lmo2672基因缺失对LM在不同环境下生物被膜形成的影响

旨在了解AraC家族转录调控因子 lmo2672对单核增生李斯特菌(LM)生物被膜(BF)形成的影响。根据同源重组技术构建LM-△ lmo2672基因缺失株,利用结晶紫染色法比较LM EGD-e和LM-△ lmo2672在不同温度、渗透压、H_2O_2和胆酸盐环境中BF形成量的差异;通过qRT-PCR分析上述不同应激环境中BF相关基因相对转录水平的变化。研究结果证实:与LM EGD-e相比,LM-△ lmo2672在4℃,30℃,5%NaCl,8%NaCl,5mmol/L H_2O_2和0.3%胆酸盐培养环境中BF形成量显著降低;在37℃LM-△ lmo2672 BF形成能力极显著降低;在不同应激环境中,LM-△ lmo2672 BF形成相关基因的表达量均出现不同程度下降。研究结果表明, lmo2672基因在LM BF形成过程中发挥重要作用。     

绿色魏斯氏菌对单增李斯特菌毒力特性的影响

[目的]本文旨在研究绿色魏斯氏菌与单增李斯特菌共存对单增李斯特菌的生长能力、毒力基因表达及细胞黏附能力的影响,揭示乳酸菌与单增李斯特菌之间的交互作用机制。[方法]采用膜隔离装置,取4℃贮藏条件下放置0、12、24、48和96 h的菌悬液分别测定单增李斯特菌和绿色魏斯氏菌的数量,同时提取单增李斯特菌的RNA进行反转录和荧光定量PCR,分析单增李斯特菌6种主要毒力基因(hly A、prf A、bsh、act A、sig B和inl A)的表达情况。利用Caco-2细胞进行绿色魏斯氏菌与单增李斯特菌的竞争、排斥和置换试验,观察单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附效果。[结果]产细菌素绿色魏斯氏菌C1可降低单增李斯特菌的数量,而不产细菌素绿色魏斯氏菌C2对单增李斯特菌的生长影响不大。C1和C2的代谢产物使单增李斯特菌6种毒力基因表达量下调,且C1导致的下调趋势比C2大。C1主要通过置换和竞争作用来抑制单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附,而C2的作用较弱。[结论]产细菌素绿色魏斯氏菌C1比不产细菌素绿色魏斯氏菌C2能够更好地控制单增李斯特菌的生长,抑制相关毒力基因的表达,并主要通过置换和竞争作用来抑制单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附。产细菌素绿色魏斯氏菌C1可作为单增李斯特菌的防控菌株。     

羟自由基氧化对鲢鱼糜凝胶品质的影响

以冷冻鲢鱼糜为研究对象,用芬顿体系(H_2O_2的浓度分别为0.1,1.0,5.0,10.0和50.0 mmol/L)产生不同浓度的羟基自由基对其进行模拟氧化,研究冷冻鱼糜贮藏过程中氧化程度对鱼糜品质的影响。结果表明:随着H_2O_2浓度的增大,鱼糜的破断力、凹陷深度、凝胶强度和持水性都呈现先增加后降低的趋势,在H_2O_2浓度为1.0 mmol/L时均达到最大值;鱼糜凝胶水分状态分布中T_(22)峰面积也在H_2O_2浓度为1.0 mmol/L时达到最大值;Ca~(2+)-ATPase活性随着H_2O_2浓度的增大呈现先显著增大后降低的趋势;鱼糜凝胶的扫描电镜图片显示,适度氧化(H_2O_2浓度为0.1～1.0 mmol/L)的鱼糜凝胶拥有更加致密的网络结构,具有较小的孔隙,而过度氧化(H_2O_2浓度为10～50 mmol/L)又会导致网络结构的破坏。     

