小麦叶绿体DNA提取方法研究

以成熟的中国春小麦叶片为材料,采用改进的高盐-低pH方法提取叶绿体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增,结果表明:所提取的小麦叶绿体DNA纯度高(OD260/280=1.89,OD260/230=2.23),适于PCR反应、基因扩增和酶切鉴定等分子操作,为深入研究小麦叶绿体基因组奠定了基础。     

半粒小麦种子DNA提取的研究

本研究以半粒小麦无胚种子为材料,提取DNA并进行PCR扩增检测,同时将剩下的半粒小麦有胚种子进行催芽试验.结果表明:从半粒小麦无胚种子和小麦幼叶中都能提取出质量较高的DNA;用λDNA进行浓度检测发现,小麦幼叶提取的DNA浓度高于半粒小麦无胚种子提取的DNA浓度;分别用所提取的小麦DNA作为PCR扩增模板均能够得到理想的特异条带,满足分子检测的需要;催芽试验表明,半粒小麦有胚种子也能够正常生根发芽,可作为染色体分选、原位杂交和繁殖的材料.     

白木香基因组DNA提取与ISSR反应体系的优化

白木香为瑞香科沉香属植物,是中国特有的珍贵药用植物,也是国产沉香药材唯一资源植物,现已濒临灭绝,被载入<中国植物红皮书>采用改良CTAB法提取白木香DNA较传统方法简单高效.通过琼脂糖凝胶电泳和OD260/OD280比值测定,所得基因组DNA纯度高,可作为ISSR等以PCR为基础的DNA多态性标记.通过优化影响白木香ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于白木香的ISSR反应体系和扩增条件.结果表明在20μl反应体中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶5种主要成分的最适浓度分别为25 ng、0.8 μmol/L、2.5 mm01/L、0.2 mmol/L、1.0 U,扩增出足量产物至少需要35个循环.     

茄子基因组DNA提取及RAPD-PCR体系的优化

在CTAB基础上,系统地比较了提取缓冲液主要成分浓度的变化对提取茄子基因组DNA的质量及得率的影响,并以SDS法为对照,提出了一种适用于茄子基因组DNA的提取方法。进一步利用梯度PCR比较了BAPD-PCR反应体系中几个重要成分的浓度对PCR产物的影响,优化茄子BAPD-PCR反应体系,建立了茄子基因组适用的简单、稳定和重复性较好的BAPD-PCR方案。     

转基因小麦的PCR快速检测

采用改进的CTAB法,研究了与PCR相匹配的转基因小麦单株微量DNA的快速提取方法。结果表明,该提取方法简便、快速、有效,提取的DNA产量和质量完全可以用于PCR扩增。对标准PCR的反应体系进行优化,建立了最佳的转外源高赖氨酸基因小麦植株的PCR扩增体系,即10×R eaction Bu ffer 2.5μL,M gC l225 mm o l/L,dNTP s 2.5 mm o l/L,模板DNA 30~60 ng,引物1.2μm o l/L,T aq酶1 U,加ddH2O至25μL,优化的PCR反应体系显著提高了转基因小麦植株筛选和鉴定的效率。     

油葵种子DNA提取和RAPD反应体系的优化

[目的]为利用RAPD技术进行油葵的亲缘关系分析及杂种鉴定奠定基础。[方法]以6种杂交油葵种子为试材,采用改良的CTAB法提取油葵基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的RAPD-PCR反应体系。[结果]采用改良CATB法提取的油葵DNA质量好、得率高,且无蛋白质和酚类的污染。油葵的最适RAPD-PCR反应体系为:2.0μl 10×Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、150μmol/LdNTPs、1.5UTaq酶、2.0 ng/μl DNA模板、0.25μmol/L引物,总体积为20.0μl。利用该体系对不同含油量的6个油葵杂交种进行扩增,均表现为带形清晰稳定、带数适宜。[结论]该RAPD技术体系适用于各种油葵杂交种的DNA分析。     

