食品总铬质量浓度icELISA试剂盒的研制及初步应用

为研制食品中总铬质量浓度检测间接竞争ELISA(icELISA)试剂盒(Cr-Kit)。利用蛋白质连接技术合成免疫原Cr~(3+)-iEDTA-BSA,紫外扫描(UV)和电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)进行鉴定;用Cr~(3+)-iEDTA-BSA免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术筛选抗Cr~(3+)-EDTA mAb细胞株,体内诱生腹水法制备Cr~(3+)-EDTA mAb,并对其特性进行分析;应用Cr~(3+)-EDTA mAb研制Cr-Kit,测定其性能并进行初步应用。结果表明,免疫原制备成功,Cr~(3+)-iEDTA-BSA中Cr~(3+)和BSA的质量浓度分别为140.8mg/L和5.81g/L;筛选出2A3C11、2A3D9、2A11G5共3株杂交瘤细胞株,其中2A11G5最好,经6次传代分泌抗体稳定,亲和常数(Ka)为2.69×109 L/mol,与其他重金属离子无交叉反应;Cr-Kit标准曲线的线性范围为1.0~264μg/L,检测限为1.0μg/L,IC50为8.37μg/L,河水样、大米样、面粉样和猪肉样的平均加标回收率分别为101.7%、96.47%、95.8%和84.3%,Cr-Kit与国标(GB5009.123-2014)石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS)的符合率为100%。本研究成功研制了Cr-Kit,可满足食品总铬残留的检测要求。     

抗重金属Cd~(2+)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定

旨在制备抗Cd2+高效价、敏感、特异的单克隆抗体(Cd2+mAb)。用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)鳌合Cd2+合成Cd-ITCBE半抗原、异硫氰酯法制备免疫抗原Cd-ITCBE-BSA和包被抗原CdITCBE-OVA,紫外分光光度法(UV)、SDS-PAGE和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)进行鉴定;用Cd-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠细胞融合技术建立抗Cd2+的单克隆抗体(Cd2+mAb)杂交瘤细胞株、体内诱生腹水法制备Cd2+mAb并鉴定其免疫学特性。结果表明,人工抗原偶联成功,Cd-ITCBE-BSA和CdITCBE-OVA中载体蛋白与Cd2+的质量浓度分别为7.1g/L、191.7mg/L和6.7g/L、130.1mg/L;筛选出1A3、2B7、2E10、4F3 4株杂交瘤细胞,其中2E10株间接ELISA效价细胞培养上清为1∶(1.28×103),腹水为1∶(5.12×105),同种型为IgG1/κ,亲和常数(Ka)为7.58×108 L/moL,对Cd2+的半数抑制质量浓度(IC50)为16.3μg/L,与Hg2+的交叉反应率(CR%)为18.6%,与其他化合物无交叉反应。     

抗2,4 D单克隆抗体制备及免疫学特性鉴定

制备抗2,4-D高敏感性和高特异性的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。采用EDC法将BSA、OVA和2,4-D偶联制成免疫原和包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后,用免疫原免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫,用间接ELISA和阻断ELISA选择高效价、高敏感性的小鼠进行细胞融合;应用杂交瘤细胞技术建立分泌抗2,4-D单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生法制备腹水,并对其效价、敏感性、亚型和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,融合后筛选出3株特异性高的杂交瘤细胞1F11、2A12、2G12,单抗亚型均为IgG1型,效价为1∶2 560～1∶5 120,对2,4-D的IC50分别为0.801、1.332、1.564μg/L,亲和常数(Ka)分别为2.174×1011、3.21×1010和4.36×1010 L/mg,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.03%。说明成功获得高敏感性、高亲和力和高特异性的2,4-D mAb,为2,4-二氯苯氧乙酸残留免疫学快速检测方法的建立奠定基础。     

磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其免疫学特性研究

【目的】制备磺胺嘧啶(Sulfadiazine,SD)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测。【方法】用重氮化法将SD偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫原BSA-SD和包被原OVA-SD,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE法进行鉴定。用BSA-SD免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA法筛选细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立SD mAb细胞株,用体内诱生腹水法制备SD mAb,对SDmAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】BSA-SD人工抗原制备成功,SD与BSA的分子结合比约为10.3∶1;筛选出6B5-E4、6B5-E9、3A5-B4和2H8-G5 4株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1∶810、1∶256、1∶512、1∶512,腹水效价分别为1∶(8.6×106)、1∶(2.5×106)、1∶(5×106)和1∶(5×106)。6B5-E4株对SD的半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L。SD mAb与磺胺一甲基嘧啶交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药物无交叉反应性。【结论】获得了抗SD效价高、敏感、特异的mAb,可用于SD残留的快速检测。     

