甜菜总DNA不同提取方法的研究

采用CTAB法、SDS法、改进CTAB法和改进SDS法提取甜菜总DNA,并对提取得到的DNA进行质量鉴定和PCR扩增效果检测.结果表明：用改进的CTAB法提取的甜菜总DNA OD260/OD280在1.8左右,DNA纯度好,产率高,CTAB法和改进的SDS法产率次之,SDS法最低.同时对改进的CTAB法的提取条件进行优化,即用5.0 mL细胞提取液,0.8 mL无水乙醇, 0.6倍体积的异丙醇,可从1.0 g甜菜叶片中提取到高质量高纯度的DNA 764 μg/g.     

油梨果肉DNA提取方法的比较

为了获取高质量的油梨果肉DNA,以油梨果肉为试材,比较改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法对油梨果肉DNA的提取效果。结果表明:上述3种方法均可从油梨果肉中提取DNA,但改良SDS法与改良CTAB法所获得的DNA浓度都在600μg/m L以上,纯度(OD260nm/OD280nm)均在1.8左右,纯度高且完整性较好,可用于未来分子标记分析。     

不同方法从绞股蓝种子中提取基因组DNA的研究

以绞股蓝种子为研究材料,采用改良的CTAB法、改良的SDS法和高盐低pH法对绞股蓝基因组DNA进行提取,对提取效果采用紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳和RAPD进行综合比较分析。结果表明:3种提取方法所获得的DNA,其OD260/OD280多数都在1.80~2.00,琼脂糖凝胶电泳结果也显示DNA的质量很好,改良的SDS法提取效率显著好于改良的CTAB法和高盐低pH法;而且改良的SDS法提取的DNA的RAPD图谱条带最亮、最清晰。因此,从DNA产量、质量等方面综合考虑,改良的SDS法为绞股蓝种子DNA提取的有效方法。     

桫椤科植物DNA提取方法研究

[目的]探讨桫椤科植物DNA提取的最优方法。[方法]采用经过改良的SDS法和CTAB法对3种桫椤科植物进行基因组DNA提取,用紫外分光光度计测定其在波长260和280nm处的吸光值,并根据A260nm/A280nm的比值分析其DNA的纯度。将提取的基因组DNA进行叶绿体trnL-trnF非编码区序列扩增和ISSR分析。[结果]改进的CTAB法所提出的DNA较纯净,所获得DNA样品的A260nm/A280nm比值在1.750～2.050范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示条带清晰。[结论]改良的CTAB法更适合桫椤科植物DNA的提取。     

不同提取方法提取辣椒及其制品中DNA效果研究

采用CTAB法、SDS法、吸附柱法对辣椒及其制品中的基因组DNA进行提取,分别通过核酸蛋白测定仪、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光PCR扩增检测。结果表明,CTAB法、SDS法、吸附柱法均能从鲜辣椒、干辣椒、油辣椒、辣椒酱中抽提得到DNA,从核酸蛋白测定仪检测得到的DNA提取物OD260/OD280值可看出,CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较吸附柱法的低;DNA样品的琼脂糖凝胶电泳发现,各样品均无大范围明显拖尾,说明DNA提取完整度较好;实时荧光PCR检测分析3种提取方法的不同样品基因组DNA均出现PCR扩增曲线。经试验比较确定,提取方法的效率由高到低依次为吸附柱法>SDS法>CTAB法。可见,吸附柱法最适用于辣椒及其制品中核酸提取。     

太行花DNA提取的优化和适用分子标记检测

比较了常规CTAB法、改良CTAB法和SDS法对太行花叶片总DNA的提取效果,并对改良CTAB法提取的DNA在多种分子标记中的适用性进行了测试.结果表明:常规CTAB法提取的DNA难以完全溶解,且有褐化现象;SDS法提取的DNA产率及纯度都很低;改良CTAB法提取的DNA产率高且稳定,无明显降解,杂质少,OD260/OD280值在1.8左右.以改良CTAB法提取的DNA为模板,应用叶绿体和线粒体通用引物扩增出了特异性的高效产物,ISSR和RAPD引物对总DNA的扩增也获得理想结果.因此,改良CTAB法适用于太行花总DNA提取,其产物能满足核、叶绿体和线粒体基因组分子实验的要求.     

