用牛血清白蛋白改善荸荠基因组DNA的RAPD扩增

在荸荠基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ（随机扩增多态性ＤＮＡ）扩增中，具合适浓度和片段长度的ＤＮＡ常常在适宜条件下无法扩增。这种现象常在干燥叶状茎ＤＮＡ的扩增中发生。提取的ＤＮＡ中存在一些ＲＡＰＤ（或ＰＣＲ）抑制剂可能是ＲＡＰＤ扩增失败的原因。多糖、多酚和其他...     

应用RT-PCR和RFLP分析肾型鸡传染性支气管炎病毒基因型

对来自浙江省３个不同地区的肾型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ－ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ）和参考株Ｈ１２０,通过蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ处理、酚－氯仿法抽提基因组ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到了预期为１．７２ｋｂ的Ｓ１蛋白基因ｃＤＮＡ,用限制性内切酶ＨａｅⅢ,ＰｓｔＩ,Ｋｓｐ６３２１对Ｓ１基因ｃＤＮＡ进行ＲＦＬＰ分析。结果表明ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ毒株的ＲＦＬＰ带型相同,但与经典的肾型ＩＢＶ代表株（即Ｔ株、Ｇｒａｙ株、Ｈｏ     

四川主栽小麦品种RAPD标记遗传差异研究

采用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 标记,对四川近５０ 年来年推广面积６－６７ 万ｈｍ２（１００万亩）以上的４０ 个小麦主栽品种遗传差异进行了初步探讨。结果表明,５５ 个随机引物中,有３２个引物（ 占５８－２％ ） 扩增产物具有多态性。３２ 个引物共扩增出１８５ 条带,其中９３ 条带（ 占５０％ ）具有多态性,每个引物可扩增出１ ～１１ 条多态性带,平均２－９ 条。４０ 个品种ＲＡＰＤ 标记遗传距离（ＧＤ） 变异为０－０１９ ～０－４７５ ,平均ＧＤ 值为０－２２１。聚类分析表明,在ＧＤ 值０－２３ 水平上,４０ 个品种可聚为５ 类。一些随机引物对有些品种能进行特异性扩增。引物ＯＰＮ１４ 对小麦１ＢＳ 扩增能产生特异性ＤＮＡ 片段,能完全鉴定出４０ 个供试品种中的９ 个１ＢＬ／１ＲＳ小麦－ 黑麦易位系品种。据此认为,ＲＡＰＤ标记可以作为小麦品种鉴定的指纹图谱。     

辣椒基因组DNA提取与RAPD分析

采用液氮－ＳＤＳ法、ＳＤＳ法和氯化苄法对辣椒的ＤＮＡ进行了提取。结果表明：液氮－ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ具有典型的天然ＤＮＡ分子的标准紫外吸收光谱,其Ａ２６０／Ａ２８０在１．６０～１．７０之间,Ａ２６０／Ａ２３０在１．５～１．８之间,１００ｍｇ叶子ＤＮＡ产量为６０～９０μｇ。用该法提取的辣椒ＤＮＡ适于进行ＲＡＰＤ分析。ＳＤＳ法、氯化苄法不适于辣椒ＤＮＡ的提取。     

提取植物和微生物DNA的SDS—CTAB改进法

该文介绍了一种简便快速地提取植物和微生物细胞总ＤＮＡ的方法，该法是对提取真菌ＤＮＡ的ＳＤＳ－ＣＴＡＢ法进行改进而成，经过修改后的ＳＤＳ－ＣＴＡＢ法可在数小时内高效地提取细胞总ＤＮＡ。制备物经琼脂糖凝胶电泳检测到大于２０ｋｂ的ＤＮＡ主带，基本无ＤＮＡ碎带；不用ＲＮａｓｅ处理，就已经无ＲＮＡ的干扰。ＯＤ２６０／２８０值显示产物纯度较高，无需任何纯化处理即可以用于ＰＣＲ扩增和ＲＡＰＤ分析。     

三种群银鲫的RAPD分析初报

利用２０个随机引物对产于方正、彭泽和淇河地区的三个银鲫种群进行了ＲＡＰＤ检测结果显示１４个引物的扩增效果良好,单一引物扩增的ＤＮＡ片段数在２￣１３条之间,片段长度在３００￣４０００ｂｐ之间。根据ＲＡＰＤ结果,进行了银鲫种群内、种群间的遗传差异分析。１４个引物中,引物ＯＰＶ－０７、ＯＰＶ－１４和ＯＰＶ－２０等对三种群银鲫扩增出的指纹图谱差异显著,可作为银鲫种群鉴定的分子标记。     

三种群银鲫的RAPD分析初报

利用２０个随机引物对产于方正、彭泽和淇河地区的三个银鲫种群进行了ＲＡＰＤ检测结果显示１４个引物的扩增效果良好,单一引物扩增的ＤＮＡ片段数在２￣１３条之间,片段长度在３００￣４０００ｂｐ之间。根据ＲＡＰＤ结果,进行了银鲫种群内、种群间的遗传差异分析。１４个引物中,引物ＯＰＶ－０７、ＯＰＶ－１４和ＯＰＶ－２０等对三种群银鲫扩增出的指纹图谱差异显著,可作为银鲫种群鉴定的分子标记。     