苹果炭疽菌DNA改良提取法及PCR体系的优化

以苹果炭疽病胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为试材,采用改良的SDS法、改良的CTAB法和改良的尿素法等对基因组DNA进行了提取和比较,并对ITS1-5.8S-ITS2区基因PCR扩增体系中模板的添加量以及退火温度进行了调整和优化。结果表明:采用这3种方法均能提取得到目的 DNA,但采用改良的SDS法提取的基因组DNA产率最高、质量最好;当在25μL PCR体系中添加0.75μL粗提DNA 10倍稀释液以及退火温度设定为51℃时PCR产物的质量最高。     

苹果炭疽菌DNA改良提取法及PCR体系的优化

以苹果炭疽病胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为试材,采用改良的SDS法、改良的CTAB法和改良的尿素法等对基因组DNA进行了提取和比较,并对ITS1-5.8S-ITS2区基因PCR扩增体系中模板的添加量以及退火温度进行了调整和优化。结果表明:采用这3种方法均能提取得到目的 DNA,但采用改良的SDS法提取的基因组DNA产率最高、质量最好;当在25μL PCR体系中添加0.75μL粗提DNA 10倍稀释液以及退火温度设定为51℃时PCR产物的质量最高。     

小麦干种子基因组DNA的提取及效果研究

分别采用试剂盒和CTAB法提取小麦干种子基因组DNA,DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测。结果表明,试剂盒提取DNA操作过程快速简便、成本较低,DNA产率和纯度优于CTAB法。通过多重PCR技术分别以小麦LMW-GS亚基Glu-B3位点和黑麦碱secalin-p基因的特异引物进行扩增,均能够扩增出清晰的目标条带,提取的基因组DNA能够满足分子检测的实验要求。     

水稻单粒种子DNA提取及RAPD程序优化研究

本文用水稻单粒干种子作材料，进行了DNA提取方法和RAPD程序优化程序。结果表明：CTAB法微量提取水稻干种子DNA可获得理想的扩增结果，最佳的反应体系和条件昌：随机引物浓度100～400ug/L、Mg^2 浓度2～4mmol/L、dNTPs浓度100～400umol/T、Taq酶IU。变性94℃30s，退火38℃30s，延伸72℃1min，40个循环。为了节约时间和成本，可不进行予变性处理，反应体积可降至12.5ul，扩增效果一样。     

两种膜荚黄芪DNA提取方法的优化与比较

以膜荚黄芪的嫩叶片为材料,对CTAB法和高盐低pH法进行了改良,并用此改良法提取总DNA,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。结果表明,无论从提取率还是纯度上,优化的高盐低pH法都优于CTAB法,但高盐低pH法提取的DNA不适合长期保存。     

单头赤眼蜂DNA提取方法比较及其PCR反应体系优化

为了探明有效的基因组DNA提取方法和PCR反应体系,从而得到符合分子生物学实验要求的基因组DNA模板的数量和质量,以单头松毛虫赤眼蜂为材料,应用CTAB法、SDS法和Chelex法进行基因组DNA提取效果的比较,并将核酸助沉剂用于赤眼蜂DNA的提取中,然后将提取的基因组DNA采用L16(45)正交设计试验,对影响赤眼蜂基因组DNA PCR反应体系的5因素(Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、DNA模板、Taq聚合酶)4水平进行筛选。结果表明:CTAB法优于SDS法和Chelex法,且核酸助沉剂的加入明显增强了模板DNA提取效果。同时确立的ITS2的PCR优化反应体系为:总体积为25mL,Mg2+浓度为1.50mM,dNTPs浓度为0.25mM,引物浓度为0.30μM,DNA模板取2.00μL,Taq聚合酶量为2.00U。     

