3种苦马豆素人工抗原的合成及其免疫原性研究

比较了3种苦马豆素(Swainsonine,SW)人工抗原对小鼠的免疫原性,筛选出最佳的蛋白载体,为制备疯草毒素疫苗奠定基础。活性酯法制备SW-OVA、SW-BSA、SW-HSA 3种SW人工抗原,冷冻干燥后,紫外分光光度法测定偶联率。将56只昆系小白鼠随机分为SW-OVA大剂量组(A组)、SW-OVA小剂量组(B组)、SW-BSA大剂量组(C组)、SW-BSA小剂量组(D组)、SW-HSA大剂量组(E组)、SW-HSA小剂量组(F组)和空白对照组(G组),每组8只。A~F组分别接种3种SW人工抗原,首次免疫抗原的大、小剂量分别为50μg/只和100μg/只,第15天进行第2次免疫,抗原量均为第1次免疫抗原量的1.5倍,第29天进行第3次免疫,抗原量均为第2次免疫抗原量的1.5倍,G组对照,注射等量生理盐水。第28天开始检测血清中SW抗体效价。紫外光谱测定结果显示,本试验制备的SW-OVA、SW-BSA、SW-HSA 3种SW人工抗原偶联率分别为13、10和19。ELISA测定结果显示,A和B组的SW抗体效价一直保持很高的水平,A和B组小鼠血清的SW抗体效价于第98天分别到达最高峰13(log2)和12(log2);C~F组的SW抗体效价较低。结果证实,SW-OVA作为理想的免疫原,能够刺激小鼠的免疫应答,诱导产生很高的SW抗体,在防治动物疯草中毒方面具有理想的应用前景。     

绵羊棘球蚴病免疫研究

用棘球蚴原头节可溶性抗原和囊液上清抗原与福氏完全佐剂乳化后两次免疫绵羊，第二次免疫后１５天攻卵１０００枚，攻卵后８个月剖检观察试验羊父巍ⅱ肺棘球蚴，结果原头节可溶性抗原有较好的免疫原性，免疫保护率达８６．１３％，囊液上清抗原保护率为７２．２７％。试验羊免疫后的血清抗体滴度与免疫保护率存在正相关关系，感染棘球蚴的绵羊免疫应答迟缓，抗体滴度较低。     

苦马豆素-BSA对家兔的免疫原性研究

用完全福氏佐剂对 14只家兔进行基础免疫 10 d后 ,将家兔随机分成 2组 ,每组 7只 ,1组为苦马豆素 - BSA免疫组 ,另 1组为对照。首免时免疫组每只兔四足掌共注射 0 .8m L,两侧大腿内侧肌肉各注射 0 .3m L,两侧颈部皮下各注射 0 .3m L,免疫总剂量为 2 m L/只 ,抗原含量 2 m g/ m L。 5周后第 1次加强免疫 ,免疫组每只兔两侧大腿内侧肌肉各注射 0 .5 m L,背部皮下 4点注射 ,每点 0 .2 5 m L,免疫总剂量为 2 m L/只 ,抗原含量 3mg/ m L。 1周后试血。 10 d后第 2次加强免疫 ,免疫途径与第 1次加强免疫相同 ,免疫总剂量为 2 m L/只 ,抗原含量 6 mg/ m L。1周后试血。结果表明 ,苦马豆素 - BSA第 1次加强免疫 1周后 ,1～ 7号兔都产生了抗体 ,间接血凝试验测定的抗体滴度分别为 2 1 ,2 1 ,2 2 ,2 1 ,2 1 ,2 2和 2 2 ,间接 EL ISA试验测定的抗体滴度分别为 2 2 ,2 2 ,2 3,2 2 ,2 2 ,2 3和 2 3。第 2次加强免疫 1周后试血 ,1～ 7号兔抗体滴度都明显升高 ,间接血凝试验测定的抗体滴度分别为 2 6 ,2 6 ,2 8,2 7,2 7,2 8和 2 8,间接 EL ISA试验测定的抗体滴度分别为 2 7,2 7,2 9,2 8,2 8,2 9和 2 9。     