一种适合枣合酸枣基因组DNA的提取方法

研究比较了ＣＴＡＢ法和ＳＤＳ法在枣和酸枣基因组ＤＮＡ提取中的效果，并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提ＤＮＡ质和量及其ＲＡＰＤ扩增效果的影响。结果表明：用改良后的ＣＴＡＢ法优于ＳＤＳ法，可有效地去除多糖，所提ＤＮＡ的质和量均能满足ＰＣＲ扩增要求。取样时间与部位对所提基因组ＤＮＡ的质量无影响，但与产量有关，以旺盛生长期的幼叶或嫩梢尖为佳。样品采用液氧处理－７０℃低温保存，     

不同年份采收的豇豆种子的RAPD研究

ＲＡＰＤ是一种建立在ＰＣＲ基础之上的新的分子标记技术，利用ＲＡＰＤ技术对不同年份采收的豇豆种子进行了研究从豇豆干种子中直接提取的基因组ＤＮＡ可以用于ＲＡＰＤ分析在２０种１０ｂｐ随机引物中筛选出Ｓ２０７和Ｓ２０８２种引物，并获得了豇豆基因组ＤＮＡ的指纹图谱筛选出的２种引物均只在１９９７年采收的豇豆种子的基因组ＤＮＡ上扩增出１条ＤＮＡ带研究结果表明，不同年份采收的豇豆种子在遗传性上相当一致，而豇豆种子的基因组ＤＮＡ在贮藏过程中会受到损伤     

松材线虫和拟松材线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析

利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａ－ｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增,以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记．通过对４０个１０聚体随机引物的筛选,应用８个引物对两种线虫种间及种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％～５６％,而在松材线虫的不同分离物之间的共享度为６０％～８４％;其中有一个引物（Ｐ２５３）可在松材线虫和拟松材线虫种间产生具有种鉴定特征的特异性ＲＡＰＤ片段,在松材线虫的不同分离物中均可产生一约７００ｂｐ的特异性片段,而在拟松材线虫中产生了两个分别约为１３００ｂｐ和１９００ｂｐ的特异性片段．     

东北红豆杉性别相关的AFLP标记研究

利用AFLP技术,运用64个引物组合,检测雌雄东北红豆杉基因组DNA的多态性,筛选与东北红豆杉性别相关的分子标记.其中7对引物组合共提供了11个与东北红豆杉性别相关的分子标记,其中10个与东北红豆杉雌性相关的分子标记,仅1个与东北红豆杉雄性相关的分子标记.     

圆鼻巨蜥遗传多样性的RAPD分析

[目的]采用RAPD技术对圆鼻巨蜥（Varanus salvator）进行遗传多样性分析。[方法]用20个随机引物对圆鼻巨蜥36个个体的基因组DNA进行PCR扩增。[结果]有10对引物能扩出清晰稳定的条带,共扩增出2952条DNA片段,平均每个个体扩增出82个条带,其中47条具多态性,多态性位点比为57.32%,36个个体间遗传距离为0.035 9~0.335 9,平均遗传距离为0.135 92。Nei s基因多样性指数H=0.181 9,Shannon s多样性指数I=0.263 0,表明圆鼻巨蜥具有较高的遗传多样性。[结论]采用UPGMA法构建了36个个体相互关系的分子聚类图,发现没有形成明显的种群分化。     

小麦吸浆虫不同滞育虫态的RAPD研究

应用44条随机引物,对麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana(Gehin)10个不同滞育阶段的个体进行RAPD检测,筛选出6条随机引物S1,S50,S81,S83,S1031,S1248,可以扩增出清晰稳定的多态性片断81条,相对分子质量在200bp~2000bp之间。应用UPGMA(非加权配对算术平均法)对多态性片断进行聚类分析,构建树状图,推测不同滞育阶段之间的聚类关系。结果表明:在各个滞育阶段中,裸露幼虫相互之间的遗传距离和亲缘关系比较近,具有比较同质的遗传背景,而不同阶段的结茧幼虫相互之间的关系比较复杂。     

ISSR和ITS分子标记在黑龙江省野生黑木耳遗传多样性上的应用

利用ISSR和ITS标记对黑龙江省采集的33株野生黑木耳菌株和8个黑龙江省常见栽培菌株进行遗传多样性分析,利用PCR-ISSR体系,选出9个ISSR引物对菌株DNA进行扩增,通过聚类分析对遗传多样性进行分析。结果表明,9个ISSR引物扩增条带103条条带,其中多态性条带95条,多态性比率为92.2%,平均每对引物扩增出条带11.4条,平均每对引物扩增出多态性条带10.6条,平均多态性比例为91.7%。多态性信息含量(PIC)变化在0.063~0.924之间。通过ITS序列对黑木耳菌株进行亲缘关系分析,利用软件ClustalX 1.83和MAGA 4.1进行系统发育分析分析。结果表明,黑木耳ITS1、5.8S、ITS2三个区信息为点比例达到52.1%,遗传位点丰富。两种标记方法均显示黑木耳野生菌株间遗传多样性优于栽培菌株。ISSR和ITS两种方法联合使用可得到较好结果。     

