕速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16S rDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除快速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

药用植物大黄种子基因组DNA的提取方法研究

通过传统CTAB法、改良CTAB法、高盐低p H法、改良SDS法、试剂盒法等5种方法,对大黄种子进行基因组DNA提取,为了筛选一种适合大黄种子基因组DNA的提取方法,同时用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对5种方法所提的DNA进行检测,并将5种方法所提取的DNA进行PCR扩增检测。结果表明,高盐低pH法提取的DNA得率最好,时间较短,价格便宜,PCR扩增条带清晰,能满足分子标记的要求。     

节杆菌基因组DNA提取方法的改良

[目的]研究比较了节杆菌的不同DNA提取方法,以获得高质量的基因组DNA。[方法]采用反复冷冻研磨、甲苯处理对细胞进行预处理,随后进行CTAB抽提,并与细菌基因组提取试剂盒进行比较。[结果]改良的CTAB法提取的DNA,纯化之后经电泳检测表明,基因组DNA条带清晰,量度均一,DNA片断大小一致;以上述DNA为模板进行PCR扩增,条带单一、特异性强,其中利用经甲苯方法提取的DNA快速、简便、经济实用,可作为PCR扩增的模板进行后续的基因操作和分子生物学研究。[结论]改良的CTAB法能够有效地提取节杆菌基因组DNA,纯度达到要求。     

苹果树木质部及韧皮部组织基因组DNA的提取及质量检测

苹果树木质部及韧皮部中含有大量的酚类、多糖等次生代谢物质,严重影响基因组DNA提取的得率和纯度。采用3种不同方法,即改良的CTAB法、快速盐提法、试剂盒法,从苹果树木质部及韧皮部提取基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测所提取基因组DNA的质量。结果表明,改良的CTAB法提取的组织基因组DNA不论是浓度、质量还是随机引物PCR扩增效果均能够满足进一步分子试验需要,而改进的快速盐提法和试剂盒法提取得率太低,不能用于分子生物学研究。因此改良的CTAB法是适合苹果树木质部及韧皮部组织基因组DNA提取的最佳方法。     

羊肺炎支原体基因组DNA几种提取方法的比较

为了筛选支原体基因组DNA最优提取方法以便用于支原体的检测和分子鉴定,本试验采用两种试剂盒、CTAB法、高盐法、酚/氯仿/异戊醇法和煮菌法对3批两种支原体液体培养物进行总DNA提取,通过检测基因组DNA纯度和PCR产物比较其提取效果。结果显示:6种方法提取的支原体基因组DNA均能用于PCR。进口试剂盒和CTAB法获得的DNA纯度最高,酚/氯仿/异戊醇法、高盐法和国产试剂盒次之,煮菌法省时但质量较差,酚/氯仿/异戊醇法较慢。CTAB法和高盐法可快速获得优质的基因组DNA,可作为提取支原体基因组DNA的首选方法。     

天冬药材基因组DNA提取方法研究

[目的]从天冬药材中提取可用于RAPD扩增的高质量基因组DNA。[方法]分别采用改良CTAB法、SDS法以及植物基因组DNA提取试剂盒法提取天冬药材基因组DNA;通过电泳、DNA浓度与纯度检测以及RAPD扩增效果确定天冬药材基因组DNA的最佳提取方法。[结果]CTAB法提取的基因组DNA较完整,DNA浓度与纯度均较高,可获得丰富的、清晰的RAPD条带。[结论]CTAB法为天冬药材基因组DNA提取的最佳方法,提取的DNA可用于天冬RAPD分析,该方法可为其他药材基因组DNA提取提供参考。     

油菜茎基溃疡病菌基因组DNA提取方法的比较

比较了油菜茎基溃疡病菌基因组DNA的尿素提取法、SDS-CTAB提取法、CTAB提取法和试剂盒提取法的提取过程、DNA纯度和对PCR扩增的影响,旨在筛选能替代昂贵试剂盒法的方法.结果表明,尿素提取法可以满足DNA的PCR扩增要求,并取得与试剂盒提取法相似的效果.尿素提取法还具有操作简便、成本低廉等优点,在植物检验检疫中...     

直接、快速地从罹病小麦叶片中提取条锈菌基因组DNA的方法

 小麦条锈菌（Puccinia striiformis f. sp. tritici）是专性程度很高的活体寄生菌,通过分子技术对其进行群体遗传结构研究的过程中,基因组DNA提取是基础之一。本研究利用Chelex 100法和CTAB法直接提取罹条锈病的小麦病叶片上的小麦条锈病菌的基因组DNA,使用PCR对所得到的DNA进行真菌核糖体rDNA ITS和小麦条锈病菌特异性引物CYR33进行检测,对2种基因组DNA的提取方法进行比较分析,结果表明Chelex 100法和CTAB法都能够适合于从罹病组织中直接提取小麦条锈病菌的基因组DNA,但是Chelex 100法较CTAB法所需的样品量少,操作步骤少,操作简单,并且整个过程无需使用有机溶剂进行抽提,对人体比较安全。通过PCR检测DNA提取情况,发现Chelex 100法提取的DNA的PCR结果优于CTAB法,且能够满足基于PCR的群体遗传结构的分析等研究。     

改进的DNA指纹技术在玉米杂交种纯度鉴定上的应用研究

本试验以幼苗为对照,利用CTAB法建立了一套简单、快速的玉米干种子DNA提取程序,该程序提取的DNA分子量大小与幼苗法相当,能够利用SSR引物进行扩增,可应用于玉米杂交种纯度检测。     

利用改良CTAB法提取小麦干种子总DNA

利用改良CTAB法提取小麦干种子总DNA,总DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR和酶切检测,证实该法是提取小麦总DNA的有效方法,其总DNA样品质量可满足下游分子生物学实验要求。     

一种简便实用的玉米干种子基因组DNA提取方法

利用改良的CTAB法提取玉米干种子基因组DNA,DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR和酶切检测,表明获得的DNA样品纯度较好、无明显降解,DNA质量可满足下游分子生物学实验要求,证实该方法是提取玉米基因组DNA的一种有效方法.     