过氧化氢对小球藻干质量和油脂含量的影响

以小球藻(Chlorella sorokiniana)LS-2作为研究材料,用不同浓度过氧化氢(H_2O_2)进行处理。结果表明,所有处理均会抑制LS-2的生长。当H_2O_2浓度较低时,对干质量并没有明显影响,只有当H_2O_2浓度达到1.5 mmol/L时,LS-2的最大干质量才会显著降低,1.5、2.0 mmol/L H_2O_2处理的LS-2最大干质量分别下降了9.6%、17.3%。H_2O_2处理对LS-2的油脂总量影响不显著,但是当H_2O_2浓度达到2.0 mmol/L时,藻细胞的油脂含量显著增加,上升了28.6%。实时荧光定量PCR结果显示,尽管2 mmol/L H_2O_2处理使得Rubisco转录发生上调,但是其下游参与卡尔文循环的基因PKa、ALDO的转录水平均下降了50%,说明卡尔文循环受到抑制。参与油脂合成通路的基因ACCase变化不显著,其下游的ACPa、ACPb的转录水平是对照的2倍,暗示油脂合成途径获得了增强。在糖酵解通路中,ENL上调显著,但其下游的PKa、PKb转录水平的变化不明显,说明糖酵解途径没有受到抑制。由基因表达数据可知,当微藻处于胁迫环境中时,能够将用于生长的能量转化用于合成油脂并存储起来。     

松材线虫BxPrx基因抗H2O2胁迫的转录模式及功能

为探究松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)响应H_2O_2胁迫的分子机制,利用荧光定量PCR测定松材线虫过氧化物还原酶基因BxPrx在不同浓度(2.5、5.0、7.5、10.0mmol/L)H_2O_2胁迫下的转录水平;利用RNA干扰技术,沉默松材线虫BxPrx基因,比较H_2O_2胁迫下BxPrx基因沉默组与非基因沉默组松材线虫存活率的差异。结果显示:松材线虫的存活率与H_2O_2胁迫浓度呈负相关;松材线虫BxPrx在H_2O_2胁迫下的转录水平均提高;在5.0、7.5、10.0 mmol/L H_2O_2胁迫下,经过BxPrx基因沉默处理的松材线虫存活率显著低于对照组。     

延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤的初步研究

为了优化体细胞克隆胚胎体外培养液,提高体细胞的克隆效率,以CRlaa+5% FBS+0.3%BSA为基础培养液,分别添加0、60、80、100和120 μmol/L H_2O_2观察延边黄牛体细胞克隆胚胎的氧化损伤情况和体外发育模式,并研究1、4和7 mmol/L GSH对延边黄牛重组胚的保护作用.结果表明:(1)添加0、60、80 μmol/LH_2O_2组卵裂率显著要高于100 μmol/L和120 μmol/L组(P<0.05),添加H_2O_2的组囊胚发育率显著低于未添加组(P<0.05);(2)随着H_2O_2处珲浓度的升高,重组胚发育速度增加,但是发育停滞现象也更明显;(3)在培养液中添加GSH后,1 mmol/L组卵裂率显著高于7 mmol/L组(P<0.05),与0和4 mmol/L组差异不显著(P>0.05),囊胚发育率显著高于其它组(P<0.05).可见,在体细胞克隆胚胎体外发育过程中H_2O_2对其具有氧化损伤作用,不利其体外发育,在培养液中添加1 mmol/L GSH对体细胞克隆胚胎的氧化损伤具有明显的保护作用.     