无氯仿提取小麦半籽粒DNA的方法

为克服从小麦叶片提取DNA用于PCR受季节的限制以及氯仿不易购买等问题,研究以从叶片中提取的以及用氯仿从小麦籽粒中提取的DNA为对照,用无氯仿方法提取小麦籽粒中的DNA,并用多重PCR进行检测。结果表明,用无氯仿方法提取的DNA浓度比从叶片中提取的和用氯仿提取的DNA浓度要低,而且用无氯仿方法提取的DNA扩增效果稍差,但该问题可通过增加上样量或采用聚丙稀酰胺凝胶电泳等途径来解决。因此,无氯仿小麦籽粒DNA提取方法可在对DNA质量要求不高以及氯仿无法及时得到时使用。     

无氯仿提取小麦半籽粒DNA的方法

为克服从小麦叶片提取DNA用于PCR受季节的限制以及氯仿不易购买等问题,研究以从叶片中提取的以及用氯仿从小麦籽粒中提取的DNA为对照,用无氯仿方法提取小麦籽粒中的DNA,并用多重PCR进行检测。结果表明,用无氯仿方法提取的DNA浓度比从叶片中提取的和用氯仿提取的DNA浓度要低,而且用无氯仿方法提取的DNA扩增效果稍差,但该问题可通过增加上样量或采用聚丙稀酰胺凝胶电泳等途径来解决。因此,无氯仿小麦籽粒DNA提取方法可在对DNA质量要求不高以及氯仿无法及时得到时使用。     

刺参基因组DNA的提取及RAPD条件的优化

以野生刺参为试验材料,探索了刺参基因组的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了刺参的优化反应体系和程序.反应体系总体积为25μL,各组分的含量为10倍缓冲液2.5μL,Mg2 (20 mmol·L-1)3μL,TaqDNA聚合酶(1 U·μL-1)1.5μL,dNTPs(10 mmol·L-1)2.5μL,随机引物(5pmol·μL-1)1μL,模板DNA(40 ng·μL-1)2.5μL.PCR循环程序为96℃预变性5 min;94℃变性0.5 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min.     

藏獒基因组DNA提取及RAPD扩增体系的优化

采用改进的盐析法提取了藏獒血液基因组DNA,并对RAPD扩增体系进行了优化。结果表明,改进的盐析法所提取的藏獒基因组DNA完整、无降解,完全可以满足RAPD分析的需要;20μL的最佳扩增体系组成为2.50 mmol/L Mg2+、0.60 mmol/L dNTP、50 ng模板DNA、1.25U Taq酶和0.3μmol/L随机引物,最佳退火温度为36.5℃。     

一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法（摘要）（英文）

[目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法。[方法]通过对常规DNA提取方法的改进（省去液氮研磨和苯酚提取的步骤）,获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法。于1.5ml Eppendorf管内加入400μl DNA提取液[内含200 mmol/LTri（pH值7.5）,25 mmol/LEDTA（pH值8.0）,250 mmol/LNaCl,0.5% SDS（W/V）],剪取拟南芥叶片材料少许（1片以下）加入400μl DNA提取液,用微型研磨棒将叶片捣碎至溶液成绿色,放置3 ～5 min;加入400μl氯仿/异戊醇（体积比24：1）,混合均匀,12 000 r/min离心5 min;取上清液至另一1.5 ml Eppendorf管内,加入300μl异丙醇,颠倒混合均匀,室温下放置5 min,12 000 r/min离心5 min;弃去上清液,以70%乙醇漂洗,放置晾干,加入100μl灭菌超纯水溶解,4℃放置备用。以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证。[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板。经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想。[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作。     

一种DNA提取新方法在转基因水稻种子检测中的应用

将水稻种子打磨成粉,取100 mg粉末加入SDS和NaC1等试剂配制成高盐提取液,然后提取基因组DNA.超微量分光光度计NanoDrop 1000检测及Eco RV酶切反应的结果表明,该方法比CTAB法的DNA浓度更高、纯度更好.以提取得到的DNA为模板,采用PCR法分别对水稻特异性内源基因SPS及转基因水稻外源基因Bt进行扩增,均能扩增到清晰的目标条带.这种DNA提取新方法不仅简单快速、成本低廉,而且提取到的DNA质量高,扩增效果好,可有效地用于水稻种子转基因成分的检测.