四倍体菘蓝基因组DNA提取方法的比较

[目的]探讨四倍体菘蓝组培苗高质量DNA的提取方法。[方法]分别采用CTAB法1、CTAB法2、SDS法1、SDS法2和碱裂解法对四倍体菘蓝组培苗DNA进行提取试验,通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳,比较了5种DNA提取方法对四倍体菘蓝组培苗的提取效果。[结果]CTAB法2提取DNA的OD260/OD230值为2.311,OD260/OD280值为1.774,DNA纯度最大,浓度最大,提取率最高,PCR扩增条带清晰,重复性好,所得DNA的质量最好。[结论]CTAB法2是提取四倍体菘蓝组培苗基因组DNA最有效的方法。     

石斛属植物基因组DNA提取方法的对比

笔者使用6种DNA提取方法提取7种含糖量较高的石斛属植物的DNA,比较不同方法提取DNA的效果,结果表明:改良PEX法和改良CTAB法对含有丰富多糖和多酚类的石斛属植物的DNA提取效果较好。改良PEX法与其他5种方法对比,可以更好地去除多糖类和多酚物质的干扰,能够满足后续的分子生物学实验的要求。改良CTAB法和改良SDS法与CTAB法和SDS法相比,可获得较高的DNA产率,并且可以较好地去除多糖类杂质的干扰。     

菠萝DNA提取方法的研究

采用石英沙代替液氮,用SDS法和CTAB法提取菠萝的DNA。结果表明,SDS法所提取DNA的平均OD值为1.704,提取率为2.098μg/g;CTAB法所提取DNA的平均OD值为1.498,提取率为1.412μg/g。SDS法和CTAB法所提取的DNA都可用作RAPD分析。     

濒危兰科植物DNA的提取方法

濒危兰科植物组织富含多糖和多酚类物质,提取高质量的DNA较困难。为优化濒危兰科植物基因组DNA提取方法,采用改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法对多种濒危兰科植物基因组DNA进行提取,对获得的DNA质量、浓度和纯度进行比较。结果表明,用改良CTAB法和试剂盒法可有效去除多糖类和多酚类物质的干扰,DNA提取效果较理想,改良SDS法较差;CTAB法获得的DNA浓度高于试剂盒法,且后续PCR扩增效果也优于试剂盒法。     

中华桫椤DNA提取及ISSR分析

[目的]研究中华桫椤总DNA的提取方法。[方法]采用SDS法和改良CTAB法提取中华桫椤总DNA,通过电泳检测方法进行比较。[结果]用改良CTAB法得到的DNA浓度和纯度都较高,基本上无蛋白质、多糖等杂质。用改良CTAB法得到的总DNA进行ISSR-PCR扩增,谱带清晰,获得较好的效果。[结论]为提取高质量的DNA样品奠定了基础,并为探讨中华桫椤自然居群的遗传多样性和种群遗传结构及进一步保护和利用中华桫椤提供了分子遗传学依据,     

魔芋DNA快速提取新方法及ISSR-PCR扩增

[目的]研究魔芋DNA的提取方法。[方法]采用CTAB、SDS及新改良的方法提取魔芋总DNA,通过分光光度计检测、电泳检测及ISSR-PCR检测方法进行比较分析。[结果]采用新改良的方法得到的DNA纯度及产量均较高,适于魔芋DNA的快速提取;以其为模板进行ISSR-PCR扩增,条带清晰,可获得较好的结果。[结论]为大规模提取高质量的魔芋DNA奠定基础,也为进一步研究魔芋的遗传多样性提供了分子依据。     

