绿僵菌毒素的提取

用金龟子绿僵菌的液物培养体,提取绿僵菌素。每升培养液得绿僵菌素0.7mg。用绿僵菌素注射青杨天牛幼虫,每克虫体用量10.6μg,3d内死亡率达100％。     

绿僵菌毒素的研究进展

绿僵菌毒素是绿僵菌产生的具有杀虫活性的次生代谢物质,在农业害虫防治方面具有广阔的应用前景。根据其分子量和结构分为低分子量毒素和高分子量蛋白毒素两大类,对其分子结构、种类、提取方法、生物活性、产生条件等进行了综述。     

响应面法优化绿僵菌产绿僵菌素A的培养条件

【目的】优化绿僵菌Metarhizium anisopliae产绿僵菌素A的培养条件,提高绿僵菌素的产量。【方法】应用响应面法设计试验,以Plackett-Burman试验设计和中心组合试验设计筛选得到影响绿僵菌液体发酵的关键因素。【结果】试验得到1个拟合程度高、误差小的模型,该模型给出的最佳培养条件为:蔗糖22.7 g·L~(–1)、蛋白胨13.4 g·L~(–1)和发酵时间9.70 d,预测绿僵菌素A最大质量浓度为6.90μg·mL~(–1),实际测得质量浓度为6.89μg·mL~(–1)。【结论】结果可为绿僵菌大规模发酵获得粗毒素提供理论依据,使绿僵菌粗毒素的广泛开发与应用成为可能。     

绿僵菌的研究进展

综述了近年来国内外对绿僵菌属的分类、绿僵菌入侵寄主过程中的相关基因的研究、剂型开发等方面的概况。     

绿僵菌酯酶同工酶的研究

对１８株绿僵菌以及绿僵菌不工的酯酶同酶进行了比较研究。结果表明,不同菌株的酶谱类型存在着明显差异,同一菌株不同世代间酶谱类型虽未变化,但其酶活性随着继代数的增加而降低,而且酶型以及酶活性的变化与菌株的毒力,亲缘关系以及其他生物学特征存在着一定的相关性。因此,酯酶同工酶可以作为绿僵菌毒力筛选和菌各鉴定的一种参考指标。     

绿僵菌属分类的研究进展

绿僵菌属真菌是一类广泛用于生防制剂的昆虫病原真菌,其分类历史长达上百年,分歧比较大.为完善绿僵菌属真菌的分类提供参考,对近年来绿僵菌属系统分类的研究现状以及分类方法进行综述,并总结了现行研究中存在的问题,展望了绿僵菌系统学的研究前景.     

生防绿僵菌研究进展

就绿僵菌属的分类、绿僵菌侵染机制、与入侵相关的重要酶以及生防制剂的开发进行了综述,在此基础上对绿僵菌应用存在的问题及时策进行了探讨。     

金龟子绿僵菌致病的分子机理研究进展

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一类重要的昆虫病原真菌,在害虫生物防治中起着重要作用.与化学农药相比,昆虫病原真菌开发的真菌杀虫剂作用时间持久、无环境污染、对非靶标生物安全,但存在致死时间长,杀虫效率低,防效不稳定等缺点,严重阻碍了真菌杀虫剂的广泛应用,为解决这一问题,从分子水平揭示昆虫病原真菌的致病机理尤为重要.从分子水平阐述了金龟子绿僵菌对寄主的识别与粘附、绿僵菌侵染寄主过程中附着胞的形成、绿僵菌对寄主体壁的穿透机制和绿僵菌进入寄主血淋巴后的适应机制.     

寄生椰心叶甲绿僵菌的培养特性及ITS序列鉴定

测定了8株分离于自然罹病死亡的椰心叶甲虫体绿僵菌的培养特性并采用其ITS序列进行系统发育分析,结果表明:绿僵菌在以玉米粉作碳源,牛肉膏、蛋白胨作氮源的条件下菌丝的生长速率最快,产孢量最高;绿僵菌对温度和pH的适应范围较广,最适宜的生长温度是26～28℃,pH为6～7时,菌丝生长最快,孢子量最多,绿僵菌的致死温度为55℃.基于8个菌株rDNA的ITS1-5.8S-ITS2区域序列的系统研究结果表明,8个菌株均聚在金龟子绿僵菌小孢变种(Metarhizium anisopliae var.anisopliae)构成的分支中,明显可分成两群,HY-4、YP-6、SX-2、QH-4为一群,与标准菌株FI1091一AF135214接近,另一群为HK-5、SY-2、SS-2、WC-1,与标准菌株Mb5EF113340接近.     

