芽孢杆菌的抑菌活性与其产脂肽类抗生素的相关性

【目的】明确55株芽孢杆菌（Bacillus spp.）菌株对3个植物病原真菌（小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. niveum）抑菌活性及与其产生的脂肽类抗生素种类的定性定量关系。【方法】采用平板对峙培养分别测定55株芽孢杆菌活体菌及其脂肽类抗生素粗提物对3个真菌的抑菌活性;根据脂肽类抗生素合成相关基因序列srfA、ituA和fenA对55株芽孢杆菌进行PCR扩增;采用质谱及液相色谱分析55株芽孢杆菌脂肽类抗生素的种类、数量。【结果】55株芽孢杆菌菌株及其脂肽类抗生素粗提物对3个病原真菌均具有一定的抑菌活性,其中16.5%菌株脂肽类粗提物的抑菌活性比活体菌的强,55.8%菌株粗提物的抑菌活性比活体菌的弱,27.7%菌株粗提物的抑菌活性基本没有变化。55株芽孢杆菌基因组PCR扩增结果表明,89.1%菌株含有srfA,87.3%菌株含有ituA,只有56.4%菌株中含有fenA。55株芽孢杆菌粗提物质谱检测结果表明,53株菌株检测到surfactins,48株检测到iturins,只有菌株Bs916（Bacillus subtilis 916）检测到fengycins,粗提物中没有检测到3种抗生素的菌株其抑菌活性较弱或者没有。同时发现,在检测到iturins的48株菌株中,48株均检测到bacillomycin D,2株检测到bacillomycin L,12株检测到bacillomycin F、iturin A或mycosubtilin。对55株芽孢杆菌粗提物的液相色谱检测结果表明,53株菌株检测到surfactins;51株检测到iturins;只有菌株Bs-916检测到fengycins;有2株菌株未检测到上述3种抗生素。根据iturins的色谱峰出峰时间及峰型分为4大类,命名为1、2、3和4型,4种类型的iturins对病原菌的抑菌活性强度顺序为1型＞2型＞3型＞4型。在3株菌株JCC-1、JCC-9和JCC-18中检测到2个未知的脂肽类化合物（命名为Unknowns：Unknown1、2）的质谱峰。【结论】芽孢杆菌脂肽类抗生素是抑制植物病原真菌的主要成分,并具有多样性;iturins结构的变化及其分泌量与抑制植物病原真菌活性有一定的相关性。芽孢杆菌还产生一些未知的脂肽类化合物。     

颉颃细菌GXG-2-2的菌株鉴定及其对植物病原菌的颉颃作用

从枯草中分离筛选获得的颉颃细菌GXG-2-2被鉴定为枯草芽孢杆菌。该菌有很强的分泌胞外蛋白酶的能力。于发酵液中加入60%饱和度的（NH4）2SO4沉淀所得的蛋白粗液对多种植物病原菌有强烈的抑制作用。例如稻瘟病菌（Pyricularia grisea）、小麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）、烟草赤星病菌（Alter-naria alternata）、大白菜软腐病菌（Erwinia carotovora subsp.carotovora）等。     

一株芽孢杆菌的室内抑菌效果

1986年从乌海市土壤中分离到1株细菌,对10种植物病原真菌均有抑制效果。经鉴定属于芽孢杆菌属(Bacillus sp)。室内接种试验表明,对芝麻叶枯病(Alternaria sesami)和黄瓜枯萎病(Fusarium oxysporium f. sp. cucumerinum)均有很好的抗侵染效果。     

芽胞杆菌产生的脂肽类化合物在防治油菜菌核病中的作用

从解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)B3菌株和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)G4菌株中分别提取脂肽类化合物,配制成脂肽类生物农药乳油.平板拮抗活性检测试验表明,脂肽类生物农药乳油B3和G4能显著抑制油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)生长.油菜离体叶片接种试验中,脂肽类生物农药乳油B3和G4能显著抑制核盘菌在油菜叶片上的侵染和扩展.田间试验表明,脂肽类生物农药乳油B3和G4对油菜菌核病具有很好的防治效果,最高防效分别达55.8%和46.3%,并能够促进油菜生长     