中药材附子基因组DNA提取方法研究

[目的]为研究附子的遗传多样性、种质鉴定和指纹图谱的构建提供基本保证。[方法]以中药材附子药源植物的幼嫩叶片和块根为试材,分别采用SDS法、CTAB法和改良CTAB法从中药材附子药源植物中提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。[结果]对于新鲜叶子,采用SDS法提取DNA的A260/A280值最接近1.80,其次为改良CTAB。采用改良CTAB法从新鲜附子提取DNA的A260/A280值最接近1.80,表明改良CTAB法的除杂效果优于SDS法。SDS法适于杂质含量较低的试材。采用SDS法提取的DNA浓度最高,改良CTAB法次之,CTAB法最低;从鲜材料提取基因组DNA浓度比干材料高。[结论]3种方法均能提取到中药材附子药源植物的基因组DNA,SDS法对新鲜叶子提取的基因组DNA效果最佳,改良CTAB法对新鲜附子进行DNA提取的效果最好。     

提取桑天牛成虫肠道微生物基因组DNA的2种方法比较

比较了改良CTAB法和改良SDS法两种提取桑天牛成虫肠道微生物基因组DNA的方法,结果表明：改良SDS法提取的DNA杂质较多,并且有部分降解;改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于后续试验研究.     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

茶树基因组DNA的高效提取方法

为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组DNA，对4种植物DNA提取方法进行改良后，以茶树春梢为材料，对提取效果进行了比较，并首次采用CTAB区室法提取茶树基因组DNA。结果表明，用该4种方法提取的DNA，其OD260／OD280都在1．8以上，相对分子质量均大于21kb，能完全被EcoRI酶切消化，也能获得清晰的PCR扩增图谱。因此，只要操作合理，4种方法均能提取出高质量的DNA。     

不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的比较

分别研究对比了3种不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量,以确定适合吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的提取方法。采用紫外分光光度法和普通电泳检测法比较了常规CTAB法、SDS法和改良CTAB法提取吴茱萸叶片基因组DNA的效果;采用紫外分光光度法和非变性电泳检测法比较了酚-SDS法、Trizol法和改良异硫氰酸胍法提取吴茱萸叶片RNA的效果。结果表明,分别采用不同方法提取的吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量差异较大。常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量的吴茱萸叶片基因组DNA,而改良CTAB法提取效果较好;酚-SDS法和Trizol法不适合高质量吴茱萸叶片RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法的提取效果良好。     

光皮桦基因组DNA 提取方法比较

为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera 嫩叶中获得高质量DNA , 设计了5 种先提核再提DNA 的CTAB 法Ⅰ , CTAB 法Ⅱ , CTAB 法Ⅲ , CTAB 法Ⅳ及改进的SDS 法, 并以常规CTAB 法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA 进行了提取, 采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/ A280值测定、限制性内切酶处理和PCR 扩增等方法对所提的DNA 进行了比较分析。结果表明:实验设计的5 种改进方法提取的DNA 质量要比常规法的好, 但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB 法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA 的最佳方法;PCR 扩增结果表明, 不同的DNA 提取方法会影响PCR 带型的变化。图3 表1 参13     

魔芋DNA快速提取新方法及ISSR-PCR扩增（摘要）

[目的]研究魔芋DNA的提取方法。[方法]采用CTAB、SDS及新改良的方法提取魔芋总DNA,通过分光光度计检测、电泳检测及ISSR-PCR检测方法进行比较分析。[结果]采用新改良的方法得到的DNA纯度及产量均较高,适于魔芋DNA的快速提取;以其为模板进行ISSR-PCR扩增,条带清晰,可获得较好的结果。新改良的方法与常规的SDS及CTAB方法相比,有以下优点：①效率高。运用冷冻研磨仪进行研磨,克服了研磨困难问题,节约液氮,且研磨效率大大提高,研磨时间短,褐变较少,1个人即可同时大批量进行提取;②提取质量高。在提取液中加入高浓度的PVP、β-巯基乙醇及KAc,有效去除了多酚和多糖等次生物质,检测结果DNA条带清晰,且无拖尾,更有利于大规模样本DNA提取;③用材少。需要的魔芋组织量少,适宜对较为珍贵的材料进行DNA提取,从而进行分子标记辅助育种、群体遗传多样性分析和种芋纯度鉴定的研究。[结论]为大规模提取高质量的魔芋DNA奠定基础,也为进一步研究魔芋的遗传多样性提供了分子依据。