10种农药与绿僵菌的相容性测定

为研究10种农药对绿僵菌生长的影响情况,选用10种不同农药,稀释成不同浓度分别加入到SDAY培养基中,用直径为4 mm的无菌打孔器在其中央打孔,然后吸取50μL绿僵菌孢子悬浮液分别注入孔中,置温度25℃、湿度80%的条件下培养,十字法测量菌落的直径和观察孢子颜色变化.结果表明:杀菌剂多菌灵对绿僵菌的生长抑制作用最强,生物化学农药吡虫啉对绿僵菌的生长抑制作用最弱;随着农药浓度的降低,所试农药对绿僵菌的生长抑制作用也随之降低.通过测定10种农药与绿僵菌的相容性,选择生物相容性好的农药以低剂量与之配伍,既可使菌剂增效,又可大幅度降低农药用量,为开发防治害虫的绿僵菌制剂奠定基础.     

液体深层培养贵州绿僵菌分生孢子的研究

本文对贵州绿僵菌液体深层培养的研究表明，不同氮源对生长量、液生芽孢子和液生分生孢子产孢量影响显著．不同碳源对生长量和液生芽孢子产孢量影响显著，但对液生分生孢子产量无明显影响．同时试验还表明，液生分生孢子的形成与培养液的碳氮比、pH以及通气量有关．     

一株绿僵菌的分离及其毒力的研究

从田间采集感染了绿僵菌病的鳞翅目(毒蛾)幼虫体上,分离筛选获得了一株对4种蔬菜鳞翅目害虫具有高毒力的绿僵菌菌株(VM07)。室内毒力测定结果表明,该菌株对4种鳞翅目蔬菜害虫的3龄幼虫均有一定的致死作用。其中,对菜青虫效果最好,2个浓度处理后的总死亡率分别为100%和92%;对斜纹夜蛾的效果其次,处理的总死亡率分别为93%和85%;对小菜蛾和银纹夜蛾的效果再次之,高浓度处理的死亡率分别为68%和70%,低浓度处理的死亡率分别为45%和52%。根据该菌株的培养性状和形态特征确定该菌株为黄绿绿僵菌小孢变种(M.flavoviride Gams & Rozsypal var.minus Rombach)。     

戴氏虫草菌丝体的培养及成分测定

在胨PS和麸皮培养液中 ,戴氏虫草菌丝体得率高 ,振荡培养较静止培养得率高 ,但投入也较高。人工培养菌丝体的紫外吸收光谱与冬虫夏草相一致 ,菌丝体的氨基酸和矿质元素含量也较高     

Evaluating effective Trichoderma isolates for biocontrol of Rhizoctonia solani causing root rot of Vigna unguiculata

The highly diverse genus Trichoderma has provided many formulations that are alternatives to the chemical pesticides in agriculture. The present study was undertaken to investigate the biocontrol potential of eight Trichoderma species, T. atrobrunneum, T. guizhouense, T. paratroviride, T. pyramidale, T. rufobrunneum, T. simmonsii, T. thermophilum and T. viridulum, against the phytopathogenic fungus Rhizoctonia solani. Trichoderma isolates were first evaluated in vitro by dual culture tests for their antagonism, mycoparasitic ability and antifungal activity against R. solani. Their growth promoting potential was further assessed in relation to phosphate solubilization, indole acetic acid and siderophore production. Five of the isolates were selected and evaluated for their abilities to prompt plant growth and to control R. solani infecting Vigna unguiculata(cowpea) seedlings in vivo. Two most effective isolates, T. guizhouense 9185 and T. simmonsii 8702, significantly(P0.05) reduced the disease severity incidences(36.6 and 45.0%, respectively) and promoted plant growth, which have good prospects for application.     

绿僵菌对马尾松毛虫的感染反应分析

通过以金龟子绿僵菌菌株M337和M104系列浓度的分生孢子悬液(1.0×1011-1.0×107个孢子.L-1)对马尾松毛虫幼虫的体表接种试验,测定马尾松毛虫对供试菌株的感染反应。运用时间—剂量—死亡率模型,对死亡率随时间和剂量的变化作了拟合,并与球孢白僵菌(Bb01和Bb02菌株)进行比较。接种后第10-12天绿僵菌M337菌株的LC50分别为1.86×109、1.52×108和1.67×107孢子.L-1,在浓度梯度为1.0×1011-1.0×108孢子.L-1下的LT50为7.69-11.18 d。结果表明M337菌株对马尾松毛虫具有较强的致死作用。     

