结合态GA_3的间接酶联免疫吸附测定研究

利用GA3-7免疫家兔得到的抗血清,建立了检测结合态GA3的间接酶联免疫吸附测定方法(ELISA)。免疫抗原与包被抗原用最常见的DCC活化羧基与蛋白质相联。检测极限为12.3 ng/mL,线性范围12.3~1 000 ng/mL。抗血清与GA3的交叉反应率为2.3%,与GA4、IAA、ABA和ZR的交叉反应率均很小。     

驼源莠去津多克隆抗体的制备及间接竞争酶联免疫吸附分析方法的建立

为构建莠去津的快速监测技术,本试验通过美洲驼免疫,成功建立了基于美洲驼多克隆抗体的莠去津的酶联免疫检测方法,通过棋盘法确定了最佳包被抗原和抗血清稀释倍数,对影响反应的关键因素进行了优化,并进行了交叉反应性试验和添加回收试验。结果表明：通过优化反应体系,确定最优NaCl浓度为0.2 mol/L,最优甲醇浓度为5%,最佳缓冲液pH值为7.4,在最优条件下,间接竞争酶联免疫分析法的IC50为12.13 ng/mL;同时利用其他3种三氮苯类除草剂及常见环境代谢物进行了多克隆抗体的特异性试验,其对特丁津、西玛津和对去异丙基莠去津的交叉反应率较高,其他化合物交叉反应率较低;取河流水进行了实际样品的添加回收试验,试验结果与LC-MS比对,添加回收率在90.1%～114.2%之间,说明驼源多克隆抗体的莠去津间接竞争酶联免疫吸附分析方法可用于检测环境实际样品。     

洪湖碘泡虫多克隆抗体的制备及免疫特性分析

利用蔗糖密度梯度离心法分离纯化洪湖碘泡虫,经反复冻融、液氮研磨提取可溶性蛋白,免疫小鼠制备得到多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFAT)、免疫印迹分析(Western blotting)对多克隆抗体的免疫特性进行分析。间接ELISA法测定多抗血清的效价为1∶25 600;IFAT荧光定位显示洪湖碘泡虫的抗原主要位于极丝、孢子壳瓣的四周及底部一特定位置;Western blotting印迹分析显示该多抗血清与洪湖碘泡虫可溶性蛋白中约10条带发生反应,该可溶性蛋白中具有免疫原性的蛋白分子质量大小分别约为180、130、78、75、62、52、42、36、34、28ku。该多抗血清与碘泡虫属及单极虫属的一些粘孢子虫种类存在一定程度的交叉反应。     

用抗血清建立克伦特罗ELISA检测方法及其应用研究

为建立克伦特罗(CL)酶联免疫吸附试验检测方法,采用重氮偶联法将CL与牛血清白蛋白(BSA)偶联,经多次加强免疫BALB/C小鼠,获得抗血清.经检测表明,抗血清效价为128 000,和莱克多巴胺(Rac)、沙丁胺醇(Sal)交叉反应率为0.1%,具有很强的特异性.用CL抗血清建立了CL间接竞争ELISA法,得到标准曲线的回归方程logit y=-0.8756x+1.6958,相关系数为0.995,可检测范围为1 ng/mL～10 μg/mL,并检测出饲喂了含CL饲料的猪的尿样中含有CL.     

大型溞ChE和NAGase间接竞争和非竞争ELISA方法的比较

[目的]探索间接非竞争ELISA和间接竞争ELISA法测定大型溞ChE和NAGase的试验条件及方法灵敏度。[方法]分别采用间接竞争和间接非竞争ELISA方法测定大型溞ChE和NAGase。[结果]对于ChE,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为1.466μg/m L和1∶10 000,灵敏度为7.426 7 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为5.277μg/m L和1∶8 000,灵敏度为0.163 4 ng/m L。对于NAGase,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为8.961μg/m L和1∶6 000,灵敏度为4.199 9 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为6.450μg/m L和1∶4 000,灵敏度为0.250 8 ng/m L。[结论]无论是ChE还是NAGase,间接竞争ELISA在最适抗体浓度下的检测灵敏度均高于间接非竞争ELISA,加之其操作简便,间接竞争ELISA在生物和环境样品ChE和NAGase含量检测中值得推广应用。     