芽孢杆菌抑制多种经济作物病原真菌及稳定性研究

78株对水稻稻瘟病具有拮抗作用的芽孢杆菌中,有32株分别对所参试的经济植物病原真菌具有明显的抑菌效果,占参试菌株的41 03%,同时显示,随着抑菌谱的增加,拮抗菌株数量随之下降,在78株芽孢杆菌中,仅有一株99-13菌株对7种经济作物病原真菌(柑桔黑腐病菌、柑桔炭疽病菌、番茄早疫病菌、玉米大斑病菌、油菜菌核病菌、甘薯黑斑病菌和芦荟黑斑病菌)具有显著的抑菌效果,占参试菌株的1 28%。芽孢杆菌之间对不同病原真菌的抑菌效果存在较大差异。99-13发酵液和代谢产物对上述植物病原真菌具有广谱抑菌效果(抑菌效果在56%～82%),其代谢产物具有耐高温和耐酸碱等特点,有待进一步研究和开发利用。     

芦荟不同溶剂提取物对白菜黑斑病菌的抑菌活性研究

用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、苯、石油醚、正己烷8种溶剂对库拉索芦荟的抗菌活性物质进行提取,提取产率随溶剂极性的增强而提高.以白菜黑斑病菌为测试菌,用生长速率法测定芦荟各种溶剂粗提物的抑菌活性,当提取物浓度为10mg/mL时,各种溶剂粗提物均表现一定的抑菌效果,其中以石油醚、正己烷和乙酸乙酯的粗提物抑菌效果最好,分别为71.4 %、71.3 %和62.4 %.从抑菌效果及提取产率两方面考虑,乙酸乙酯为提取芦荟抑菌活性物质的最佳溶剂.通过测定甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4种溶剂1 %～10 %系列浓度对白菜黑斑病菌的抑制作用及甲醇、丙酮、乙酸乙酯3种溶剂对各种芦荟粗提物的溶解性,确立用乙酸乙酯-水(7∶ 3,v/v)溶解各种粗提物进行生物测定,既能较好地溶解各种粗提物,又对测试菌的抑制作用相对较小.试验研究还筛选了2 ‰～1 %吐温20作表面活性剂乳化乙酸乙酯使其与所溶解的粗提物能均匀分布到PDA培养基中,保证了测定结果的准确性与稳定性.通过测定库拉索芦荟等7种芦荟水浸提物的抑菌活性,认为树芦荟、库拉索芦荟的抑菌效果最好.     

无致病性双核丝核菌BNR-1的抑菌作用及温室防病效果

通过平板对峙培养试验和温室防病试验,测定了双核丝核菌BNR-1的抑菌作用及对植物真菌病害的防治效果。结果表明,在PDA培养基上BNR-1对供试7种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对苹果拟茎点霉的抑制作用最强,抑制率为83.9%。温室试验表明,BNR-1对小麦幼苗无致病性,对小麦纹枯病的防治效果达73.7%,较对照药剂井冈霉素提高13.2个百分点,处理间差异极显著(P<0.01)。     

芽孢杆菌抑制多种经济作物病原真菌及稳定性研究*

 78株对水稻稻瘟病具有拮抗作用的芽孢杆菌中,有32株分别对所参试的经济植物病原真菌具有明显的抑菌效果,占参试菌株的41.03%,同时显示,随着抑菌谱的增加,拮抗菌株数量随之下降,在78株芽孢杆菌中,仅有一株99－13菌株对7种经济作物病原真菌（柑桔黑腐病菌、柑桔炭疽病菌、番茄早疫病菌、玉米大斑病菌、油菜菌核病菌、甘薯黑斑病菌和芦荟黑斑病菌）具有显著的抑菌效果,占参试菌株的1.28％。芽孢杆菌之间对不同病原真菌的抑菌效果存在较大差异。99-13发酵液和代谢产物对上述植物病原真菌具有广谱抑菌效果（抑菌效果在56%～82%）,其代谢产物具有耐高温和耐酸碱等特点,有待进一步研究和开发利用。     

