红花花瓣总RNA提取方法的比较研究

红花花瓣富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢产物,严重影响花瓣总RNA的提取。为探索适合红花花瓣总RNA的提取方法,以4种红花不同时期的花瓣为材料,通过对4种RNA提取方法,即RNA提取试剂盒、RNAiso Plus试剂法、改良的CTAB法和SDS法进行比较研究。结果表明:RNAiso Plus试剂法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高、浓度高。通过RT-PCR验证,所提取的RNA达到基因克隆和实时定量PCR等分子生物学实验要求。     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

红肉桃果实总RNA提取方法的研究

以红肉桃果实为材料,采用Unizol总RNA提取试剂盒、CTAB法、冷酚法和改良SDS法4种方法分别提取果皮和果肉中总RNA,以期获得提取红肉桃果肉中总RNA的最适方法。比较,发现改良后的SDS法更适合于红肉桃果实总RNA的提取。此方法所得RNA完整性好,纯度和浓度均较高,可用于RT-PCR分析研究及后续实验。     

番茄叶片及果实总RNA提取方法的比较

以番茄品种Moneymaker(MM)为材料,比较了试剂盒法、Trizol法和Trizol改良法3种方法对番茄叶片及果实不同时期总RNA的提取效果,分别采用核酸蛋白检测仪及琼脂糖凝胶电泳,测定了提取样本总RNA的浓度、纯度及完整性。结果表明,就番茄叶片而言,3种方法提取的总RNA纯度均较好;其中Trizol改良法是提取番茄叶片总RNA最适宜的方法。对番茄不同时期果实而言,华越洋试剂盒法提取青果期、转色期果实总RNA的效果最好,其浓度最高,且琼脂糖凝胶电泳条带清晰完整、无拖尾现象,但成本最高;而提取成熟期果实RNA的最优方法是Trizol改良法,完整性最好,成本较低。研究为开展后续相关基因表达及功能研究等分子生物学研究提供了技术基础。     

一种有效的沙棘总RNA提取方法

高质量RNA的提取是分子生物学和基因工程研究的必要前提.以盐胁迫过的沙棘叶片为实验材料,建立了一种有效的沙棘总RNA提取方法.该方法提取的沙棘总RNA得率较高,平均为213.94 μg/g(鲜叶),RNA的完整性好,纯度较好,利用丙酮和KAc有效的消除了多糖、多酚和黄酮的干扰.反转录实验证明,所提取的沙棘总RNA具有较强的反转录活性,能够运用到后续的分子生物学研究中.研钵等实验用品采用酒精燃烧的方式去除外源RNase,并且药品都是常规试剂,大大的节省了实验时间和降低了实验成本.     

芍药芽总RNA提取方法的研究

以处于休眠和解除休眠时期的芍药芽为试验材料,采用改良CTAB法、Trizol法和EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取其总RNA,通过核酸蛋白仪、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测所提总RNA样品的品质。结果表明,Trizol法没有提取到芍药芽总RNA;EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取的总RNA浓度太低,无法满足下一步试验的要求;改良CTAB法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28S rRNA亮度约是18S rRNA的2倍,且无降解现象。以改良的CTAB法提取的总RNA为模板进行内参Actin扩增,得到的条带清晰,与目的片段大小一致,进一步证明此方法提取的总RNA能够满足后续试验的要求。     

月季基因组DNA与总RNA提取方法的优化研究

[目的]优化月季基因组DNA与总RNA的提取方法。[方法]通过对经典提取方法的改进与筛选,获得月季DNA和总RNA。[结果]经过改进与筛选的方法提取的月季DNA和总RNA可用于酶切、PCR和RT-PCR等一系列分子生物学的研究。[结论]该研究为其他以次生代谢物含量丰富植物为材料的研究提供了技术参考。     

一种有效的葡萄叶片总RNA提取方法

RNA的提取技术是现代分子生物技术的基础,植物RNA的提取比较困难.实验以新鲜的葡萄叶片为材料,采用SDS、CTAB相结合的方法,进行酚/氯仿的提取,消除了DNA及植物中较多的多糖、多酚等污染,提取到较纯净的总RNA,此方法适合于葡萄叶片总RNA的提取,试剂简单经济,实验结果稳定,重现性强.     