洛阳地区鸡肉中单增李斯特菌毒力基因的分布研究

为分析鸡肉中单增李斯特菌毒力基因的分布特征,从洛阳地区市售鸡肉中分离18株单增李斯特菌,血清凝集试验确定其血清型,然后采用PCR方法对inl A、inl B、virR、dlt A、dlt B、dlt C、dlt D及mpr F等8个毒力基因进行检测。结果显示,18株分离株血清型均为1/2型,且有9株具有全部毒力基因,其中inl B、dlt A、dlt B基因全部呈阳性,inl A、virR、dlt C、dlt D、mpr F存在缺失现象,其检测率分别为88.9%(16/18)、94.4%(17/18)、83.3%(15/18)、88.9%(16/18)、83.3%(15/18)。毒力基因缺失与血清型相关性分析结果显示,不同血清型缺失基因呈多样性。表明这8个毒力基因在市售鸡肉的单增李斯特菌中普遍分布。     

牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重PCR检测方法的建立

【目的】建立牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌的双重PCR检测方法。【方法】根据布鲁氏菌IS711序列和单增李斯特菌毒力因子HlyA序列设计并合成引物,建立双重PCR检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检测,并制备污染模型乳,通过直接检测、增菌后检测、细菌富集后增菌检测,确定最低检测限。【结果】建立了牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重PCR检测方法,该方法特异性好、敏感性高、可重复性好。布鲁氏菌和单增李斯特菌单PCR检测最小DNA质量浓度分别为0.282和3.33 pg/μL,双重PCR检测最小DNA质量浓度分别为2.82和33.3 pg/μL。感染模型乳不经过增菌,布鲁氏菌和单增李斯特菌最低检测限分别为104和8×104CFU/mL;经过24h增菌,就可以检测到10 CFU/mL的布鲁氏菌,经过12 h增菌,就可以检测到8 CFU/mL的单增李斯特菌;经过离心法富集细菌后再增菌,灵敏度可以扩大40~50倍,布鲁氏菌经24 h增菌后最低检测限为10 CFU/40 mL,单增李斯特菌经12 h增菌后最低检测限为8 CFU/40 mL。【结论】建立的双重PCR检测方法特异、灵敏、可重复,可单独或同时检测牛奶中的布鲁氏菌和单增李斯特菌,也可以用于其他产品中布鲁氏菌和单增李斯特菌的检测。     

硝酸盐对小麦幼苗根系早期生长和抗氧化特性的影响

以小麦(Triticum aestivum L.)秋乐2122作为供试材料,以不含硝酸盐的Hoagland溶液为对照,研究不同浓度硝酸盐对小麦根系发育的影响。利用分光光度计和组化染色法检测根尖细胞中O_2~-·和H_2O_2含量,并测定细胞内相关氧化还原酶活性与还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果表明,硝酸盐能够显著增加小麦根尖细胞中O_2~-·而不是H_2O_2含量;高浓度硝酸盐(60 mmol/L)处理O_2~-·含量显著高于低浓度硝酸盐(10 mmol/L)处理。低浓度硝酸盐显著降低SOD酶活性和GSH含量,提高POD、谷胱甘肽还原酶(GR)和GSH-PX酶活性,使根部细胞具有良好的抗氧化能力,促进小麦根系生长。高浓度硝酸盐抑制小麦幼苗根系生长,是由于降低SOD与GSH-PX酶活性;虽然增加POD和GR酶活性,但是仍无法缓解根部细胞O_2~-·过量积累而造成的氧化损伤。所以不同浓度硝酸盐通过调节胞内O_2~-·含量,实现对小麦根系生长的调控。     

转录调控因子Lmo2672对LM环境适应性和应激的调控作用

【目的】本文为了解AraC家族转录调控因子Lmo2672对单核增生李斯特菌(LM)环境适应性和应激的影响。【方法】利用温控型质粒pKSV7构建LM-Δlmo2672缺失株,比较母源株LM EGD-e和缺失株LM-Δlmo2672在不同应激环境中生长情况的差异,并利用qRT-PCR方法分析转录调控因子Lmo2672缺失对应激调控基因及氧化应激相关基因转录水平的影响。【结果】与LM EGD-e相比,LM-Δlmo2672在37、42℃及含5%NaCl、0.3%胆酸盐、5 mM H_2O_2、1%Triton X-100的培养基中生长速度均显著降低(P0.05);且环境适应性及应激相关基因(prfA、lexA、fri、perR、kat、sod)转录水平显著降低(P0.05)。【结论】提示lmo2672基因在LM环境适应性和应激中发挥重要的调控作用。     