猪免疫旋毛虫抗原和感染后的抗体应答

为了明确猪在免疫旋毛虫抗原和感染旋毛虫肌幼虫后的抗体应答反应,应用 ELISA 法,肌幼虫凝胶层析纯化抗原、新生幼虫和成虫可溶性抗原,对用肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫 ES 抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES 抗原、灭活新生幼虫抗原制备的免疫原免疫后猪血清抗体以及攻击感染后的猪血清抗体进行了检测。用肌幼虫纯化抗原检测时,感染猪在感染后7d 抗体即出现变化,第14～21d 时上升较快,第28d 达最高值,抗体可持续6个月以上;各免疫组在第1次免疫后抗体滴度有不同程度升高,第2次免疫后上升较快,其中肌幼虫可溶性抗原及其 ES 抗原免疫组抗体应答较其它几种抗原免疫组强。用成虫可溶性抗原检     

猪瘟病毒结构蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及评价

通过研究猪瘟(CSF)疫苗免疫猪抗结构蛋白E2、E0和C抗体的产生规律,为临床制定合理的CSF疫苗免疫程序提供参考。利用间接ELISA方法检测CSF疫苗免疫猪过程中,抗E2抗原血清抗体的产生特征;分别以重组猪瘟病毒(CSFV)结构蛋白E0和C为抗原,建立检测血清抗体的间接ELISA方法,评价其敏感性和特异性,并检测疫苗免疫过程中抗E0和C蛋白抗体的消长规律。结果显示:CSFV-E0和CSFV-C间接ELISA抗体检测方法的抗原最佳包被质量浓度分别为2.09和1.59μg/mL,待检血清样本最适稀释度分别为1∶60和1∶80,酶标二抗稀释度分别为1∶100和1∶350,2种ELISA方法与常见猪病原的阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性。CSF疫苗免疫后第7天即可检测到抗E2、E0和C蛋白的抗体,其中抗E2和E0的抗体在免疫后第21天达到最高水平,E2抗体滴度先上升后下降,E0抗体在免疫后第21天开始下降并最终趋于稳定;C蛋白抗体在免疫后第7天出现,随后开始下降,在第28天转为阴性。结果表明,利用重组抗原建立的CSFV血清抗体ELISA检测方法,可以用于评价CSF疫苗免疫后血清中针对3种结构蛋白的抗体消长特点,从而为临床猪瘟疫苗免疫程序的制定提供参考。     

苦马豆素-HSA对小鼠免疫原性研究

【目的】研究苦马豆素-HSA(SW-HSA)对小鼠的免疫原性,为构建SW噬菌体单链抗体库奠定基础。【方法】将12只健康Balb/c小鼠随机分为小剂量免疫组(A组)、大剂量免疫组(B组)和对照组(C组)3组,每组4只。免疫组用SW-HSA加入佐剂后进行了4次免疫,首免和第2次免疫间隔30 d,抗原剂量相同,分别为A组0.05mg/只,B组0.10 mg/只;第3,4次免疫分别在第50,70天进行,第3次免疫各组抗原量分别是首免的1.5倍,第4次免疫抗原量分别是首免的2.5倍。第3,4次免疫后第10天采血,用间接血凝试验与间接酶联免疫吸附试验检测血清中的SW抗体效价。【结果】第4次免疫后,间接血凝试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达26和25;间接酶联免疫吸附试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达29和28。【结论】用SW-HSA免疫Balb/c小鼠,可获得高抗体效价的免疫小鼠。     