褐多孔菌发酵代谢物的抑菌活性初步研究

采用滤纸片法和生长速率法分别研究了褐多孔菌发酵代谢物对7种常见细菌和6种植物病原菌的抑制作用。结果表明,发酵液乙酸乙酯部分对金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌抑制效果显著,最小抑菌浓度分别为2.50 mg/mL和1.25 mg/mL,浓度为0.5 mg/mL时对小麦赤霉病菌抑菌率达到100%,菌丝乙酸乙酯部分对蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌最小抑菌浓度分别为1.25mg/mL和0.625 mg/mL,对白菜黑斑病菌和小麦赤霉病菌抑菌率均高于70%,菌丝及发酵液正丁醇部分对几乎所有病原菌抑制作用都很明显。     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata28经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌（Affernaria alternata （Fries）Keissler）均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8．4mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8％．无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强．     

黄瓜蔓枯病拮抗细菌的分离与筛选

以黄瓜蔓枯菌(Ascochyta citrullina)为指示菌,采用平板稀释法和对峙法对48份土样进行分离筛选得到拮抗细菌53株,发现菌株G8、Sh34拮抗谱宽,对黄瓜蔓枯菌和菌核抑制效果均超过76%,且能分泌几丁质酶。温室接种防病试验结果表明,两菌株发酵液对黄瓜蔓枯病菌防治效果分别达62.5%和51.0%。根据对两菌株形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析,均被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

Effect of Bacillus subtilis and Pseudomonas fluorescens on Growth of Greenhouse Tomato and Rhizosphere Microbial Community

Bacillus subtilis(B. subtilis) and Pseudomonas fluorescens(P. fluorescens) are two of the most important plant growth promoting rhizobacteria(PGPR) in agriculture. An in situ trial was conducted on greenhouse tomato(Lycopersicum esculentum Mill.) to examine the effect of two bacterial strains, Bacillus subtilis(CGMCC 1.3343) and Pseudomonas fluorescens(CGMCC 1.1802), on tomato growth, gray mold disease control, catabolic and genetic microbial features of indigenous rhizosphere bacteria under lownitrogen conditions. A commercial inoculant(ETS) was also tested as a comparison. Both B. subtilis and P. fluorescens promoted growth and biomass of seedlings, while only B. subtilis was effi cient in reducing gray mold incidence in greenhouse tomato. The two bacterial strains could colonization in tomato rhizosphere soil at the end of experiment(10 days after the last inoculation). Different AWCD trends and DGGE patterns were got in different bacterial treatments; however, analyses of microbial diversities showed that indigenous soil microbes did not seem to have signifi cant differences at either the catabolic or genetic level among treatments. ETS, as a commercial microbial agent, promoted plant growth and gave a higher microbial diversity in rhizosphere soil.     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata 28经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌(Alternaria alternata(Fries) Keissler)均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8.4 mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8%.无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata 28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强.     

芽孢杆菌在促进番茄生长和控制青枯病上的比较优势

在离体条件下对47个芽孢杆菌分离物进行了抑制番茄青枯病菌测定,其中12个表现良好的抑菌能力,通过细菌学和Biolog分析将其中5个代表性拮抗菌分别鉴定为枯草芽孢杆菌,解淀粉芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,其中枯草芽孢杆菌菌株的抑菌能力最强,解淀粉芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌株其次.同时在温室条件下测定这5个芽孢杆菌拮抗菌促进番茄生长和诱导番茄对青枯病的抗性效果.用芽孢杆菌处理番茄种子能够有效地控制番茄青枯病,通过测定种子萌发,植株生长高度以及鲜重和干重表明芽孢杆菌的大多数分离物能够促进植物生长,同时这5个芽孢杆菌拮抗菌比对照显著地减少了青枯病的发病率,然而, 促生和病害抑制的效果因不同的菌株而异.其中枯草芽孢杆菌拮抗菌株不仅是良好的促生剂,也是有效的抗性诱导剂,它能减少青枯病80%,充分显示了芽孢杆菌在番茄青枯病治理上的潜在重要性.     