溴氰菊酯残留酶联免疫分析方法的建立

在前期设计合成了溴氰菊酯半抗原(DM)和人工抗原(DM-BSA和DM-OVA)的基础上,进一步利用人工抗原(DM-BSA)免疫新西兰大白兔获得了溴氰菊酯多克隆抗体.研究表明,新西兰大白兔产生的抗体对溴氰菊酯产生了灵敏的特异性免疫反应,所得多克隆抗体的效价为25 600.以DM-OVA为包被原建立溴氰菊酯间接竞争ELISA检测方法,确定了抗原抗体最适工作浓度均为1:12 800.在含10%甲醇、pH 7.4、盐浓度0.1 mol·L-1的缓冲液条件下制作了溴氰菊酯的标准抑制曲线,抑制中浓度IC50为3.999μg·mL-1,检出限IC10为0.023 μg·mL-1,检测范围为0.015～100μg·mL-1.抗体对包括氯菊酯、氯氰菊酯、甲氰菊酯在内的8种菊酯类农药的交叉反应率较低,在苹果中的添加回收率为86.2%～105.8%.成功制备出溴氰菊酯特异性抗体,并建立了水果中溴氰菊酯残留间接竞争酶联免疫分析方法.     

己烯雌酚多克隆抗体的制备研究

合成了具有己烯雌酚基本分子结构特性并带有一个羧基活性基团的半抗原CP-DES,用混合酸酐法将其与BSA偶联后免疫6只BALB/c雌性小鼠,获得了特异性的己烯雌酚多克隆抗体。以所得抗体建立间接竞争性酶联免疫吸附分析法(cELISA)用于己烯雌酚的检测,最低检测限为0.04 ng.mL-1。交叉反应表明,己烯雌酚的特异性抗体与其结构类似物无明显交叉反应。     

己烯雌酚多克隆抗体的制备研究

合成了具有己烯雌酚基本分子结构特性并带有一个羧基活性基团的半抗原CP-DES,用混合酸酐法将其与BSA偶联后免疫6只BALB/c雌性小鼠,获得了特异性的己烯雌酚多克隆抗体。以所得抗体建立间接竞争性酶联免疫吸附分析法(cELISA)用于己烯雌酚的检测,最低检测限为0.04 ng.mL-1。交叉反应表明,己烯雌酚的特异性抗体与其结构类似物无明显交叉反应。     

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

 【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50 μg蛋白/只?次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng?mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59 、163.80和166.51 ng?mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng?mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。     

诺氟沙星间接竞争酶联免疫检测方法的建立

以人工合成的诺氟沙星-卵血清白蛋白(NFLX-OVA)为检测抗原,NFLX标准品为竞争半抗原,两者与一定量的NFLX抗血清反应.结果表明,理想的包被抗原质量浓度为0.5 μg/mL, NFLX抗血清稀释倍数为1 :32 000,酶标二抗稀释倍数为1 :3 000,最小检测量为34.5 ng/mL.得到回归方程(y=-18.418x+94.986,r2=0.984 3)和标准曲线,从而建立了快速定量测定NFLX含量的间接竞争酶联免疫(ci-ELISA)检测方法.     

4种杀虫剂对水生生物的急性毒性与安全评价

为评价农药在稻田使用后对水生生物的安全性,选择啶虫脒、丙溴磷、二嗪磷和马拉硫磷4种杀虫剂为供试药剂,分别采用静态法和半静态法研究其对斜生栅列藻(Scenedesmus obliquus)、大型溞(Daphnia magna Straus)和斑马鱼(Brachydanio rerio)3种水生生物的急性毒性,并进行环境安全性评价。结果表明：啶虫脒、丙溴磷、二嗪磷和马拉硫磷对斜生栅列藻的72h-EC50值分别为55.3,0.00509,0.249,1.69 mg·L-1,其毒性级别分别为低毒、高毒、高毒和中毒。啶虫脒、丙溴磷、二嗪磷和马拉硫磷对大型溞的48h-EC50值分别为49.2,0.00392,0.03080,0.00165 mg·L-1,其毒性级别分别为低毒、剧毒、剧毒和剧毒。啶虫脒、丙溴磷、二嗪磷和马拉硫磷对斑马鱼的96h-LC50值分别为49.8,0.706,5.12,10.9 mg·L-1,其毒性级别分别为低毒、高毒、中毒和低毒。     

