一种适用于动物与植物总DNA提取的方法——改良CTAB法

[目的]介绍一种简单、高效且能用于提取动物与植物的总DNA的方法。[方法]采用改良CTAB法,从24个花生品种嫩叶及小白鼠的肝、肺和肾中提取DNA,进行琼脂糖电泳和蛋白核酸分析仪检测及PCR扩增检验。[结果]所提取DNA电泳条带清晰,整齐均匀,OD260/OD280值介于1.77~1.83,用于PCR扩增获得理想效果。[结论]该研究介绍的改良CTAB法提取动物和植物的总DNA,满足开展PCR扩增的要求。     

刺参DNA提取方法的探讨

由于刺参体壁中含有大量黏多糖,故其总DNA的提取明显存在着多糖干扰的问题。本实验将传统的动物DNA提取法———SDS裂解法和常用于植物DNA提取的CTAB法加以改进,分别从刺参成体和幼参中提取了基因组总DNA。结果表明,两种方法均可获得较完整的总DNA,其分子量约为23 kb,OD260/OD280比值在1.60~1.90之间。     

一种广泛适用于植物基因组DNA提取的方法

[目的]研究植物基因组DNA提取方法,为从植物组织中快速提取基因组DNA提供指导。[方法]在已发表的植物基因组DNA提取方法基础上,对SDS提取法的操作步骤、试剂用量及作用时间进行了优化。[结果]初步建立了一种广泛适用于各类植物及植物多种组织器官的基因组DNA提取方法。所提取的基因组DNA质量较好,满足下一步操作的要求。[结论]该研究结果为植物基因组DNA的快速提取提供了指导方法。     

一种从动物源性化妆品中快速提取DNA的方法研究

为了达到从分子水平上检测化妆品动物源性成分的目的,本研究建立了一种从化妆品中提取动物源性基因组DNA的方法。该方法使用Chelex-100结合玻璃奶提取化妆品中的基因组DNA,具有污染小、操作简单、快速、高效等优点。分别利用紫外分光光度计、普通PCR和DNA测序等方法对提取DNA的质量进行检测,结果表明DNA浓度和纯度均能达到后期分子检测要求。说明本方法提取的DNA适用于在分子水平上检测化妆品的动物源性成分。     

不同数量猪毛中提取基因组DNA的比较

在进行分子生物学试验尤其是动物分子标记的研究中需要大量纯化的基因组DNA,这些DNA通常情况下是从动物的血液、耳组织、肝脏等组织中提取,所提取的基因组DNA质量较好.但是,在进行本地猪遗传多样性研究过程中,通常需要大量的血样,其获得和收集较为困难,尤其是野猪的血样更不易获得.因而,从猪的毛发中提取合格的DNA将解决上述难题.通常认为,从动物的毛发中提取DNA无论从数量还是质量上均明显低于从血样或其他组织中提取的DNA .但也有从脱落的狗毛中成功地提取基因组DNA的报道.为了探索从毛发中提取合格DNA的途径,本试验通过从不同数量的猪毛中提取的DNA进行质量比较分析,找出适合于做分子标记试验所需猪毛样本数量,为提高样本收集效率,降低劳动强度和减低试验成本提供依据.     

改良SDS法提取多种植物基因组DNA研究

结合传统SDS法提取DNA和Silica吸附柱纯化DNA的优点,建立了能进行多种植物基因组DNA提取的改良SDS法,为提取植物基因组DNA通用方法的建立提供了参考。     

药用绞股蓝属植物基因组DNA提取方法比较

从叶片中提取高质量的DNA是进行绞股蓝分子生物学研究的前提。植物基因组DNA的提取方法较多,笔者以安康平利县产绞股蓝属植物幼嫩叶片为材料,通过采用改良的CTAB法、改良SDS法和高盐低pH值法三种方法提取绞股蓝基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取DNA样品进行质量检测。结果显示高盐低pH值法提取的DNA电泳主带较亮且点样孔基本无异物,为绞股蓝叶片DNA提取比较适宜的方法。     

核桃叶片基因组DNA的4种提取方法比较

以核桃叶片为材料,比较了高盐低pH法、SDS法、改良CTAB法和适合酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法提取基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、RAPD、ISSR等方法进行PCR扩增和用EcoRI、PstI内切酶酶切对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量和质量.结果表明,4种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同,其中酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法产量最高,纯度适中.4种方法提取的DNA对以后的PCR和酶切均没有影响.     

3种植物DNA提取法中多糖类物质去除效果的研究

为探明DNA提取过程中去除多糖的有效方法,以丁香属3种植物为材料,用3种DNA提取方法（普通CTAB法、氯苯法和高盐法）提取丁香属植物基因组DNA。对提取的DNA质量采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计法进行检测,并采用蒽酮硫酸法测定DNA提取过程中多糖含量的变化。结果表明：3种方法的多糖去除率相近且都比较高。高盐法与前两种方法相比对人体和环境危害较小且操作简单,是最适合该属植物的DNA提取方法。该方法采用了专门的去除多糖的步骤,为DNA提取过程中多糖的去除提供了一定的理论依据。     

一种高效提取虎耳草科植物基因组DNA的方法

[目的]探索从虎耳草科植物中提取DNA的有效方法。[方法]采用改进的CTAB法,从11种虎耳草科植物中提取DNA。以提取的DNA为模板,利用通用引物"psbAF"和"trnHR"对虎耳草科植物叶绿体DNApsbA-trnH片段进行PCR扩增。[结果]通过该方法提取的DNA纯度较高,质量较好。用所得DNA进行psbA-trnH扩增的产量高,可用于后续的测序等分析。对山地虎耳草的PCR产物纯化后进行测序,得到262 bp的序列。将其与GenBank中的虎耳草属其他植物的psbA-trnH序列进行比对分析,证实该序列为目标psbA-trnH片段的区域。[结论]该方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体psbA-trnH测序分析和其他遗传学分析。     