黄鳝肠道益生菌HY-136的鉴定与系统发育分析

对分离自健康黄鳝肠道118株菌进行点种法病原菌拮抗试验,结合产酶能力分析试验结果,得到了对病原菌拮抗作用显著和产酶能力较强的拟选菌株HY-136.通过对该菌株进行形态观察,常规生理生化鉴定和应用API 50 CHB鉴定盒鉴定,结果表明该菌与枯草芽孢杆菌属的形态及生理生化特征相似;进一步利用PCR技术对该菌株16S rRNA序列作测定与分析,序列结果在GenBank中进行Blast同源序列检索,并用Mage4.0软件与芽孢杆菌属的其它菌种进行序列分析比对,结果表明其与已报道的枯草芽孢杆菌序列(登录号为EU346662)具有99.8%的同源性,且二者在所构建的系统发育树上处于同一个分支.确定菌株HY-136为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

金银花尺蠖幼虫粪便乙醇提取物抑菌活性研究

以4种细菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌)和2种真菌(根霉菌、黄曲霉)为供试菌种,采用滤纸片法测定了金银花尺蠖幼虫粪便乙醇提取物的抑菌活性。结果表明,金银花尺蠖幼虫粪便乙醇提取物对4种供试细菌均有一定的抑菌活性,其抑菌活性大小顺序为金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>巨大芽孢杆菌>枯草芽孢杆菌,且抑菌活性随着粪便乙醇提取物浓度的增大而增强。在0.500 g/ml浓度下,粪便乙醇提取物对枯草芽孢杆菌的抑菌活性显著低于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和巨大芽孢杆菌,而后三者之间差异不显著,在其他浓度下粪便乙醇提取物对4种供试细菌的抑菌活性差异均不显著。粪便乙醇提取物对根霉菌和黄曲霉2种真菌无抑菌活性。     

生防菌株LDB1对不同植物病原真菌抑菌谱的比较

以实验室分离得到的枯草芽孢杆菌菌株LDB1为实验材料,通过对该菌株分别进行固体、液体培养条件下的抑菌谱比较研究,以明确该菌株对主要植物病原真菌的抑制效果。结果表明:(1)两种处理方式均对供试的8种植物病原真菌表现出较好的抑制效果;(2)除水稻纹枯病菌和苹果轮纹病菌外,LDB1菌株发酵液对其他6种病原菌的抑制作用皆比其固体状态强,Duncan多重比较分析显示,在α=0.05的水平上,两种处理方式差异显著。     

香蕉枯萎病芽胞杆菌生防菌的筛选及其抑菌特性研究

从我国不同地区采集土样,共分离到300余株芽胞杆菌,通过平板对峙生长法从中筛选到4株对香蕉枯萎病原菌有明显拮抗作用的菌株.经16S rRNA序列分析,将这4株生防芽胞杆菌鉴定为多粘类芽胞杆菌.4株菌的生物学特性基本一致,其主要脂肪酸类型为15:0 ANTEISO,分析发现生防菌对病原菌的抑菌作用与生防菌的脂肪酸类型具有...     

粘帚霉不同菌株发酵液对3种病原真菌的抑制作用

试验测定了8个粘帚霉Gliocladium spp．菌株的发酵液对3种重要土传病原真菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schlecht．、立枯丝核菌Rhizoctonia solani和核盘菌Sclerotima sclerotiorum的抑菌效果。结果表明,HL-1-1、SH-1-1和SS-1-1的抑菌作用最强,抑菌率分别达83．48％、81．65％和78．68％,3个菌株之间差异不显著;SDT-lO-1的抑菌作用最小,抑菌率仅为23．24％。热稳定性测定结果表明：发酵液121℃处理30min,病原菌生长正常,抑菌作用消失;发酵液经60℃处理后供试菌株的抑菌效果明显,但效果明显降低。     

黄花夹竹桃内生细菌抑菌活性的初步研究

从黄花夹竹桃的根、茎、叶中分离出内生细菌13株,以小麦赤霉(Fusarium graminearum)、番茄早疫(Alternaria sclani)、番茄灰霉(Botrytis cinerea)3种常见植物致病真菌以及3种具有代表性的细菌,即金黄色葡萄球菌(Staphyllococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia col-i)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为受试菌,对其进行抑菌活性的测定。结果表明:内生细菌G2、Y1对受试植物病原真菌有较好的抑菌活性;内生细菌G1、G2、G3、G4对受试细菌具有普遍的抑菌作用。