大蒜SOD酶的分离纯化和肝素修饰

采用热变性法、盐析法与有机溶剂提取法进行分离纯化,建立了一套适合大蒜SOD酶分离纯化的工艺流程:大蒜SOD酶提取液经70℃加热20 min,取上清在4℃条件下先使硫酸铵的饱和度达到40%;除杂后调整硫酸铵饱和度达到80%,取沉淀透析;透析液经纤维素层析,NaCl醋酸缓冲液梯度洗脱,收集第3个蛋白峰.针对天然SOD酶的不...     

滁菊多酚氧化酶的三相分离及其酶学特性分析

滁菊在采收后极易因酶促褐变导致其品质下降,故以滁菊鲜花为原材料,针对影响其品质劣变的多酚氧化酶展开研究,明确其三相分离纯化工艺以及酶学特性.考察了硫酸铵浓度、pH值、提取液与叔丁醇体积比、提取时间等工艺参数对滁菊多酚氧化酶纯化效果的影响,结果表明三相分离纯化滁菊多酚氧化酶的较佳工艺参数为:硫酸铵质量浓度0.4 g·mL-1,pH值6.0,粗提液与叔丁醇的体积比为1∶1.5;按照此工艺条件对纯化后滁菊中多酚氧化酶的酶学特性进行了分析,滁菊多酚氧化酶最适pH值为6.50,最适反应温度为30℃;以邻苯二酚为滁菊多酚氧化酶反应底物时,底物最适浓度为0.35 mol·L-1,酶促反应米氏常数为0.1749 mol·L-1.     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

罗伦隐球酵母B40脂肪酶的分离纯化及N端测序

文章介绍了罗伦隐球酵母B40所产脂肪酶的分离纯化过程,摸索了分离纯化过程中盐析的最佳盐浓度和作用时间,并对离子交换填料进行了选择,确定了纯化效果好的填料及其缓冲体系的pH,同时也对该酶N端序列进行了测定。结果表明,在4℃,65%硫酸铵饱和度的条件下沉淀6h能获得蛋白量较大、活性较高的目的蛋白。将样品过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱,缓冲体系为pH9.020mol·L-1Tris-HCl溶液中进一步洗脱后进行超滤浓缩、纯化得到单一脂肪酶,该脂肪酶的N端蛋白序列为:D-F-G-P-I-T-I-Y-T-P-P-A。     

黑曲霉产β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质研究

［目的］分离纯化黑曲霉固态发酵产生的β-甘露聚糖酶,研究β-甘露聚糖酶酶学性质。［方法］黑曲霉经固态发酵制备粗酶液,分别采用硫酸铵分段沉淀法、丙酮沉淀法和Sephadex凝胶层析法对β-甘露聚糖酶进行分离纯化,用PAGE检验其纯度。同时测定纯化后的β-甘露聚糖酶酶学性质。［结果］β-甘露聚糖酶经40%～90%饱和度硫酸铵沉淀法纯化后比活力可提高到1 180.9 U/mg 经1.0 ∶1.0～1.6∶1.0（V/V）丙酮沉淀法纯化后的比活力可提高到1 847.0 U/mg;最后经凝胶层析法纯化后的比活力可提高到7 950.4 U/mg,纯化倍数为8.67,在PAGE凝胶电泳图谱上得到单一条带,即纯化后的β-甘露聚糖酶。［结论］纯化后β甘露聚糖酶的酶学性质为：最适pH值4.2,最适反应温度60 ℃,米氏常数Km 2.67 mg/ml。     

多氯联苯降解酶的分离纯化及酶学性质研究

采用硫酸铵盐析浓缩、透析、Sephdex G-150凝胶过滤层析,对表皮葡萄球菌产生的多氯联苯(PCBs)降解酶进行分离纯化.粗酶经30%～80%饱和度硫酸铵沉淀法纯化后比酶活可提高到442.29 U/mg;经透析后的比酶活可提高到480.75 U/mg;最后经凝胶层析法纯化后的比酶活可提高到6 903.57 U/mg...     

奉化水蜜桃多酚氧化酶提取纯化工艺研究

对奉化水蜜桃多酚氧化酶(PPO)的提取分离工艺进行了研究,结果表明,pH值对该酶的提取率影响最大,该酶的最佳提取条件为pH值8.0,提取时间40min,料液比1∶12(m∶V,g∶mL),离子强度0.2mol/L。硫酸铵分级沉淀研究表明,该酶主要在硫酸铵饱和度为50%～80%时发生沉析,故可利用这段浓度范围对该酶进行纯化,其纯化倍数为13.21。同时,水蜜桃PPO对儿茶素表现出很强的亲和性,其酶促反应米氏常数(Km)为0.22mmol/L,最大反应速度(vmax)为251.69U/min。     