抗草丁膦转基因玉米不同DNA提取方法及PCR检测

以改良PEX,CTAB和SDS方法从转基因玉米材料中提取基因组DNA,并以外源CaMV35S启动子、bar基因及内源基因Zein的序列设计引物,用PCR方法扩增预期大小的DNA片段。结果显示,3种方法提取的DNA用以PCR检测都获得了预期大小的扩增片段,但改良PEX提取方法更省时省力。研究认为,改良PEX提取方法是一种简捷、快速和高效的植物DNA提取方法。     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16S rDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除快速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1／fD2和01I／012c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1％琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除陕速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

中药材附子基因组DNA提取方法研究

[目的]为研究附子的遗传多样性、种质鉴定和指纹图谱的构建提供基本保证。[方法]以中药材附子药源植物的幼嫩叶片和块根为试材,分别采用SDS法、CTAB法和改良CTAB法从中药材附子药源植物中提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。[结果]对于新鲜叶子,采用SDS法提取DNA的A260/A280值最接近1.80,其次为改良CTAB。采用改良CTAB法从新鲜附子提取DNA的A260/A280值最接近1.80,表明改良CTAB法的除杂效果优于SDS法。SDS法适于杂质含量较低的试材。采用SDS法提取的DNA浓度最高,改良CTAB法次之,CTAB法最低;从鲜材料提取基因组DNA浓度比干材料高。[结论]3种方法均能提取到中药材附子药源植物的基因组DNA,SDS法对新鲜叶子提取的基因组DNA效果最佳,改良CTAB法对新鲜附子进行DNA提取的效果最好。     

从猪毛囊中快速提取基因组DNA的有效方法

采用酚仿抽提法提取猪毛囊中的基因组DNA,并以此为模板进行猪骨形态发生蛋白7基因(BMP7)片段的扩增鉴定,优化建立一种快速、简单提取动物基因组DNA的方法。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,从猪毛囊中提取的基因组DNA纯度、质量浓度较高,能满足PCR扩增需要。提取DNA所用猪毛囊数量以10根为好。用毛囊提取动物基因组DNA简便、经济,能够在短期内获得群体基因组DNA,且不会对动物造成损伤。     

植物总DNA提取方法的改进

[目的]改进植物总DNA的提取方法.[方法]采用2种研磨方式进行植物DNA提取效果的比较.[结果]2种研磨方式所得DNA质量都较高,可用于后续分子生物学研究;采用研磨缓冲液提取的DNA得率高于液氮研磨.[结论]该方法降低了DNA的提取成本,是一种经济实用的DNA提取方法.     

水热法制备磁性微球及其在植物基因组DNA提取分离中的应用

[目的]建立一种适用于多种植物组织快速提取基因组DNA的方法。[方法]以水热反应制备出Fe3 O4磁性纳米微球,并对其粒径、形貌、磁学性质等进行表征分析,并以此作为核酸提取载体,对多种新疆特色经济作物和植物的叶片、根、茎、籽粒等组织进行DNA的提取分离,并优化分离纯化过程的各环节。[结果]通过OD260紫外吸收值的检测、琼脂糖凝胶电泳,结果显示,用该方法纯化得到的植物基因组DNA纯度高、完整性好,能够满足下游分子生物学操作对基因组DNA质量的要求。[结论]建立了一种简便、快速、普适的从多种植物组织中获得高产量和高纯度的基因组DNA,为全自动化、规模化提取DNA提供了理论和实践基础。     

烟叶基因组DNA提取方法研究

为探索适宜烟草叶片DNA提取的方法,对提取植物DNA的CTAB法和SDS法进行了优化,主要是在提取液的种类和浓度上做改进.以烟草叶片为材料,采用4种方法从烟草叶片中提取基因组DNA.结果发现,采用1%CTAB法可从烟草叶片中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23 kb,以此方法提取的DNA为模板进行随机引物的PCR扩增,可获得清晰的RAPD条带,该研究初步建立了适合烟草叶片的RAPD技术体系.     

景天属植物叶绿体DNA与核DNA分步提取方法研究

[目的]研究景天属植物叶绿体DNA与核DNA分步提取方法.[方法]以景天属植物佛甲草、八宝景天、华北景天、费菜和垂盆草为研究材料,进行叶绿体DNA和核DNA的分步提取,通过琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增进行检测.[结果]改进后的方法提取的核DNA和叶绿体DNA的质量好,纯度高.以叶绿体DNA和核DNA为模板进行PCR扩增均得到理想的条带,扩增率为100％,重复性好.[结论]该研究为叶绿素DNA和核DNA的提取提供了新的思路.     

一种少量提取植物组织DNA的快速方法

为了从植物组织中快速提取核酸,从多种DNA提取方法中遴选出2种基本方法。通过优化基本方法的操作步骤、试剂用量与作用时间,建立了一种改良的DNA快速提取方法。在此方法中,用氯仿代替液氮或提取液进行植物组织研磨,之后加入提取液抽提DNA,并用氯仿-异戊醇反复抽提,可显著降低蛋白质含量;通过应用RNA酶可获得纯度较高的DNA。该方法的特点是在室温下即可进行简便操作,快速(提取核酸的过程仅需30min),污染器皿少,实用性强,提取物产量高,纯度好。