牛、羊肉中水貂、猪、鼠混杂成分的多重荧光PCR鉴定方法的建立

针对现阶段肉类食品市场中出现的以劣充优的掺假问题,通过视觉、触觉、嗅觉和味觉等传统方法来鉴定肉的外观、色泽、气味和硬度,已不能满足现阶段肉类质量和源性的鉴别要求。基于现代分析仪器和生物技术的肉类掺假识别方法主要包括:基于蛋白质的检测方法、酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、色谱分析方法和基于DNA序列的分子生物学检测方法。其中,基于DNA序列的分子生物学检测方法特别是荧光PCR法具有特异性强、灵敏度高,快速准确的优点。本实验运用了多重荧光PCR的技术,建立了检测牛羊肉类中掺杂水貂(Mustela lutreola)、猪(Sus scrofa)、鼠(Mus musculus)3种动物源性成分的检测方法。在3种动物源性的线粒体16S r DNA的保守区设计了一对通用引物,在可变区设计了水貂、猪、鼠3种物种特异性的分子信标探针,分别进行了探针的特异性验证、实验体系的灵敏度验证和样品的检出限实验。特异性验证中,3种探针均可有效排除其他物种DNA的干扰,特异扩增;灵敏度验证实验中,设置了7个DNA浓度稀释梯度,每个梯度6个重复,确定了该体系的灵敏度为0.01 ng/μL;样品检出限实验中,设置了3种掺杂方式,每种方式7个不同的掺杂质量比,每个质量比4个平行样,确定了本实验的样品检测灵敏度可达到1%(质量比)。本研究结果显示,本方法能特异、准确、灵敏地鉴别出牛羊肉中水貂、猪和鼠的掺杂成分,为多物种的源性鉴别提供了科学依据。     

桑黄基因组DNA提取方法优化及分子鉴定

本研究以桑黄为材料,筛选出一种快速直接提取子实体DNA的方法。利用CTAB法、试剂盒及硅珠DNA纯化技术分别对桑黄子实体基因组DNA进行提取,结果表明,硅珠DNA纯化技术的提取效果最好,试剂盒方法次之。经过PCR扩增和测序得到桑黄的rDNA ITS序列,通过BLAST比对及系统进化树构建,发现所检测的样品为哈尔蒂木层孔菌Phellinus hartigii。     

植物染色体制片中疑难问题的解析

用传统和改进的染色体制片技术,以油菜、水稻和芝麻的根尖为材料,分析了染色体数目多、形态小和细胞质较浓植物的染色体制片过程中存在的常见疑难问题,如中期分裂相少、染色体不易着色等,并提出了解决方案。     

魔芋DNA快速提取新方法及ISSR-PCR扩增

[目的]研究魔芋DNA的提取方法。[方法]采用CTAB、SDS及新改良的方法提取魔芋总DNA,通过分光光度计检测、电泳检测及ISSR-PCR检测方法进行比较分析。[结果]采用新改良的方法得到的DNA纯度及产量均较高,适于魔芋DNA的快速提取;以其为模板进行ISSR-PCR扩增,条带清晰,可获得较好的结果。[结论]为大规模提取高质量的魔芋DNA奠定基础,也为进一步研究魔芋的遗传多样性提供了分子依据。     

猪链球菌2型分离株对野生斑马鱼的致病性

以野生斑马鱼为模式动物,对6株mrp＋epf＋sly＋猪链球菌2型（SS2）分离株进行致病性比较。斑马鱼经腹腔接种不同稀释度的SS2分离株,连续观察5d,Kaplan-Meier生存曲线分析并统计半数致死量（LD50）。结果显示,6个分离株对斑马鱼的LD50在10^5cfu-10^6cfu之间,临床株与非临床株的毒力差异不显著（P〉0.05）。从攻毒后死亡的鱼腹腔和脑可分离到SS2,并伴有腹腔出血及肝、肠、脑部炎性病变。表明SS2可感染斑马鱼,为进一步研究SS2的体内感染机制及毒力因子功能等奠定了基础。     