马MxA基因第13外显子的多态性研究

[目的]研究4个品种马MxA基因第13外显子的多态性。[方法]根据GenBank中已公布的MxA基因序列设计引物,利用PCR技术从三河马、锡尼河马、乌审马和巴尔虎马血液基因组DNA中扩增MxA第13外显子基因片段,利用PCR-SSCP方法检测该基因片段多态性并进行测序。[结果]只有乌审马MxA基因第13外显子存在多态性,第2 018位点发生了突变,鸟嘌呤（G）→腺嘌呤（A）,由此导致氨基酸发生改变,由谷氨酸（G lu）→丙氨酸（A la）。[结论]该研究为探讨马MxA蛋白基因抗病毒作用奠定了基础。     

弓形虫GJS株表面抗原1基因的克隆及真核表达质粒的构建

根据GenBank数据库中的RH株弓形虫表面抗原1(SAG1)基因序列设计1对引物,应用PCR技术从弓形虫GJS株速殖子基因组DNA中扩增编码SAG1的基因片段.PCR产物经纯化、酶切后定向插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,转化至大肠杆菌DH5α,经酶切及PCR鉴定后测序,并进行序列分析.结果表明:从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增出1 008 bp的特异SAG1片段,大小与预测值相符,与已知的SAG1基因核苷酸序列(GenBank登录号:S76248)的ORF和氨基酸序列的同源性均为99%.     

一株高产脂肪酶产生菌16S rDNA的序列分析

[目的]对分离获得的高产脂肪酶菌株进行鉴定,为其改造和更好利用奠定基础.[方法]对从食堂下水道中分离获得的一株高效产脂肪酶细菌(JLΠ-4)进行培养,提取其基因组DNA.设计16S rDNA通用引物,扩增16S rDNA基因片段,并连接到pUC19-T载体上,转化大肠杆菌DH5X,经PCR鉴定的阳性克隆摇菌培养后测序.[结果]提取获得较高质量的基因组DNA,扩增获得新分离菌株16S rDNA基因片段,长度为1528 bp,BLAST相似性比对分析结果表明,其与伯克霍尔德氏菌16S rDNA序列相似性达97%,是一株与伯克霍尔德氏菌最近的革兰氏阴性菌.[结论]初步将高产脂肪酶细菌JTΠ-4鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德菌.     

适宜AFLP分析的龙眼基因组DNA提取方法

以龙眼“石硖”、“大乌圆”、“大广眼”、“龙荔”叶片为试材,研究了一种适宜AFLP分析的龙眼基因组DNA提取方法,其改良策略是:在细胞核被裂解前先除去多酚类等次生物质,防止多酚类的氧化,细胞裂解后再加入10%的CTAB,进一步除去杂质。此方法不仅适用于嫩叶采样,也适用于老叶采样,所提取的基因组DNA可成功进行AFLP标记分析,为龙眼的分子生物学研究提供了科学依据。     

应用RAPD技术探讨红叶李、李和杏的亲缘关系

为了对红叶李Prunus cerasifera cv.Atropurpurea,李P.salicina和杏P.armeniaca的亲缘关系、品种识别及资源保存提供分子生物学依据,也为了验证传统的形态学分类方法,从132个随机引物中筛选出20个引物对红叶李、李和杏的8个材料进行了基因组DNA扩增,均具有多态性,共扩增出264条带,平均每个引物产生13.2个RAPD片段.RAPD带型及聚类分析表明:RAPD技术能将红叶李、李属植物和杏属植物完全分开,红叶李、李和杏之间表现出一定的亲缘关系,各属品种之间都有不同的遗传距离,证明RAPD技术可作为种和属水平的分类鉴定依据;利用红叶李、李和杏品种的特异谱带结合DNA指纹,可将参试的各品种鉴别出来,从而说明了RAPD技术能够用于种或品种之间的鉴定.图2表2参12     

普通小麦抗条锈新种质——WT212的细胞遗传学分析及其抗性基因的RAPD标记

对普通小麦抗条锈新种质--WT212的细胞遗传学及其抗性基因的RAPD标记进行了研究。结 果表明,WT212所携带的抗源不同于1BL／1RS易位系为基础的"洛类"抗源,而是一种来自黑麦染色体组的抗条 锈新抗源,初步断定WT212是只涉及1对染色体的小麦-黑麦易位系;RAPD分析筛选出重复性强、在抗病亲本 和抗性基因池稳定出现的特异DNA片段2个,即引物S369的扩增片段和引物S1397的扩增片段,其长度分别约 为770和1400 bp。对引物S369扩增出的特异片段与目的基因的遗传连锁性进行了分析,结果表明,引物S369扩 增出的特异DNA片段与目的基因紧密连锁。