恩诺沙星单克隆抗体的制备及ciELISA试剂盒的研制

【目的】研制快速、灵敏、特异的恩诺沙星残留检测ciELISA试剂盒(ENR-Kit),为动物源性食品中恩诺沙星(ENR)残留的快速免疫学检测奠定基础。【方法】通过细胞融合技术制备恩诺沙星单克隆抗体(ENR mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法生产ENR单抗,应用ENR mAb研制ENR残留间接竞争ELISA(ciELISA)快速检测试剂盒,并对其灵敏度、半数抑制浓度(IC50)、特异性、准确度和基质效应性进行检测。【结果】筛选出2株杂交瘤细胞,其单抗亚类均为IgG1亚型。4G1-B3杂交瘤细胞株的ENR mAb间接ELISA效价为1∶1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/moL。ENR-Kit的线性检测范围为0.05~48.75μg/L,灵敏度0.05μg/L,半数抑制浓度(IC50)为1.31μg/L,与环丙沙星的交叉反应率(CR)为0.02%,与其他化合物的交叉反应率(CR)均<0.01%。ENR-Kit对牛奶样、鱼肉样和鸡肉样中ENR的平均添加回收率分别为96.49%,86.95%和84.13%,平均变异系数均<10%,不同基质对ENR-Kit检测结果影响小。【结论】研制的ENR-Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合ENR残留快速检测的推广应用。     

环丙沙星单克隆抗体的制备

【目的】制备环丙沙星(Crprofloxacin,CPFX)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行鉴定,为畜产品CPFX残留的快速检测提供技术支持。【方法】采用碳二亚胺法(EDC),将载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA)分别与CPFX偶联合成免疫抗原CPFX-BSA和包被抗原CPFX-OVA,经紫外(UV)扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术筛选分泌CPFX mAb的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备CPFX mAb,并对其染色体核型、效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】UV和SDS-PAGE鉴定结果表明,人工抗原偶联成功;免疫的5只小鼠血清抗体效价均达到了1∶105左右,其中4号小鼠血清CPFX抑制效价较高且IC50最低(17.21μg/L),融合后筛选出1株敏感特异的杂交瘤细胞,命名为3D2。3D2细胞培养上清效价为1∶(1.28×103),腹水效价为1∶(1.6×105)。CPFX mAb对CPFX的IC50为9.95μg/L,对恩诺沙星的交叉反应率为128.39%,与其他同系的喹诺酮类抗生素的交叉反应率很低。【结论】获得了高效价、敏感、特异的抗CPFX mAb,为CPFX残留的快速检测奠定了技术基础。     

抗重金属铜离子单克隆抗体的制备及其免疫学特性

为制备抗Cu~(2+)的高效价、敏感、特异的单克隆抗体,采用已合成的铜离子人工抗原Cu~(2+)-ITCBEBSA免疫Balb/C小鼠,通过间接ELISA和阻断ELISA筛选备用小鼠,用细胞融合技术制备抗Cu~(2+)的单克隆抗体。结果筛选到4株特异性强、灵敏度高的杂交瘤细胞,其中杂交瘤细胞株2B8培养上清中的抗体效价采用间接ELISA检测为1∶(1.28×10~3),用其制备的腹水中抗体效价为1∶(5.12×10~5),该单克隆抗体为IgG1/κ型,对Cu~(2+)-EDTA的半数抑制质量浓度(IC_(50))为29.78μg/L,与Zn~(2+)-EDTA的交叉反应率(CR)为26.0%,与其他金属螯合物没有交叉反应,表明获得特异性较好的抗Cu~(2+)的单克隆抗体,可用于铜离子的免疫学检测。     

金刚烷胺单克隆抗体的制备和鉴定

为制备金刚烷胺(AMD)的单克隆抗体(mAb),改造AMD的半抗原,采用EDC/NHS法合成人工免疫原AMD-BSA和检测抗原AMD-OVA,经紫外扫描和凝胶电泳进行鉴定,AMD与载体蛋白[牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)]成功偶联;用被免疫原(AMD-BSA)免疫BALBC/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,获得AMD杂交瘤细胞株,腹腔注射小鼠后,得到抗AMD的mAb。小鼠免疫后的多抗血清的效价均在6.4×10~3以上,所制得的杂交瘤细胞上清液的效价为3.6×10~2～1.0×10~3,2D5细胞株的腹水效价为5.12×10~5,对AMD的IC_(50)值为1.02μg/L,除与金刚乙胺的交叉反应率为9.82%,与其他结构类似物无交叉反应性。表明获得了高价、敏感和特异的抗AMD的单克隆抗体,为进一步的免疫学快速检测提供了技术支持。     

重金属钼离子单抗的制备及其免疫学特性研究

为了检测水质、土壤、食品中的重金属钼离子的残留,故制备用于钼离子检测用的单克隆抗体。采用已合成的钼离子人工抗原Mo6+-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选出备用小鼠,用细胞融合技术筛选制作单克隆抗体。结果表明:筛选出4株特异性强、敏感度高的杂交瘤细胞,其中4B3杂交瘤细胞株间接ELISA检测培养上清抗体效价为1∶(3.6×102);体内诱生法制备腹水效价为1∶(5.12×105);杂交瘤核型鉴定结果显示4B3杂交瘤细胞株染色体数目平均为99.4。4B3杂交瘤细胞株用间接竞争ELISA结果显示,IC50值为23.4μg/L,与Cr3+-EDTA的交叉反应率为81.8%,与其他金属螯合物无交叉反应。说明Mo6+-EDTA-mAb可用于Mo6+污染检测的免疫学试验。     