东北梅花鹿血液某些化学成分的分析

有关梅花鹿血液化学成分的分析,目前尚未见系统资料。本试验测定了东北梅花鹿母鹿、仔鹿(包括初生仔鹿和一月龄仔鹿)、公鹿(包括生茸鹿和非生茸鹿),血清总蛋白、蛋白分类、谷草转氨酶(sGPT)和谷丙转氨酶(sGOT)、全血非蛋白氮(NPN)、血糖、血清总脂、CO_2结合力、Ca、P、Mg、K、Na等13项生化指标,并通过均数差异显著性检验进行了比较。其中血清总蛋白和SGOT的含量是公鹿>母鹿>1月龄仔鹿>初生仔鹿;γ球蛋白、NPN、血清总脂的含量是公鹿>母鹿>仔鹿。其差异均为显著或极显著,数据表明梅花鹿血液上述生化指标是随年龄增长而增加,公鹿高于母鹿说明公鹿基础代谢较母鹿、仔鹿旺盛。 生茸鹿和非生茸鹿相比,血液总蛋白和sGOT的均数差异极显著,生茸鹿高于非生茸;鹿,表明生茸鹿体内蛋白质合成多、代谢旺盛。血钙生茸鹿又显著低于非生茸鹿。因此,在鹿生茸期适当补充蛋白质和含Ca、P多的矿物质饲料是提高鹿茸生产所必需的。     

创伤弧菌FJ03-X2胞外产物对欧洲鳗鲡的致病性和免疫原性分析

以70%饱和硫酸铵盐析法制备鳗源创伤弧菌生物1型高致病菌株FJ03-X2的胞外产物(ECPs),攻毒试验表明,该ECPs对鳗鲡无致病力;SDS-PAGE分析表明,该ECPs由约36 ku为主的系列蛋白条带组成。制备ECPs的免疫刺激复合物(ISCOMs),以20μg/尾的剂量腹腔注射免疫规格为15~20 g/尾的欧洲鳗鲡,ELISA分析表明,21 d和28 d时的血清抗体效价约为1∶1 280,免疫印记显示,ECPs中分子量为36 ku以上的蛋白成份可被免疫欧洲鳗鲡血清所识别,是构成ECPs的主要免疫原;免疫保护试验表明,免疫欧洲鳗鲡显示出较高的免疫保护力。试验结果也显示出,单纯以ECPs等剂量腹腔注射免疫欧洲鳗鲡,不能激发欧洲鳗鲡产生较高滴度的血清抗体,免疫欧洲鳗鲡也未能产生有效的保护性免疫应答。     

生长抑素耗竭剂CS57对生茸后期梅花鹿血清IGF-1浓度和再生茸生长的影响

9只雄性梅花鹿随机分为3组，每组3只。第1组在生茸后期用抗雄性激素CAZ处理后，每周口服1次生长抑素耗竭剂GS57，共处理4次；第2组在生茸后期只接受CAZ处理，未进行Cs57处理；第3组未进行任何处理，为对照组。结果：生茸后期（7月下旬-8月下旬），第1、2组血清睾酮水平均显著低于第3组；第1组血清IGF-1水平显著高于其处理前水平和第2、3组（P〈0．05）；第1、2组的再生茸长度和重量均显著大于第3组（P〈0．01），但第1、2组间差异不显著（P〉0．05）。表明在生茸后期，通过增加血清睾酮水平已经受到抑制的雄性梅花鹿血液IGF-1水平未能进一步起到促进再生茸生长的作用。     

4种偶联率的苦马豆素-HSA合成及其对小鼠免疫原性研究

研究不同偶联率的SW-HSA对小鼠免疫原性的影响,为获得理想的SW人工抗原奠定基础。首先将SW与活性酯在70℃条件下反应制备季铵盐,然后将季铵盐与HSA冰浴搅拌反应12 h,通过调节季铵盐与HSA的摩尔比制备SW-HSA,透析并冷冻干燥,采用紫外分光光度法测定SW-HSA偶联率。将20只昆系小白鼠随机分为A、B、C、D和E组,每组4只。用4种不同偶联率的SW-HSA对前4组小鼠进行免疫,首次免疫抗原量为0.050 mg/只,第30天进行第2次免疫,抗原量与首免相同,以后每隔20 d进行1次,抗原量均为前一次免疫所用抗原量的1.5倍,E组为对照,注射等量生理盐水。从第3次免疫后ELISA检测血清中抗SW抗体效价。紫外光谱测定结果显示,合成的SW-HSA偶联率分别为18.6、12.5、13.5和32.6。ELISA测定结果显示,从第3次免疫后,A、B、C、D组试验小鼠血清的抗SW抗体效价均呈上升趋势,在第5次免疫后,测得其抗SW抗体效价分别为28、29、29、29,达到最高峰。其中D组的抗SW抗体效价在第4次免疫后首先达到29,并在第5次免疫后维持在相同水平。各组试验小鼠血清的抗SW抗体效价于第6次免疫时开始逐渐下降。试验结果证实,不同偶联率的SW-HSA均可诱导小鼠产生抗体,较大偶联率的SW-HSA可以更好地提高抗SW抗体水平。     

