新城疫病毒毒力的演化研究进展

新城疫是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。该病主要以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。新城疫对我国养禽业的发展造成了巨大的威胁,其病毒是一种突变快、进化快的病原,该病毒毒力的强弱并不是一成不变的,其毒力具有本身的演化趋势。通过对新城疫病毒的生物特性、新城疫病毒毒力的演化及与其毒力演化相关的因素研究,旨在探讨新城疫病毒毒力的演化与流行趋势的关系。     

新城疫病毒感染宿主免疫应答及其抗肿瘤作用的研究进展

新城疫病毒基因组编码6种结构蛋白和2种非结构蛋白,病毒蛋白与病毒毒力密切相关。病毒入侵宿主时,宿主通过诱导天然免疫应答和特异性免疫应答抵御病毒入侵。此外,新城疫病毒通过刺激机体免疫系统,可特异性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞损伤甚少,具有抗肿瘤作用。从新城疫病毒的毒力划分、病毒结构蛋白与毒力的关系及宿主的免疫应答、病毒抗肿瘤作用4个方面进行综述与讨论,以期为深入研究新城疫病毒的致病性,进一步防控以及利用新城疫病毒进行肿瘤治疗奠定基础。     

不同毒力新城疫病毒在鸡体内的分布

为研究禽产品携带新城疫病毒的情况，给一日龄雏鸡脑内接种不同毒力新城疫病毒，无菌采取心、肝、脾、肺、肾、脑、骨髓、气管、肌胃和腺胃、肠道、爪、腿部肌肉、翅膀、皮肤、粪便，进行新城疫病毒的分离。结果表明，不同毒力的新城疫毒株在鸡体内的分布是不同的，即从新城疫参考强毒株、中毒株接种雏鸡的组织器官中回收到的病毒比参考弱毒株接种雏鸡回收到的病毒多。对禽产品、粪拭子进行病原分离是口岸检验检疫部门对ND实施监控的二个重要环节和有效手段。     

鸽新城疫的诊断与防制

鸽新城疫是由病毒引起的一种鸽子的急性、败血性传染病.它流行于世界各地,所以又称鸽瘟,本病以呼吸困难,下痢,神经机能紊乱,粘膜及浆膜广泛性出血为特征.依据其病毒的毒力不同,可表现出从亚临床状态到高疫致死率不同程度的病情.     

单抗夹心ELISA检测免疫鸡群新城疫病毒

用SPF鸡胚将送检的免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1代尿囊液进行新城疫病毒(NDV)快速检测，同时用世界动物卫生组织(OIE)推荐的NDV分离及鉴定的方法加以验证。通过对3423份样品的检测，检出阳性样品453份，阴性样品2959份，可疑样品11份，两种方法的阳性符合率为99．3％，阴性符合率为99．7％。对全部阳性样品进行病毒分离，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有新城疫病毒(NDV)，再将全部阳性样品分离物进一步作毒力鉴定，结果有强毒力株、中等毒力株及弱毒力株，因此用新城疫单抗夹心ELISA检测免疫鸡群泄殖腔棉拭样品F1代尿囊液新城疫病毒快速、准确率高，呈阳性者不全是NDV强毒力株感染，还有NDV中等毒力株或弱毒力株感染。     

新城疫病毒的进化与基因分型

综述了新城疫病毒的进化和基因分型,并对不同毒株的毒力型、进化型和基因型间的关系进行了比较。     

乳鸽新城疫病毒的分离和鉴定

江苏某肉鸽养殖合作社饲养的乳鸽出现扭头等神经症状,死亡率高达65％,剖检可见脑部出血、颈部皮下出血、十二指肠出血.从病死乳鸽中采集病料,分离到1株鸽新城疫强毒株,病毒毒力测定其MDT为52 h、ICPI为2.2,动物回归试验表明具有较高的致病力,基因测序其F基因型为ClassⅡ基因Ⅵb亚型.病理组织学研究发现,新城疫病毒会引起非化脓性脑炎和出血性坏死.研究结果为了解江苏地区乳鸽新城疫的发生、流行和组织损害提供了研究数据.     