甜高粱茎秆总RNA提取方法的比较

甜高粱是最具潜力的能源作物之一,新鲜的甜高粱茎秆中含有大量汁液且富含多糖和多酚成分,很难获得高质量的总RNA。以甜高粱Rio的茎秆为实验材料,利用Trizol法、SDS法、改良CTAB法和RNAiso法分别提取新鲜茎秆总RNA,比较几种方法获取的总RNA质量与纯度。实验结果证明,RNAiso改良法提取的茎秆总RNA质量高,完整性好,总RNA产物可直接用于建库和转录组测序等后续实验。     

洋葱不同组织RNA提取方法比较分析

探讨洋葱不同组织总RNA提取的最优方法,以期为今后开展洋葱的分子生物学研究奠定基础。以洋葱品种W470发育旺盛时期的叶片、根、鳞茎为材料,比较Ta KaRa试剂盒法、TIANGEN试剂盒法、TRIzol法、p BIOZOL法等4种RNA提取方法提取洋葱RNA的效果。凝胶电泳结果显示,除了TIANGEN试剂盒法不能提取洋葱根的总RNA,其他方法在洋葱不同组织中均可提取到不同质量的RNA。对不同方法提取洋葱RNA浓度、纯度进行检测发现,Ta KaRa试剂盒法提取洋葱叶片的总RNA浓度为342.31μg/g,p Biozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA浓度分别为1 119.39、171.85μg/m L。经RT-PCR验证,Ta KaRa试剂盒法提取的洋葱叶片总RNA、p BIozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA均成功扩出洋葱β-actin基因片段。由结果可知,Ta KaRa试剂盒适合提取洋葱叶片的总RNA,p BIOZOL法适合提取洋葱鳞茎、根的总RNA且质量能够满足后续试验要求。     

一种提取菊科植物各组织中总RNA的改良方法

以入侵菊科植物微甘菊(Mikaania micrantha Kunth)、紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)、豚草(Ambrosia artemisiifolia Linn)、飞机草(Eupatorium odoratum Linn)、假苍耳(Iva xanthifolia Nutt)的根、茎、叶及花蕾为试验材料,采用改良的盐酸胍法提取总RNA,通过紫外分光光度计测定RNA样品的得率和纯度,用琼脂糖电泳检测RNA样品的质量和完整性。结果表明:采用新方法提取的总RNA,其OD260nm/OD280nm值为1.8~2.0,且RNA得率较高;琼脂糖电泳出现18S和28S 2条清晰的rRNA条带,而且28S rRNA条带的亮度约为18S的2倍。采用改良的盐酸胍法可以从不同植物组织中提取到高质量、完整性好总RNA。     

云南栘［木衣］叶片总RNA提取方法的比较与改进

高质量RNA的提取是开展云南栘［木衣］分子生物学研究的前提。采用OMEGA (Plant RNA Kit 50)试剂盒、TIANGEN(TRNzol-A+Reagent)试剂盒、CTAB法、Trizol法、SDS法及其改良法6种方法提取云南栘［木衣］叶片的RNA,并用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测仪及RT-PCR技术比较了6种不同方法提取的总RNA样品的质量。结果表明，2种试剂盒法和trizol法不适合云南栘［木衣］RNA提取，无法得到28S、18SrRNA条带，CTAB法和SDS法虽能得到RNA的3条带，但拖带现象严重，A₂₆₀/A₂₃₀的比值较低，对SDS法进行改进，提高β-巯基乙醇的量，在缓冲液中增加PVP，使用HiBind RNA Mini柱，有效地抑制多酚多糖的污染，得到了较高质量、可用于RT-PCR扩增的云南栘［木衣］的RNA。对其开展分子生物学研究提供技术支撑。     