Exogenous GSH protects tomatoes against salt stress by modulating photosystem Ⅱ efficiency,absorbed light allocation and H_2O_2-scavenging system in chloroplasts

The effects of exogenous GSH(reduced glutathione)on photosynthetic characteristics,photosystem Ⅱ efficiency,absorbed light energy allocation and the H_2O_2-scavenging system in chloroplasts of salt-stressed tomato(Solanum lycopersicum L.)seedlings were studied using hydroponic experiments in a greenhouse.Application of exogenous GSH ameliorated saline-induced growth inhibition,the disturbed balance of Na~+ and Cl~- ions and Na~+/K~+ ratios,and the reduction of the net photosynthetic rate(P_n).GSH also increased the maximal photochemical efficiency of PSⅡ(F_v/F_m),the electron transport rate(ETR),the photochemical quenching coefficient(q_P),and the non-photochemical quenching coefficient(NPQ).In addition,GSH application increased the photochemical quantum yield(Y(Ⅱ))and relative deviation from full balance between the photosystems(β/α–1)and decreased the PSⅡ excitation pressure(1–q_P)and quantum yield of non-regulated energy dissipation(Y(NO))in leaves of salt-stressed tomatoes without BSO(L-buthionine-sulfoximine,an inhibitor of key GSH synthesis enzymeγ-glutamylcysteine synthetase)or with BSO.Further,the addition of GSH depressed the accumulation of H_2O_2 and malondialdehyde(MDA),induced the redistribution of absorbed light energy in PSⅡ reaction centers,and improved the endogenous GSH content,GSH/GSSH ratio and activities of H_2O_2-scavenging enzymes(including superoxidase dismutase(SOD),catalase(CAT),peroxidase(POD)and key enzymes in the AsA-GSH cycle and Grx system)in the chloroplasts of salt-stressed plants with or without BSO.Therefore,GSH application alleviates inhibition of salt-induced growth and photosynthesis mainly by overcoming stomatal limitations,improving the PSⅡ efficiency,and balancing the uneven distribution of light energy to reduce the risk of ROS generation and to mediate chloroplast redox homeostasis and the antioxidant defense system to protect the chloroplasts from oxidative damage.Thus,GSH may be used as a potential tool for alleviating salt stress in tomato plants.     

外源过氧化氢对NaCl胁迫下玉米种子萌发和幼苗抗氧化酶活性的影响

为了阐明外源过氧化氢(H₂O₂)对盐胁迫下玉米种子萌发毒害的缓解机制,以玉米种子“先玉335”为材料,研究了外源H₂O₂对36 mmol/L NaCl胁迫下种子萌发、幼苗生长和生理指标的影响。结果表明,单独用36 mmol/L NaCl处理显著阻碍了玉米种子的萌发和幼苗生长,发芽势、发芽指数、活力指数及幼苗芽和根长度和鲜重都显著下降。用不同浓度(1、3、6、12和24 mmol/L)H₂O₂均能显著提高NaCl胁迫下玉米种子发芽势、发芽指数和活力指数,促进了幼苗芽和根的生长,增强了芽和根中CAT、SOD和APX的活性,降低MDA含量,促进了脯氨酸和可溶性糖含量的增加且6 mmol/L H₂O₂缓解盐毒害作用最好。以上结果表明,外源过氧化氢通过激活抗氧化酶活性,降低盐胁迫诱导的氧化伤害和膜损伤,提高渗透调节剂的含量,从而增强了玉米种子的抗盐性。     