八倍体草莓DNA指纹图谱的构建与初步遗传分析

为对草莓品种进行分子鉴定,从59对SSR引物中筛选出18对多态性好的引物,采用毛细管电泳检测方法对84份八倍体草莓品种进行标记分析,检测每个标记等位变异大小,并进行初步遗传分析。将每个引物对84份草莓扩增的带型按照一定原则进行数字标注,为了简化编码,引物P1~P18分别编号为字母A~R,将引物编号与相应的带型编码进行组合得到该样品在特定引物的扩增产物编码,按照18对引物顺序串联这些编码形成该品种的DNA指纹图谱。结果表明:18对SSR引物共扩增得到多态性条带150个,不同引物扩增到多态性条带数4~17个,共检测到377个带型;各引物的多态性信息含量(PIC)值为0.494~0.908,平均值为 0.738;利用18对SSR引物共构建了84个草莓品种的DNA指纹图谱。聚类分析结果表明:在遗传相似系数为0.99时能将所有品种区分开,一些来源相同的品种被优先聚在一起。综上,本研究成功构建84个草莓品种的DNA指纹图谱,这些品种遗传关系较近。     

ScMYB原核蛋白诱导表达的影响因素研究

[目的]探讨ScMYB原核蛋白诱导表达的影响因素,优化表达条件。[方法]利用构建的ScMYB::pEASY-E1为表达载体,研究了诱导剂IPTG浓度、诱导时间、诱导温度及菌体浓度对该蛋白表达的影响。[结果]诱导剂IPTG浓度对表达量影响不大,其表达主要与诱导时间、温度及菌体浓度有关。[结论]在37℃诱导4 h,当OD600达0.6～1.0时,ScMYB原核蛋白诱导表达量最大。     

西洋参不同外植体诱导愈伤组织研究

研究了西洋参不同外植体愈伤组织的诱导方式与诱导效果。结果表明:(1)不同外植体之间愈伤组织的发生方式存在明显差异;(2)茎尖、茎段、根段与叶片4种外植体之间出愈率差异极显著;(3)6-BA对西洋参愈伤组织的诱导具有重要调控作用,当6-BA∶NAA=1∶4时,整体诱导效果相对最佳。     

陕西省小麦地方品种主要性状的遗传多样性研究

为进一步挖掘小麦种质资源潜力,给小麦新品种选育创造条件,对陕西省陕北、关中、陕南三个地区1 225份小麦地方品种主要性状的遗传多样性进行了分析和比较.结果表明,7个形态性状、3个农艺性状和2个抗病性状都存在着广泛的遗传多样性.通过对三个地区小麦12个性状的比较发现,在株高、千粒重、颖壳颜色3个性状上,陕北地区小麦品种的遗传多样性指数(H')较高,存在较大的变异;关中地区小麦品种在穗粒数、粒色、穗型和赤霉病抗性4个性状上遗传多样性指数(H')较高,表现较大的变异;陕南地区小麦品种则在冬春性、成熟期、芒长、硬度和条锈病抗性5个性状上遗传多样性指数(H')较高,变异较大,并且性状内的变异也相当丰富,这些都是陕西小麦资源遗传多样性的重要特征.     

22种山茶科植物叶片铝含量及其亚细胞分布

为探究不同山茶科植物叶片铝含量的差异性及铝的积累部位,本研究以22种常见山茶科植物叶片为实验材料,用差速离心法进行叶片亚细胞分级,用铝试剂法测定新老叶的叶片、细胞壁、细胞器、细胞可溶性组分铝含量。结果表明:山茶科植物叶片铝含量表现出明显的富集现象,且不同物种富集铝的能力存在显著差异,22种山茶科植物新叶铝含量在1 106.44~11 542.04 mg/kg之间,老叶铝含量在2 147.15~19 364.70 mg/kg之间,其中红皮糙果茶新叶铝含量和老叶铝含量均为最高;老叶铝含量比新叶铝含量高34%~184%;叶片内的铝主要累积在细胞壁,其铝含量占整个叶片的64.83%~95.80%,且铝积累的比例随叶片的成熟而增加;叶片的细胞器和可溶性组分铝含量均较低,其铝含量在不同物种间有显著性差异;叶片总铝含量与细胞壁铝含量、新叶与老叶总铝含量、新叶与老叶细胞壁铝含量均呈极显著正相关关系(p0.01)。