两种季铵盐阳离子表面活性剂对水生生物的毒性效应

为评价两种季铵盐阳离子表面活性剂对水生态的安全性,运用评价化学品对水生生物毒性的标准试验方法,测定了十二烷基二甲基苄基氯化铵(1227)和双八、十烷基季铵盐(C8-10)两种季铵盐阳离子表面活性剂对3种水生生物(斜生栅藻、大型溞和斑马鱼)的毒性。结果表明,在0.05~0.5 mg.L-1的浓度范围内,1227、C8-10对斜生栅藻的毒性表现出明显的剂量-效应关系,随处理浓度的增大抑制效应增强,0.5 mg.L-1C8-10对斜生栅藻具有杀灭作用;同时1227、C8-10与斜生栅藻还存在时间-效应关系,处理后抑制率随时间呈先升高后下降的趋势,72 h时抑制率最高。1227和C8-10对斜生栅藻96 h的EC50分别为0.109、0.103 mg.L-1,对大型溞的48 h LC50分别为1.56×10-2、1.45×10-2mg.L-1,对斑马鱼的96 h LC50分别为2.36、2.19 mg.L-1。C8-10对3种水生生物的毒性均高于1227,两种季铵盐阳离子表面活性剂对大型溞和斑马鱼的致死率(LC50)均随作用时间延长逐渐减小。     

5种药剂对大型溞的急性活动抑制毒性研究

[目的]比较5种药剂对大型溞(Daphnia magna Straus)的急性活动抑制毒性。[方法]测定了5种药剂对大型溞的急性活动抑制中浓度EC50,并评价了5种药剂对大型溞的毒性。[结果]5种药剂对大型溞的毒性大小表现为:20%甲氰菊酯水乳剂(EC50=0.002 8a.i.mg/L)10%高效氯氟氰菊酯可湿性粉剂(EC50=0.008 9 a.i.mg/L)7.5%鱼藤酮乳油(EC50=0.189 9 a.i.mg/L)7.5%除虫菊素水乳剂(EC50=0.202 0 a.i.mg/L)0.5%大黄素甲醚水剂(EC50=0.640 1 a.i.mg/L)。[结论]为大型溞应用于环境污染监测研究提供了理论依据。     

检测猪血浆中林可霉素和庆大霉素浓度的HPLC方法的建立

建立了林可-庆大霉素复方注射液猪血浆药物浓度的高效液相色谱检测法,血浆样品用乙腈和三氯乙酸提取、C18固相萃取柱净化、氮气浓缩后,采用二极管阵列检测器检测.结果表明,盐酸林可霉素和硫酸庆大霉素分别在0.5～50 μg·mL-1和0.33～33 μg· mL-1范围内线性关系良好,R2分别为0.9994和0.9996;血...     

超声萃取/气相色谱法测定麝香中的麝香酮含量

利用气相色谱法-氢火焰离子化检测器（GC/FID）快速测定麝香中麝香酮含量。样品经乙醇-超声波提取、过滤后,直接利用GC/FID测定,外标法定量。实验测定麝香酮回收率大于95%;定量限为0.80μg.mL-1;校准曲线线性范围为0-320μg.mL-1,线性相关系数r为0.9995;三次高、中、低浓度（50、150、300μg.mL-1）测定峰面积RSD%分别为1.08、0.89、0.55。本实验表明,乙醇超声波提取-GC/FID测定麝香中的麝香酮含量是一种简单、快速、准确的方法。     