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其免疫学鉴定

采用混合酸酐法合成SAL-BSA和SAL-OVA,用紫外法和凝胶电泳法鉴定,使用细胞融合技术建立沙丁胺醇杂交瘤细胞株,通过体内诱生腹水法大量制备沙丁胺醇高亲和力单克隆抗体。结果显示,所免疫的小鼠抗体效价均达到10-4;融合后筛选出的3株杂交瘤细胞单抗亚型均为IgG1,细胞培养上清间接ELISA效价为1∶2.5×102~1∶1.02×103,用4D3E7细胞株制作的腹水效价为1∶5.12×105,对SAL的IC50为1.35μg/L,除与瘦肉精有10.8%交叉外,与其他β2-受体激动剂的交叉反应均小于0.2%。且具有较好的特异性。试验获得了高效价、敏感、特异的SAL mAb,为动物性食品中SAL残留的免疫学检测奠定了基础。     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例

为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征，采用问卷调查的形式，就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示，生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚，有着极大的开发空间，指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主，开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用，尤其是要注重媒体的宣传．     

山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定

采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ...     

《河北农业大学学报》创刊年代考

清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。     

水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的纯化技术

应用萄聚糖凝胶柱层析对水牛梭形住肉孢子虫包囊包溶性抗原进行了纯化。结果表明：纯化水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的最适条件为：选用萄聚糖凝胶Ｇ—１００柱层析系统；洗脱液为０３ＭＰＢＳ（ｐＨ７２），床体积为１０ｃｍ×１６５ｃｍ，上样体积为５００ＨＬ；流速为１２ｍＬ／ｈ。纯化抗原可使琼脂凝胶双扩散试验的阳性检出率提高３０％。     

切花菊耐热性鉴定方法研究

以8个切花菊品种为材料,通过对离体叶片进行50℃高温胁迫后,采用电导法、电阻抗图谱法测定电导率、电阻,并对大田栽培植株进行田间高温胁迫试验,比较品种间的耐热性。结果表明:电导法测得的50℃直接相对电导率、修正相对电导率和电阻抗图谱法测得的胞外电阻在品种间有明显差异,但与田间高温胁迫法测定的热害指数不完全一致。电导法和电阻抗图谱法都可以作为测定切花菊耐热性的方法,但需要结合田间耐热性观察。     

黑豆不同部分馏油的体外抗氧化性比较

[目的]通过体外抗氧化体系比较黑豆不同部分馏油抗氧化性活性。[方法]通过正交试验优化索氏提取黑豆馏油的最佳工艺,提取黑豆不同部分馏油;研究黑豆不同部分馏油对羟基自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)的清除能力。[结果]在样品浓度为1.0 mg/mL时,黑豆不同部分馏油对·OH的清除率分别为全豆馏油83.9%、豆黄(黑豆去皮部分)馏油64.8%、豆皮馏油17.3%,对DPPH·的清除率分别为全豆馏油41.3%、豆黄馏油33.2%、豆皮馏油77.9%。[结论]黑豆不同部分馏油均具有较好的抗氧化性,是良好的天然抗氧化剂。黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油,对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。     

啤特果多糖提取工艺的研究

［目的］寻找开发啤特果产业的新途径,提高其附加值。［方法］采用水提醇沉法提取啤特果中的多糖,通过单因素试验和正交试验,以多糖的提取率为评价指标,对影响啤特果多糖提取工艺的因素进行研究。［结果］确定了提取啤特果多糖的最佳工艺参数为温度95℃,料液比1∶2,乙醇浓度67%。在该工艺条件下,啤特果多糖的得率为1.05%。［结论］该研究为开发利用啤特果提供理论依据。     

GEF7基因过表达拟南芥植株幼苗表型分析

利用已构建的过表达拟南芥(Arabidopsis)GEF7基因植株,在光照培养箱中进行培养,并与野生型植株进行对比分析,对GEF7基因过表达植株的幼苗表型进行了观察分析。结果表明,GEF7基因过表达植株幼苗的根长比野生型对照明显增加;其子叶形态、数目和幼苗形态等方面均有异常表型,表明GEF7基因的功能与根的发育有关,并参与调控植物的发育过程。     

干旱对合丰42不同部位叶片发育的影响

在垄作、密植两种栽培方式的条件下,研究干旱对大豆不同部位叶片发育的影响。结果表明：无论垄作还是密植,干旱严重影响大豆叶片不同部位叶绿素含量、叶面积及周长的大小、不同部位叶长、叶宽及比值、叶片形状因子等。影响整个植株的生长发育,进而影响作物产量。