高效液相色谱法测定不同品种北五味子藤茎中五味子甲素与五味子乙素含量

采用HPLC法同时测定不同品种北五味子藤茎中五味子甲素和五味子乙素含量。色谱柱Waters C18柱（4．6mm×150mm,4μm）,流动相甲醇：水（70：30）,流速1．0mL／min,检测波长254nm。结果表明,五味子甲素在0．18-3．60μg（r=0．9999）、五味子乙素在0．20～4．0μg（r=0．9999）线性关系良好,平均同收率分别为99．72％、102．72％,RSD均小于6．5％。该方法简便、准确、专属性强,适合于五味子藤茎中五味子甲素和五味子乙素含量的测定,不同品种成分均存在一定的差别。     

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗（HB株）母源抗体的消长规律

【目的】评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体的效力,制定疫苗的最小免疫日龄。【方法】随机采集鸭坦布苏病毒病灭活疫苗（HB株）二免后135日樱桃谷种鸭的种蛋孵化,随机取5、7、10和15日龄免疫种鸭后裔雏鸭10只和相对应日龄非免疫种鸭后裔雏鸭5只,采血,分离血清,测定母源抗体,并以0.1mL/羽（含100DID₅₀）的剂量经腿部肌肉攻毒。观察雏鸭攻毒后的临床表现（采食量、粪便、精神和死亡情况）,观察至攻毒后10d。攻毒后2d经颈静脉采血,分离血清进行病毒分离。每份血清接种5枚6日龄SPF鸡胚,0.1mL/枚,37℃孵化,24h以内死亡鸡胚视为非特异死亡,孵化至168h。只要有1枚及以上鸡胚死亡则判该鸭感染。计算母源抗体雏鸭组的攻毒保护率和无母源抗体组的发病率。攻毒后5d,分别称量雏鸭的体重,计算平均日增重。对成对样本进行T检验,分析母源抗体对雏鸭增重的影响。通过试验鸭中和抗体、增重变化和病毒分离的方法评价母源抗体的效力。【结果】（1）1日龄雏鸭的母源抗体阳性率最高,1、5、7、10和15日龄雏鸭的母源抗体阳性率分别为56.1%（37/66）、40%（4/10）、50%（5/10）、30%（3/10）和0%（0/10）,5-7日龄抗体阳性率处于平台期,15日龄时母源抗体降低至全阴性;（2）攻毒后对照鸭表现精神沉郁（20/20）、仰翻和侧翻等神经症状（6/20）及死亡（2/20）,有母源抗体的雏鸭临床症状明显轻于对照组。（3）5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重115.5、142.8、177.8和162.2g。5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重54.5、91.0、165.0和118.8g。（4）5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭的攻毒保护率分别为50%（5/10）、60%（6/10）、20%（2/10）和0%（0/10）; 5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭的发病率均为100%。（5）5和7日龄雏鸭平均增重和攻毒保护率最高,分别为50%（5/10）和60%（6/10）,10和15日龄雏鸭的母源抗体尽管低（20%和0%）或阴性,仍然有明显的保护作用。【结论】（1）鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体能够保护10日龄内雏鸭;（2）疫苗首次免疫的时间以7-10日龄为最佳。     