单核细胞增生性李斯特氏菌virR和mprF基因分布

为了研究virR和mprF基因在单核细胞增生性李斯特氏菌中的分布状况,为单核细胞增生性李斯特氏菌的防治及追踪污染源提供依据,本试验以分离自石家庄、保定地区的生鲜肉、水产品、速冻食品等6类不同来源共189株单核细胞增生性李斯特氏菌菌株为研究对象,利用热启动PCR技术对virR和mprF基因的分布进行了检测。结果表明:virR基因的总检出率为92.1%,mprF基因的总检出率为96.3%,且同时含有这2个基因的概率为91.5%;食品来源不同,单核细胞增生性李斯特氏菌virR、mprF基因的检出率稍有差异,且同一来源的菌株其mprF的检出率都稍高于virR,这表明不同的基因在单核细胞增生性李斯特氏菌中的分布存在差异。     

茶氨酸诱导烟草幼苗抵御干旱胁迫的研究

通过施用茶氨酸来减轻干旱胁迫对烟草幼苗的毒害,并从抗氧化物质和抗氧化酶来探讨其作用机理。结果表明,在干旱胁迫下,0.25 mmol·L-1茶氨酸能显著改善烟草幼苗的生长情况,提高其存活率;外源茶氨酸预处理不仅能显著提高干旱胁迫下烟草幼苗谷胱甘肽(GSH)含量,还参与调节烟草幼苗超氧化物酶(SOD)过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸还原酶(APX)活性,降低相对电导率、脯氨酸、过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)含量。茶氨酸诱导烟草幼苗抵御干旱胁迫是通过激发植物体抗氧化物质及抗氧化酶活性调节的综合结果。     

单核增生性李斯特氏菌mpl和plcB基因分布

为了研究mpl和plcB基因在单核细胞增生李斯特菌中的分布状况,为单核细胞增生李斯特菌的防治及追溯提供依据。本试验以分离自生肉、熟肉制品、冷冻食品、水产品、蔬菜等6类不同来源共105株单核细胞增生李斯特菌株作为研究对象,利用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌mpl、plcB基因的分布进行检测。结果表明:所有菌株均有这2个基因中的一个或全部,总检出率为100%。其中,mpl基因总检出率为82.9%,plcB基因的总检出率为98.1%。食品来源不同,单核细胞增生李斯特菌mpl、plcB基因的检出率不同,且同一来源的菌株其mpl和plcB的检出率也不同,表明不同来源以及不同的毒力基因在单核细胞增生李斯特菌中的分布存在差异。     

酸性电解水对低温条件下单增李斯特菌杀灭效果

单核细胞增生李斯特菌是一种嗜冷菌,能在低温下生长。冷藏即食食品和冷冻食品加工设备中单核细胞增生李斯特氏菌的生长是主要的食品安全问题。酸性电解水 ( AEW ) 是一种新型高效,安全且无残留的非热灭菌技术。AEW用于灭活4 ℃条件下的浮游态、生物膜态及冷藏金针菇样品上单核细胞增生李斯特菌。通过检测AEW处理前后菌落总数变化、生物膜、生物膜结构参数,毒力基因表达,进一步分析样品实验等。结果表明,当电解质浓度为0.1 %,处理时间为1 min时,4 ℃和37 ℃下的单核细胞增生李斯特菌菌落总数、生物被膜清除率存在极显著差异。研究结果丰富了我们对AEW灭活低温条件下的单核细胞增生李斯特菌知识,为评估冷链中食品和冷藏食品及食品加工设备的安全性提供了理论基础,对冷藏食品使用抗菌剂提出更高要求。     

O3/H2O2去除水中硝基苯效果与机理

以硝基苯为目标反应物,对O₃/H₂O₂体系氧化去除水中硝基苯的效果和机理进行了研究,考察了pH值、H₂O₂剂量、自由基抑制剂或促进剂对硝基苯的去除效果的影响.研究发现,在pH≤7时,H₂O₂促进臭氧化去除硝基苯的效果较为明显,当H₂O₂投加量从1.0 mg/L增加到4.0 mg/L时,在氧化5 min内,硝基苯     