女贞果实过氧化物酶的纯化及热稳定性研究

为探讨过氧化物酶在女贞果实发育中的作用,经过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100、DEAE-纤维素离子交换层析分离,从女贞果实中分离提纯过氧化物酶(POD),纯化倍数为48倍,回收率为13.3%。该酶的比活力为1 167.15 U/mg蛋白,最适pH为6.5,对H2O2的Km值为3.85 mmol/L,对愈创木酚的Km值为6.2 mmol/L,最适温度为40℃,热稳定性较好,55℃以下不易失活。其活性受到MnSO4明显抑制。     

辣根过氧化物酶的分离制备和纯化

从辣根块茎分离和纯化了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）,纯化程度包括匀浆、加热、硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和ＣＭ－２３阴离子交换层析。纯化的ＨＲＰ的Ｋ４值为２．５×１０＾５,ＲＺ值值３．００,酶的比活４０６Ｕ／ｍｇ蛋白。它的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条带,酶亚基分子量为４０ＫＤ,等电聚焦电泳呈现三条带,酶不舔生染色呈现多条带,表明有同工酶存在。对酶的分离纯化作了一些改进,如加氨水保持ＰＨ值,加入５ｍｍｏｌ／     

蛹虫草超氧化物歧化酶的分离纯化及性质研究

以蛹虫草为材料,经过硫酸铵盐析、SephedexG!75柱层析和DEAE!52柱层析,得到纯化的超氧化物歧化酶(SOD),经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白区带,此酶比活力为17855.73U/mg,纯化倍数为53.7,回收率为21.8%。该酶在40℃保温150min,活性不变;在pH值5.0～9.0有较好的稳定性。该酶每亚基含1原子铁,对H2O2和乙醇-氯仿溶液敏感。     

正交设计法优化提取赣南脐橙皮中果胶的工艺研究

[目的]探索微波法提取脐橙皮中果胶的最佳工艺参数。[方法]在微波条件下,通过单因素试验考察盐析pH值、加热时间、硫酸铝用量、液料比(V/W)、盐析温度及时间对提取赣南脐橙皮中果胶产率的影响,通过正交试验确定最佳工艺参数。[结果]单因素试验表明,盐析pH值5,加热时间5 min,硫酸铝0.5 g,液料比15∶1,盐析温度60℃,盐析时间70 min时果胶产率较高。各因素影响果胶产率的大小顺序为微波加热时间>硫酸铝用量>盐析pH值>盐析时间>盐析温度>液料比。正交试验得出最佳工艺参数为微波加热时间5min,液料比16∶1,硫酸铝0.5 g,盐析pH值7,盐析温度60℃,盐析时间80 min。[结论]微波法缩短提取时间,提高果胶产率,所得样品质量好,符合国家质量标准。     

普通念珠藻(Nostoc commune Vauch.)藻蓝蛋白的提取

[目的]为普通念珠藻藻蓝蛋白的提取及开发提供试验及理论基础。[方法]以普通念珠藻为材料,比较藻体及细胞的破碎方法、提取液类型及饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响。[结果]结果表明:利用发酵法破碎藻体和细胞,0.05 mol/L的KP缓冲液(pH值7.2)作为提取液,经过30%~50%饱和硫酸铵盐析和DEAE-Toyopeal 650 S离子交换柱层析后,藻蓝蛋白纯度达2.51,最大紫外-可见吸收峰位于616 nm。[结论]普通念珠藻藻蓝蛋白分离提取较为理想的程序为:藻粉→0.05 mol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→发酵法破碎细胞→35%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S柱层析→较纯的藻蓝蛋白。     

香蕉枯萎病内生生防菌H4-3抑菌蛋白提取及抑菌活性研究

铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa H4-3菌株是福建省农科院农业生物资源研究所微生物研究中心从香蕉植株中分离到的一株内生菌,该菌株对香蕉枯萎病病原菌具有很强的抑菌活性,初步判断其活性物质为大分子蛋白.采用硫酸铵沉淀方法提取H4-3菌株的抑菌蛋白,研究不同硫酸铵浓度对H4-3菌株抑菌活性的影响,结果表明：随着硫酸铵浓度的提高,H4-3菌株抑菌蛋白粗提液的抑菌活性逐步提高,其盐析后的上清液抑菌活性则逐步降低,70％饱和度的硫酸铵处理即可完全沉淀.     

秦川牛心肌细胞色素C的提取与检测

为综合开发利用秦川牛产品,进一步优化牛心肌细胞色素C提取工艺条件,试验以秦川牛心肌为材料,采用酸化水提取,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析后测定其细胞色素C含量。结果表明,所制备的细胞色素C定性鉴别正常,比色定量测定平均收率为146.3mg/kg,优于文献报导的结果,说明采用这种方法提取牛心肌细胞色素C是可行的。     