雏鸡经不同途径接种烟曲霉菌灭活苗的免疫应答

3组雏鸡分别于 1日龄和 1 0日龄采用滴鼻 滴鼻、滴鼻 肌注和肌注 肌注程序 2次接种烟曲霉菌丝灭活苗或福氏完全佐剂灭活苗。二免后第 1 1天采血检测各组免疫鸡血清抗体水平 ;第 1 2天采用相同剂量 ( 5× 1 0 9孢子 /只 )烟曲霉菌孢子攻毒感染 ,测定各组雏鸡免疫保护率、生长发育及肺脏与大脑烟曲霉菌分离率。结果表明 ,各免疫组雏鸡的血清抗体水平、免疫保护率、生长发育与霉菌分离率差异不明显 ,血清抗体OD值为 0 .53～ 0 .82 ,免疫保护率为 70 %～ 85% ,比对照鸡平均多增重 33.6 4～ 6 2 .92 g( 36日龄 ) ;存活雏鸡肺脏霉菌分离率 4 1 .2 %～ 57.1 % ,含量 2 .4× 1 0 4～ 4 .3× 1 0 5 孢子 /g,大脑霉菌分离率 2 3.5%～ 35.7% ,含量3.3× 1 0 3 ～ 2 .4× 1 0 4孢子 /g。表明滴鼻接种与肌注免疫一样可以引起血清抗体应答 ,最佳免疫程序为 1日龄和 1 0日龄分别滴鼻接种烟曲霉菌丝灭活苗和肌注烟曲霉菌丝福氏完全佐剂灭活苗     

哈维氏弧菌灭活疫苗在养殖大黄鱼中的应用与评价

将分离自大黄鱼Pseudosciaena crocea的病原菌GYC1108-1,在体积分数为0.5%的福尔马林溶液中灭活24 h,制成灭活全菌苗（细菌含量为6×109cfu/mL）;用该灭活菌苗分别免疫小白鼠和大黄鱼,并检测小白鼠和大黄鱼血清中抗体效价及疫苗对鱼体的免疫保护力。结果表明：小白鼠经注射疫苗后28 d,血清中抗体效价最高达1∶4 000,大黄鱼经注射和浸泡免疫后,血清中最高抗体效价分别为1∶1 280和1∶320,免疫保护率分别为75%和65%;抗GYC1108-1的抗体与不同种属细菌间存在着交叉反应,其分类地位越近,交叉反应也越大;用研制的疫苗开展大黄鱼生产性免疫预防试验,受免疫组鱼存活率有较大提高,分别为85%和86%,而未免疫组鱼存活率仅有70%,表明疫苗可有效防治养殖大黄鱼细菌性病害。     

pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤鼻咽癌肿瘤血管的体内研究

目的探讨pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤肿瘤血管对鼻咽癌的治疗作用。方法将24只鼻咽癌荷瘤裸鼠随机分成3组,分别于0、1、7d向瘤体内注入重组腺病毒液0.1mL。第2次注射病毒液时,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ分别腹腔注射pAdKDR-tk/PBS、pAdKDR-tk/GCV和pAdCMV-tk/GCV100mg/kg,每天1次,连续10d。观察治疗前后肿瘤体积、病理及微血管密度变化。结果组Ⅲ裸鼠移植肿瘤缩小速度最快,组Ⅱ次之,而组Ⅰ增大。病理检查显示组Ⅱ、Ⅲ肿瘤出现不同程度坏死,坏死灶中心位于病毒液注射部位。Ⅷ因子相关抗原免疫组化检查发现肿瘤血管密度组Ⅱ最低,组Ⅰ最高,两组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 pAdKDR-tk自杀基因系统对鼻咽癌肿瘤血管有良好的靶向杀伤效应,从而达到破坏肿瘤细胞的作用。     