A Simple DNA Preparation Method for PCR Amplifications in Marker-Assisted Selection of Wheat

An important, but often limiting step in marker-assisted breeding is the efficient isolation of plant DNA for polymerase chain reaction (PCR) amplification. A simple method using an alkali treatment to extract wheat DNA for marker-assisted selection (MAS) in wheat breeding programs was compared to a commercial kit and cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) extraction. DNA concentration from the alkali extraction was higher than the other two methods but purity was lower than CTAB extraction. The alkali extraction method was used on breeding lines to determine its usefulness. The alkali-extracted DNA samples were suitable for several PCR-based procedures, including random amplified polymorphic DNA (RAPD), microsatellite (simple sequence repeat, i.e., SSR) and sequence characterized amplified region (SCAR)analyses.     

小麦种子规模化DNA提取及检测体系的优化

以小麦种子分子检测农业行业标准(NY/T 2859-2015)为基础,开发小麦种子快速、规模化提取DNA方法,优化反应体系中各组分含量,为小麦真实性快速执法提供技术支撑。通过对SDS、CTAB、高盐低p H、快速提取和试剂盒5种方法提取的DNA质量、浓度和PCR扩增效果进行比较,发现改进的高盐低p H方法提取种子的DNA质量、浓度能够满足小麦真实性鉴定中42对SSR引物重复鉴定的需求,是利用96孔深孔板和自动化移液工作站规模化、高通量提取DNA的较优方法。进一步优化结果显示该方法在65℃温浴条件下比室温的浓度高出25%,但两种温度条件下提取的DNA质量及浓度均能够满足品种鉴定的需求;沉淀时用0.5倍提取液体积的预冷异丙醇沉淀浓度最高,用室温的异丙醇沉淀的最佳体积是提取液体积的0.6倍。对标准中42对引物的最佳引物浓度和模板浓度均进行了优化,综合所有42对引物的优化结果发现,反应体系为20μL时,引物终浓度为0.437 5μmol/L,模板终浓度为10 ng/μL时扩增效率相对较高,扩增产物稳定,能够满足多重电泳的需求。     

无氯仿提取小麦半籽粒DNA的方法

为克服从小麦叶片提取DNA用于PCR受季节的限制以及氯仿不易购买等问题,研究以从叶片中提取的以及用氯仿从小麦籽粒中提取的DNA为对照,用无氯仿方法提取小麦籽粒中的DNA,并用多重PCR进行检测。结果表明,用无氯仿方法提取的DNA浓度比从叶片中提取的和用氯仿提取的DNA浓度要低,而且用无氯仿方法提取的DNA扩增效果稍差,但该问题可通过增加上样量或采用聚丙稀酰胺凝胶电泳等途径来解决。因此,无氯仿小麦籽粒DNA提取方法可在对DNA质量要求不高以及氯仿无法及时得到时使用。     

一种快速提取野生稻总DNA的方法

在常规CTAB的基础上建立一种快速提取纯化野生稻总DNA的方法，这种快速提取法能在短时间内处理大批量的材料，具有简便、快速、经济、稳定等优点。用这种方法提取的DNA作为模板进行PCR扩增，和用常规的CTAB法提取的DNA作为模板结果一致。因此，用这种方法提取的DNA质量完全可以满足植物分子标记分析的需要。     

光皮桦基因组DNA 提取方法比较

为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera 嫩叶中获得高质量DNA , 设计了5 种先提核再提DNA 的CTAB 法Ⅰ , CTAB 法Ⅱ , CTAB 法Ⅲ , CTAB 法Ⅳ及改进的SDS 法, 并以常规CTAB 法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA 进行了提取, 采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/ A280值测定、限制性内切酶处理和PCR 扩增等方法对所提的DNA 进行了比较分析。结果表明:实验设计的5 种改进方法提取的DNA 质量要比常规法的好, 但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB 法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA 的最佳方法;PCR 扩增结果表明, 不同的DNA 提取方法会影响PCR 带型的变化。图3 表1 参13     

贵州石笔木DNA提取与ISSR-PCR反应体系的建立

[目的]利用ISSR技术对贵州石笔木的遗传多样性进行分析。[方法]以贵州石笔木种子、新鲜叶片和干燥叶片为试材,采用改良的CTAB法和SDS法提取贵州石笔木基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的ISSR-PCR反应体系。[结果]利用CTAB法和SDS法从石笔木叶片中提取DNA时,鲜叶和干燥叶片提取的DNA质量和浓度略有差别,CTAB法提取的浓度稍大而蛋白残留稍多,SDS法提取的DNA量稍少但质量最高。而从种子中提取的DNA无论质量还是浓度均较差,但尚可满足ISSR分子标记试验。贵州石笔木的适宜ISSR-PCR反应体系为2μl的10×Buffer,模板DNA 40 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Taq酶1 U,引物0.2μmol/L,总体积为20μl。[结论]该ISSR技术体系适用于贵州石笔木遗传多样性分析。