鸡血液中乙酰胆碱酯酶的提取研究

[目的]为了研究硫酸铵盐析法在乙酰胆碱酯酶分离纯化中的效果,从而利用乙酰胆碱酯酶的活性变化反映农药的污染情况。[方法]采用硫酸铵盐析和等电点区分的方法从鸡血中提取乙酰胆碱酯酶,并探讨其适宜的pH值范围。[结果]结果表明:pH值4.5左右大量的杂蛋白能被除去,可获得较高乙酰胆碱酯酶得率;采用饱和度为50%~60%的硫酸铵盐析效果较好,据此得出较佳的提取工艺。[结论]该研究结果为后续鸡血AChE的提取、分离、纯化等工作提供了相应的参考,同时为利用乙酰胆碱酯酶指示环境受有机磷和氨基甲酸酯类农药污染的后续研究和应用提供了理论依据。     

黄蒿籽胶提取工艺及流变学特性的研究

以黄蒿籽为原料采用盐析方法提取植物胶,研究了多种因素对提取率的影响,用正交试验L9(3)4得到最佳提取工艺条件:Al2(SO4)3用量为滤液的1/10mL,盐析pH值6.0,脱盐pH值2.5,脱盐时间60min。同时还分析测定了浓度、温度以及常见金属离子对黄蒿籽胶黏度的影响,并且与8种增稠剂黏度进行比较,试验结果表明,黄蒿籽胶具有良好的开发应用价值。     

滴施酸化剂种类及用量对棉花生长的影响

【目的】研究滴施酸化剂对根区土壤pH、有效锌、棉花根系及产量品质的影响,为棉花生产筛选出合适的酸化剂种类及用量。【方法】采用田间试验,设置3种酸化剂分别为硫酸铵(S)、草酸(C)、柠檬酸(N),3个酸化剂用量,对照(CK)不做酸处理,以硫酸铵替代每次追肥30%、50%、70%尿素的N确定硫酸铵及尿素用量,以酸化剂溶液提供等量H⁺为标准,确定其他酸化剂用量。【结果】在垂直方向上随酸化剂施用量的增加土壤pH降低0.05～0.24;在水平方向上随着酸化剂施用量的增加土壤pH降低2.3%～3.2%;无论在垂直方向还是水平方向上,距滴头越近或硫酸铵替代尿素比例越高的位置,土壤有效锌含量越高;在氮肥用量不变的情况下,30%～70%的氮肥用硫酸铵替代时,草酸、柠檬酸以等量H⁺滴施到棉花根区,0～30 cm根系干物质与CK相比均明显增加。根系干重为S₃>C₃≈N₃>CK;硫酸铵和草酸对棉花干物质积累最大,与对照相比,施用酸化剂提高了棉花的单铃重,显著增加了棉花单株结铃数,棉花产量随...     

苹果皮中果胶提取工艺的优化

果胶在食品加工行业中运用广泛,提取苹果皮中果胶的传统方法是采用酸萃取法、草酸铵提取法等,而单一的提取法不能使苹果皮中果胶最大量地溶出来,且果胶纯度不高。研究了盐析法提取苹果皮中果胶的主要因素,采用单因素试验及正交试验法确定最佳提取工艺。结果表明,最佳工艺条件为料液比1∶13(g∶m L),p H 2.0,提取时间1.5 h,提取温度85℃,在此条件下测得苹果皮果胶提取率达13.98%。     

磷酸盐缓冲液的浓度和pH对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽分级盐析的影响

[目的]探讨磷酸盐缓冲液的pH和浓度在分级盐析时,对革胡子鲶肠道各组分蛋白/肽的影响。[方法]以不同浓度和pH的磷酸盐缓冲液作为组织匀浆缓冲液,在硫酸铵饱和度为20%、40%、60%、80%和100%的条件下,对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽进行分级盐析,并对盐析产物进行称重、电泳检测和抑菌活性分析。[结果]磷酸盐缓冲液的pH为6.0或7.4时,其浓度对盐析产物产量、蛋白沉淀和抑菌效果无显著影响。而pH为8.0、浓度为0.05 mol/L时,硫酸铵饱和度为60%和100%的粗蛋白/肽的产量显著高于浓度为0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液粗蛋白含量;大分子蛋白能更好地在硫酸铵饱和度为20%和40%时沉淀下来,而在饱和度为60%、80%和100%能获得分子量相对较小的抗菌蛋白/肽。磷酸盐缓冲液的pH和浓度对抑菌效果无显著影响。[结论]pH8.0,浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液更适于革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽的提取。     

聚乙二醇/硫酸铵双液相萃取法提取三七总皂苷的研究

[目的]采用聚乙二醇/硫酸铵双液相体系对三七总皂苷提取方法进行研究。[方法]通过单因素试验考察了聚乙二醇分子量、聚乙二醇浓度、硫酸铵浓度和pH值对三七总皂苷相比、分配系数和回收率的影响。[结果]最佳萃取工艺条件为：聚乙二醇分子量6000,聚乙二醇质量分数24%,硫酸铵质量分数9%,pH值4.5。在此最优条件下,三七总皂苷平均回收率为88.50%,平均分配系数为4.04。[结论]该方法操作简便,成本低,耗时少,分离效果好。