泰妙菌素混悬注射液在猪体内的药物动力学及生物利用度研究

 【目的】 研究并比较泰妙菌素混悬注射液和泰妙菌素注射液在猪体内的药物代谢动力学特征及生物利用度。【方法】 7头健康猪,按随机拉丁方设计,进行单次给药剂量(10 mg•kg-1 b.w)静注、肌注泰妙菌素注射液和肌注泰妙菌素注射混悬液,高效液相色谱串联质谱法测定猪血浆中泰妙菌素的浓度,罗红霉素作为内标,3P97药动学计算软件处理血浆药物浓度－时间数据。【结果】 猪静注给药的药时数据符合无吸收三室开放模型,主要药动学参数为：t1/2β为2.04±0.23 h,t1/2α为0.39±0.06 h,t1/2π为0.12±0.04 h,Vd 为8.73±1.83 L•kg-1,AUC为3.78±0.52μg•mL-1•h-1,ClB为2.99±0.43 L•kg-1•h-1)。猪肌注泰妙菌素注射液的药时数据符合一级吸收二室开放模型,主要的药物动力学参数分别为：t1/2Ka(0.06±0.01)h,t1/2β(3.67±0.41)h,Tmax(0.18±0.03)h,Cmax(1.32±0.25)μg•mL-1,AUC(2.62±0.21)μg•mL-1•h-1,生物利用度为73.51%。猪肌注泰妙菌素混悬液的药时数据则符合一级吸收一室开放模型,主要的药物动力学参数为：t1/2Ka(0.04±0.01)h,t1/2Ke(2.90±0.43)h,Tmax(0.27±0.03)h,Cmax(0.7±0.11)μg•mL-1,AUC(2.80±0.35)μg•mL-1•h-1,生物利用度为75.73%。t检验比较肌注泰妙菌素注射液和泰妙菌素注射混悬液的主要药动学参数,结果表明,两者除达峰浓度Cmax有显著差异外,AUC、t1/2Ka、Tmax、t1/2Ke和生物利用度均无显著性差异。【结论】泰妙菌素注射混悬液肌注后在猪体内具有吸收迅速,体内分布广,达峰迅速,消除较快的药动学特征。     

胸腺肽对幼龄雄性小鼠生殖器官指数及性激素水平的影响

为了探讨胸腺肽对幼龄雄性小鼠生殖器官指数及性激素水平的影响,将100只幼龄雄性小鼠随机分为5组,第1组为正常饲养对照组,不做任何处理;第2组为生理盐水对照组,注射生理盐水;其余3组为试验组,每日分别背部皮下注射低剂量胸腺肽(0.30mg.mL-1)、中剂量胸腺肽(0.60mg.mL-1)和高剂量胸腺肽(1.20mg.mL-1),连续30d后测定睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数和血清中促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平。试验结果表明:与生理盐水对照组相比,高剂量胸腺肽小鼠睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数及LH水平均显著性升高(p<0.05);低胸腺肽组精囊腺指数显著性升高(p<0.05)。与正常饲养对照组比较,高剂量胸腺肽组小鼠T水平显著性升高(p<0.05)。可见,胸腺肽能提高雄性小鼠生殖器官指数和性激素水平,从而调节雄性小鼠生殖内分泌系统。     

Study on ELISA for detection of sulfamethazine residues

In this study, various factors of ELISA for detection of sulfamethazine residues were explored, the coating antigen was diluted to 1：400, the best coating condition was at 4℃ overnight, the working concentration of HRP-IgG enzyme conjugate was 1 ： 7 000. The pre-incubation time and incubation time was 30 min and 120 min, respectively, the substrate solution working time was 20 min. Two moL · L^-1 H2SO4 was used to stop the reaction and checked. A standard curve of direct competitive ELISA had been established to detect the sulfamethazine residues in milk. The detection limit of this method was 1.97 ng · mL^-1. The mean concentration of sulfamethazine required to inhibit 30% antibody was 7.1 ng · mL^-1. The linear range of the detection was 5-200 ng · mL^-1. The recovery ratio was between 73.20% and 91.16%. The CV% of within array and between arrays was less than 10%.     

中草药制剂对果蔗保鲜过程维生素C和过氧化物酶变化的影响

以黑皮果蔗“拔地拉”为试验材料,研究鱼腥草、丁香、高良姜、藿香、白藓皮等中草药制剂的保鲜效果.结果表明:常温下,包装处理的失水率低于未包装的,贮藏8d时,包装平均失水(0.53±0.187)％,而未包装的为(10.50±0.397)％;处理8d处理B、处理E切面仍正常.冷藏(0～4℃)处理40 d时,处理A、处理B、处理C、处理D切面正常,而处理CK、处理E发生劣变.冷藏48 d后,处理B、处理D的维生素C含量分别为(437.9±35.79)、(432.8±30.89) μg·mL-1,降幅低于其他处理.冷藏的鲜切果蔗POD活性在贮藏前期会缓慢上升,24 d后各处理过氧化物酶活性急剧增加,至40 d,处理B、处理D过氧化物酶活性分别为(1.314±0.056)、(1.600土0.047)U·min-1· g-1,而处理CK高达(2.305±0.041)U·min-1· g-1.说明中草药制剂在一定程度上能有效的抑制POD活性,延缓果蔗发生褐变、腐坏,从而达到延长保鲜期的目的.