金龟子绿僵菌室内侵染刚竹毒蛾试验

3个金龟子绿僵菌菌株 ( M1、M2 、M3 )经室内侵染试验证明 ,皆能侵染 2～ 3龄刚竹毒蛾幼虫 ,其中以 M3 菌株的致病力较强 ,M1和 M2 次之 .M3 的 L C50 =7.5 5× 1 0 6孢子· L-1,L T50 =5 .88～ 1 0 .5 0 d(在 1 .0× 1 0 11～ 1 .0× 1 0 7孢子· L-1浓度下 ) .M1和 M2 的 LC50 分别为 3.1 2× 1 0 7孢子·L-1和 7.0 1× 1 0 7孢子· L-1,LT50 分别为 6.5 0～ 1 1 .65 d和 7.66～ 1 1 .5 3d.不同温度、湿度下的分生孢子萌发力试验表明 ,供试的 3个菌株具有较强的耐高温和耐旱特性 .试验结果显示绿僵菌在防治刚竹毒蛾上具有较大的开发利用价值     

6种杀菌剂对金龟子绿僵菌孢子萌发的影响

测定了6种杀菌剂对金龟子绿僵菌分生孢子萌发的抑制作用。结果表明,不同杀菌剂对金龟子绿僵菌的抑制作用不同,且随着杀菌剂浓度的下降而减小。其中以腈菌唑的抑制效果最弱,除Ma103菌株外,对其他菌株抑制率均低于35%。代森锌对Ma202,Ma201和Ma203菌株的平均抑制率都较小。其他几种杀菌剂都明显抑制绿僵菌大部分菌株分生孢子的萌发,特别是百菌清和甲基托布津对Ma103,Ma205,Ma207和Ma208菌株的平均抑制率都为100%。2种药剂也强烈抑制其他菌株分生孢子的萌发。因此,应该尽量避免百菌清和甲基托布津与金龟子绿僵菌同时同地使用,否则会明显影响金龟子绿僵菌制剂的应用效果。     

金龟子绿僵菌对椰心叶甲的致病力

采用喷菌法接菌,测定5株金龟子绿僵菌对不同龄期椰心叶甲的致病力。结果表明:浓度为(1±0.5)×10~7孢子·mL~(-1)的孢子悬液接菌10 d后,各绿僵菌菌株对该虫不同发育阶段均有一定致病力。其中,以Ma1775菌株对椰心叶甲致病力最强,成虫校正死亡率和僵虫率分别为(67.96±3.66)%和(60.59±1.31)%,LT_(50)为(7.11±0.52)d;5龄幼虫校正死亡率和僵虫率分别为(78.53±2.73)%和(73.55±3.22)%,LT_(50)为(5.77±0.38)d;4龄幼虫校正死亡率和僵虫率分别为(82.59±2.48)%和(77.86±3.44)%,LT_(50)为(5.80±0.14)d;2~3龄幼虫校正死亡率和僵虫率分别为(73.46±4.60)%和(69.50±3.87)%,LT_(50)为(6.49±0.12)d。Ma1775菌株对该虫各发育阶段6 d的LC50分别为:3.52×10~8、7.13×10~7、2.48×10~7、7.69×10~7孢子·mL~(-1)。时间-剂量-死亡率(time-dose-mortality,TDM)模型分析结果表明椰心叶甲各发育阶段幼虫死亡高峰期均为3~7 d。因此,Ma1775菌株在椰心叶甲生物防治中有较大的应用潜力。     

小檗碱与绿僵菌复配的相容性及对桃褐腐病菌的抑制作用

[目的]探讨小檗碱与绿僵菌复配的可能性。[方法]考察小檗碱对绿僵菌孢子萌发、菌丝生长及产孢的影响,并测定小檗碱与绿僵菌复配对桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)的抑制作用。[结果]试验浓度的小檗碱对绿僵菌的孢子萌发、产孢量和菌落形成未产生明显影响;当绿僵菌与褐腐病菌共培养时,绿僵菌处于优势菌群,褐腐病菌未能影响绿僵菌的生长;小檗碱与绿僵菌复配能完全抑制褐腐病菌的生长。[结论]小檗碱和绿僵菌可混合使用,二者相容性好。     

1株产几丁质酶绿僵菌的筛选及其产酶特性

为了提高绿僵菌产几丁质酶的酶活力,在自然条件下,从患病蜱体表分离到10株绿僵菌与8株白僵菌,通过筛选,得到1株绿僵菌Ma002。对该菌液体深层发酵产几丁质酶进行了测定,结果表明:几丁质酶的最佳产酶条件:碳源为胶体几丁质,氮源为蛋白胨,接种种龄为24h,以瓶体积的12%为装基量,在温度26℃,起始pH值7.5～8.0,搅拌速度180r/min,产酶时程96h,酶活力可达2.63U/mL,比原基础培养基上的酶活力(1.67U/mL)提高57%。