一株分离的鹅副粘病毒的毒力、致病性和传播方式的研究

采用血清学、生物学方法,从一群病死鹅中分离到1株鹅副粘病毒(GPMV)。血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-I型(PMV-I);毒力测定显示分离病毒GPMV毒力与鸡F48E9毒株的毒力相似;F基因裂解位点序列的分析表明该分离病毒GPMV融合蛋白F裂解位点氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117。分离病毒GP-MV攻击不同新城疫(ND)抗体水平的雏鸡、蛋鸡和鹅,结果显示分离病毒GPMV与鸡ND强毒株的致病性相似,既可引起鸡、鹅典型的ND,也可引起非典型的ND,其发病率、死亡率、临床症状和病理变化与鸡、鹅本身的免疫状况有关。经不同途经感染试验表明,分离病毒GPMV可通过呼吸道、消化道和直接接触等方式传播给鸡。     

新城疫病毒分子检测技术

新城疫病毒是一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为主要特征的急性热性高度接触性传染病.新城疫病毒的检测主要采用单克隆抗体技术、RT-PCR技术、荧光定量RT-PCR技术、核酸探针技术、基因芯片等分子检测技术.     

应用新城疫诊断试剂盒快速诊断非典型鸡新城疫的研究

应用新城疫单抗酶联诊断试剂盒对３群发生疑似新城疫的鸡群进行了快速诊断。采用肛门泄殖腔棉拭取样方法取样，分别取６９．３５和３８份样品，应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检测出新城疫强毒抗原阳性分别为５、３和２份样品，诊断该３群发生非典型鸡新城疫。用病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方面验证表明，新城疫单抗酶联诊断非典型新城疫简便、快速、准确。     

鸡新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

从河北、天津、北京等省市发病鸡群中分离到8株有血凝性的分离物,其血凝作用可被新城疫阳性血清所抑制,而不能被AIV(H9亚型)、EDS76阳性血清所抑制,表明8株分离物均为新城疫病毒。利用鸡胚终点稀释法对这8株NDV进行了克隆。对8株NDV的毒力指数(MDT、ICPI、IVPI)测定结果显示:MDT在42 9～49 5h之间,ICPI在1 95～2 00之间,IVPI在2 68～2 89之间。表明8株NDV均为新城疫病毒强毒株,其毒力与标准强毒株F48E8相近。各分离毒株经2%磷钨酸负染后,电镜下观察,可见丝状、圆形或不规则形态的病毒粒子,表面有纤突样结构。各毒株的大小不尽相同,粒子直径或长轴在100～500nm之间。     

鸡新城疫—减蛋综合症—传染性支气管炎三联油佐剂灭活疫苗的研究及应用

用分离、鉴定、筛选出的病毒株 ,研制成鸡新城疫—减蛋综合症—传染性支气管炎三联油佐剂灭活疫苗。通过实验室免疫效力、安全性、免疫期、保存期和攻毒试验 ,该疫苗强毒攻击保护率为10 0 % ,免疫期 2 0 0d以上 ,保存期在 4 50d以上 ,经大范围应用 ,免疫效果良好。     

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究 (Ⅳ报)——疫苗的田间试验

[目的]评价禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗的临床应用效果,为联合防制禽霍乱和新城疫提供条件。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌1502强毒株与鸡新城疫病毒La Sota弱毒株混合,制备成5批合格的二联油乳剂灭活苗,用于鸡、鸭和鹅的田间安全性和免疫保护试验。[结果]田间安全性试验表明,免疫鸡、鸭和鹅均未出现不良反应;鸡的田间免疫效力试验表明,7～14日龄雏鸡和60～90日龄青年鸡免疫3周后新城疫血凝抑制（ND-HI）抗体效价均比对照组高2～3 log2,可持续4个月以上,禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率均达到75.0%以上,免疫效力可持续6个月;鸭和鹅的田间免疫效力试验表明,接种3周后免疫组ND-HI抗体效价均≥4.2 log2,对照组均≤2 log2;鸭、鹅的禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率分别在75.0%和62.5%以上。[结论]该二联苗免疫禽类安全可靠,具有良好的免疫效果。     

1株抗肿瘤新城疫病毒的毒力分析

[目的]分析1株抗肿瘤新城疫病毒(NDV)的毒力。[方法]通过传统毒力的测定方法,测定此株NDV的最小致死量的平均死亡时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)及静脉致病指数(IVPI)。通过RT-PCR扩增此株病毒基因组的多个片段,相邻扩增片段之间有部分核酸序列重叠且覆盖完整的融合蛋白(F)基因和血凝素神经氨酸酶(HN)基因的区域,并进行测序。[结果]此株NDV的MDT为105.6h,ICPI约为0.26,IVPI为0。测序结果表明,此株病毒是1株新的NDV,其F蛋白剪切位点为112RRQRRF117。[结论]此株NDV为弱毒株,其F蛋白剪切位点与强毒株一致。除F蛋白剪切位点外,NDV的毒力必然与其他因素相关。     