黄海希瓦氏菌单抗介导间接ELISA快速检测技术的建立

应用农业部海洋水产增养殖学重点实验室制备的特异性抗黄海希瓦氏菌Shewanella smarisflavi AP629单克隆抗体3D9作为一抗,以碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗鼠Ig作为酶标二抗,建立了仿刺参Apostichopusjaponicus＂化皮病＂病原菌——黄海希瓦氏菌AP629的间接ELISA快速检测方法,并进行了条件优化。结果表明：抗原的最佳包被浓度为107个/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶32,病原菌的检测灵敏度为5×105个/mL。该方法特异性强,与希瓦氏菌属其它种类、弧菌和气单胞菌等均无交叉反应。该方法的建立有助于快速准确地诊断由黄海希瓦氏菌AP629引起的仿刺参疾病。     

70％安泰生可湿性粉剂对水稻纹枯病、胡麻叶斑病田间防治效果试验

进行70％安泰生可湿性粉剂对水稻纹枯病、胡麻叶斑病的田间防治效果及对水稻秧苗生长的影响试验。结果表明,在水稻分蘖封行后1：270％安泰生可湿性粉剂75-100g对水60kg喷雾,药后20d对水稻纹枯病、胡麻叶斑病的防治效果均达100％,30d后的防治效果也达90％以上,且对水稻秧苗生长有明显的促进作用,其中以100g对水60kg剂量喷雾处理的防治效果最好、持效期最长、对水稻的促生效果最明显。     

Immune Responses in Mice Injected with gD Plasmid DNA of Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus

The gene encoding gD of isolate Luojing of infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV)was amplified,sequenced, and cloned into plasmid pcDNA3.1, resulting in a recombinant pcDNA-gD. Groups of BALB/c mice were injected with 100μg of plasmid only or together with liposome. After immunization, serum samples were collected from mice every 2 weeks for a 10-week period and tested for protein-specific antibody with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). It was showed that the plasmid encoding IBRV glycopretein D developed gene-specific antibody. This report indicates the potential of DNA injection as a method of vaccination.     

转Bt基因植物中杀虫蛋白的酶联免疫检测技术研究Ⅱ.Bt杀虫晶体蛋白抗体的制备

用碳酸钠裂解液(50mmol/LNa2CO3,50mmol/LEDTA,pH10)从BacillusthuringiensisHD-1的孢晶混合物中分离提取杀虫蛋白的基础上,进一步用聚丙烯酰胺凝胶制备电泳技术纯化杀虫蛋白,获得了高纯度的杀虫蛋白作为抗原,用于免疫家兔制备抗体。比较了不同抗原注射剂量的免疫效应和免疫过程中(不同注射时间)抗体生成量的变化。结果表明,供试的二种抗原注射剂量对抗体的效价无明显影响,随着免疫次数的增加抗体效价不断上升,最终获得了用琼脂双扩散测定效价为1/120的抗血清。Bt杀虫蛋白的免疫原性低。抗血清中的抗体免疫球蛋白(Ig),首先经硫酸铵分级沉淀粗提,再用DEAE-52纤维素柱层析提取纯化,获得了高纯度的IgG,为抗体的酶标记和ELISA检测杀虫蛋白等研究提供了高特异性的Bt抗体。研究的结果为Bt菌HD-1杀虫蛋白抗体的制备提供了依据。     

广西部分规模化猪场猪瘟抗体监测及免疫效果分析

为掌握规模化猪场猪群血清猪瘟抗体水平的消长情况,采用阻断ELISA检测方法对广西12个大中型规模化猪场的639份血清样品进行猪瘟抗体检测。结果表明,所测样品中抗体阳性率为90.14%,阴性率为6.26%,可疑率为3.60%,抗体阻断平均值为70.54,抗体差异度为19.93%;其中母猪的阳性率最高,达93.41%,商品猪阳性率最低,仅为86.50%。文章还分析了免疫失败的原因,并结合实际情况,提出了淘汰免疫缺陷种猪、准确注射、加强疫苗运输及保存冷链建设、购买优质疫苗、加强疫苗接种与免疫监测的有机结合等建议,以期为规模化猪场在选择疫苗及制定免疫程序时提供参考。