海岸植物许树和单叶蔓荆提取total RNA的简便方法

[目的]介绍海岸植物叶片组织total RNA提取的一种简单、便捷方法。[方法]取800~1 000 mg许树和单叶蔓荆的鲜叶,加液氮研磨后制成提取液,提取液加试剂4℃下离心,冰浴后室温下离心,依次添加试剂后室温下离心,即得total RNA样品。[结果]分光光度计测试提取的total RNA的A260/A230大于2.10,A260/A280在1.93左右;RNA溶液中RNA浓度约为4.0μg/μl。该方法用了较少试剂种类;每根柱只需洗4次便可获得较好质量的total RNA;一次研磨800~1000 mg材料可提取约700μg total RNA;电泳检查表明提取的totalRNA符合分子生物学研究要求,可直接用于各种分子生物学试验。[结论]该方法是一种以较少试剂、较小费用、短时间内提取较高质量与产量的海岸植物叶片组织total RNA的简单、便捷方法。     

BALB/C小鼠不同组织RNA提取方法的比较

为获得高质量BALB/C小鼠的核酸用于荧光定量RT-PCR分析,用某公司的RNA试剂盒、TRIzol试剂、氯化锂分别提取BALB/C小鼠心脏、肝脏和肾脏组织中的RNA。经紫外分光光度计检测发现,用TRIzol试剂在小鼠肾脏组织中获得的核酸片段具有更高的纯度及浓度,而1%琼脂糖凝胶电泳检测发现三种来源的RNA均具有较好的完整性。RT-PCR方法扩增小鼠主要组织相容性复合体蛋白H-2K编码基因,3个样品均可扩增出104 bp的特异性条带。试验验证了TRIzol试剂从不同组织中提取小鼠总RNA均可作为RT-PCR的模板,为后续试验工作奠定基础。     

应用RT—PCR技术快速检测马铃薯纺锤块茎类病毒

根据马铃薯纺锤块茎类病毒序列,设计合成了一对特异性引物．以感染PSTVd的马铃薯试管苗为材料,提取其总RNA,获得纯度较高、完整性较好的总RNA．以此总RNA为模板,进行cDNA合成及PCR扩增,从感病组织中扩增得到一段约为359bp的特异RNA扩增产物,与理论设计大小一致,而健康组织无此扩增产物．     

苹果组织总RNA提取方法的比较研究

本试验以苹果品种富士(Fuji)为材料,采用Trizol法、改良的SDS法和改良的CTAB法提取其茎尖总RNA,并用OD260/OD280值和1.2%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的产量、纯度和完整程度。结果表明:通过改变CTAB法的提取缓冲液组成,缩短LiCl和乙醇沉淀的时间,可在2～3h内得到质量好、产量高、反转录和RT-PCR效果好的总RNA,该法是一种快速有效的适宜苹果组织总RNA提取的方法。     

菠萝果实不同部位总RNA提取方法比较

以不同发育时期和不同部位的菠萝果实为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA差异明显,其中改良SDS法的效果最佳,其提取的RNA质量较好,无DNA污染,OD260/OD280和OD260/OD230接近2.0,产量达到464.3μg/g.FW以上,该方法提取的RNA能满足RT-PCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究的需要。     

辣椒叶片RNA提取方法研究

以经过紫外线诱导处理的辣椒叶片为材料,分别用Trizol试剂快速提取法、尿素提取法和酚 SDS提取法提取其总RNA,比较各RNA产率、纯度及电泳图谱等,结果表明,尿素法提取的RNA28S和18S条带较为清晰,还可得到23S和16S带,较少有降解;而另2种方法所获得的RNA纯度较低,降解严重,琼脂糖电泳图谱通常只出现1条带.     

阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究

采用一步法、异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法和STE法3种方法,分别对阿魏侧耳总RNA的提取效果进行比较。结果表明,一步法难以提取RNA,异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在蛋白污染,这2种方法不适于富含多糖的阿魏侧耳总RNA的提取;STE法提取阿魏侧耳总RNA质量高、完整性好、成功率高,经琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S,18S,5S三条带,且28S的亮度是18S的2倍左右,OD260/OD280比值为18～20,可作为阿魏侧耳总RNA提取的首选方法。用此方法来提取阿魏侧耳液体发酵不同时期的RNA,可以满足进一步分子生物学研究的要求。