表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建

 【目的】重组新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒（very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV）及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21 d分别以vvIBDV Gx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV－VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120 h,脑内致病指数（ICPI）分别为0.4和0.36,静脉内致病指数（IVPI）均为0;接种后72～96 h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0 EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100％保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90％以上。 【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病－新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。     

鸡新城疫病毒S_1山东分离株的生物学特性研究

通过SPF鸡致病性试验、MDT、ICPI、血凝解脱速率和血凝素热稳定性试验 ,结果表明 ,从山东分离的鸡新城疫病毒S1株与Lasota、F4 8E8间存在生物学差异。对S1株的鸡胚增毒量进行了研究 ,结果显示 ,10 3 5EID50 接毒量既不影响病毒的增殖量也不影响其感染性     

藏鸡NDV的分离鉴定及F基因的遗传进化分析

【目的】探讨藏鸡NDV的毒力和F基因的遗传进化特征。【方法】从采集的藏鸡病料中分离鉴定NDV,通过测定鸡胚平均致死时间（MDT）和1日龄雏鸡脑内接种致死指数（ICPI）来确定分离株的毒力。采用RTPCR方法克隆藏鸡NDV分离株F基因,测序后进行序列分析,并进行进化分析。【结果】共分离鉴定出F5、FX10、F20、F74、F75、F17、F72、FH2等8株NDV,其中F17、F72、FH2为强毒株,其余5株为弱毒株。8株病毒F基因ORF均为1 662 bp,编码553个氨基酸,强毒株ORF编码产物含有12个半胱氨酸残基,弱毒株有13个半胱氨酸残基,比强毒株在27位(强毒株C²⁷变为R²⁷)多了1个半胱氨酸残基;有6个潜在的糖基化位点。分离的8株NDV与GenBank中发表的20株NDV参考毒株比较结果表明,F蛋白氨基酸序列变异位点较多,主要集中在8-30,97-124,45,385-386,402-403,479-494,509-520位氨基酸处,强毒株AA替代较集中,而弱毒株保守区较多且AA替代较分散。分离NDV株之间F基因编码区核苷酸序列同源性为83.5%～99.9%,其中强毒株之间同源性为95.2%～99.4%,弱毒株之间同源性为99.4%～99.9%。分离NDV株之间F基因编码的氨基酸同源性为87.5%～99.5%,其中强毒株之间同源性为95.3%～98.2%,弱毒株之间同源性为98.6%～99.5%。进化分析显示,3株强毒株均为基因Ⅶ型,5株弱毒株均为基因Ⅱ型。【结论】分离了8株藏鸡NDV,其中3株为强毒株,属于基因Ⅶ型;5株为弱毒株,属于基因Ⅱ型。     

新城疫野毒株的分离鉴定

2000年春从河南省不同地区的鸡群中分离到2株新城疫病毒，该二毒株经鸡胚传代培养，血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)，鸡胚平均死亡时间(MDT)试验，1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定，6周龄非免疫鸡静脉接种指数(IVPI)测定及空斑试验等生物学特性试验，结果表明该二毒株为新城疫强毒株。     

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究（Ⅳ报）——疫苗的田间试验

1材料与方法 1．1二联营的制备与质量检验 1．1．1毒株来源与二联苗的制备。禽A型为杀性巴氏杆菌（APM）效力检验用强毒为C48．1株,鸡新城疫病毒（NDV）效力检验用强毒为北京株、APM1502株和NDVLaSota株,均购自中国兽药监察所。将APM强毒1502株培养菌液与NDV弱毒LaSota株感染鸡胚尿囊液混合,经甲醛溶液灭活后,按马闻天等的方法制备5批二联油乳剂灭活疫苗（批号05-1—05-5）。     

一步法复合RT-PCR鉴别ND强毒与AI病毒的研究

根据新城疫病毒（NDV）融合蛋白和禽流感病毒（AIV）核蛋白的核酸序列设计2对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156bp和219bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT—PCR。试验中未能检出弱毒力NDV,IBV,IBDV,REV,REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性。经验证,复合引物与单一引物的扩增效率一致,能够检出NDV和H;亚型AIV的最低病毒量分别为10^3.7EID。和10^3.9EID50。试验结果表明,此次建立的一步法复合RT—PCR特异、敏感,适用于强毒力NDV和AIV．感染的快速鉴别。