Nitrogen Dioxide-Induced Responses in Brassica campestris Seedlings： The Role of Hydrogen Peroxide in the Modulation of Antioxidative Level and Induced Resistance

This article investigates the responses of Brassica campestris seedlings to an acute level of nitrogen dioxide (NO₂) exposure in a plant growth chamber, and examines whether pretreating plants with hydrogen peroxide (H₂O₂) will alleviate NO₂-caused injury. Twenty-eight-day-old B. campestris plants sprayed with 10 mmol L⁻¹ H₂O₂ aqueous solution (corresponding to approximate 1.0 mg H₂O₂ per single plant) were exposed to different concentrations of NO₂ (0.25, 0.5, 1.0, and 2.0 μL L⁻¹, respectively) for 24 h under controlled environment. To measure the plant biomass, the plants were fumigated with the same NO₂ concentrations as mentioned above for 7 h per day (8.00-15.00) for 7 days. As a control, charcoal filtered air alone was applied. Data were collected on plant biomass, total chlorophyll, photosynthetic rate, stomatal conductance, nitrate and nitrate reductase (NR), antioxidative enzymes, ascorbate (ASA), and malondialdehyde (MDA), immediately after exposure. The results showed that exposure to a moderate dose of NO₂ (e.g., 0.25 μL L⁻¹) had a favorable effect on plants, and the dry weight of the above-ground part increased, whereas the exposure to high NO₂ concentrations (e.g., 0.5 μL L⁻¹ or higher) caused a reduction in the plant biomass and the total chlorophyll, when compared with the control. In addition, at 0.5 μL L⁻¹ or higher NO₂ concentrations, prominent increases in the MDA level and superoxide dismutase (SOD) and NR activities were observed. Exposure to 1 μL L⁻¹ and higher NO₂ resulted in necroses appearing on older leaves, and an increase in catalase (CAT) activity, decrease in ASA content, increased accumulation of NO₃, and reduction in photosynthesis, when compared with the controls. No changes were detected in stomatal conductance under NO₂ fumigation. The pretreatment with 10 mmol L⁻¹ H₂O₂ alleviated significantly NO₂-caused biomass decrease and photosynthetic inhibition when compared with H₂O₂-untreated plants. Under NO₂ fumigation, further induction in SOD and CAT activities occurred in H₂O₂ treated plants when compared with H₂O₂-untreated plants. The effect of NO₂ on the ASA and MDA contents was also absent in H₂O₂-treated plants. However, the H₂O₂ treatment did not alter the nitrate content and NR activity in plants under NO₂ fumigation. The H₂O₂ treatment caused a lower rate of stomatal conductance. Taken together, these data suggest that fumigation with an acute level of NO₂ causes oxidative damage to B. campestris seedlings. The H₂O₂ pretreatment markedly protects plants against NO₂ stress and this may be associated with inducible antioxidative level. NO₂ fumigation contributes, at least in part, to the enhanced levels of nitrate in B. campestris leaves.     

假结核耶尔森氏菌rpoS基因的抗胁迫功能

为探讨食源性病原微生物假结核耶尔森氏菌的抗逆机制,采用同源重组原理进行双交换以获得rpoS基因突变株。分别在5mmol/L H_2O_2和pH 3.5两种胁迫下测定野生型菌株、rpoS基因突变株和互补菌株的存活率,并以2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)为荧光探针,测定两种胁迫下细菌胞内活性氧水平。结果显示,在5mmol/L H_2O_2和pH3.5胁迫下,假结核耶尔森氏菌rpoS基因突变株存活率明显降低,这种降低能够在互补菌株中得到恢复;突变株中胞内活性氧自由基水平明显高于野生型菌株和互补菌株。说明:rpoS基因具有帮助假结核耶尔森氏菌抗氧化胁迫和酸胁迫的功能,且这一功能的发挥是通过调节胞内活性氧水平实现的。