小白鼠（Mus．musculus）骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞染色体研究

本文采用培养细胞直接制备染色体方法，对来源不同的小白鼠骨髓瘤细胞株（ＳＴ、ＣＴ）的不同培养代数（５代和１２代）细胞进行染色体研究；并对ＢＡＬＡ／Ｃ小白鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合后产生的杂交瘤细胞（ＵＥ＿８）的染色体进行分析研究；再把骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞的染色体排列的组型与正常小白鼠骨髓细胞染色体组型作比较研究。研究结果表明，从染色体形态看，骨髓瘤细胞（ＳＴ、ＣＴ）和杂交瘤细胞（ＵＥ＿８），除在ＳＴ细胞中发现１条属中间着丝点之外，其余染色体形态与正常小白鼠细胞染色体相同，都属于端着丝点染色体。从染色体数目看，ＳＴ、ＣＴ和ＵＥ＿８细胞染色体均多于正常小白鼠细胞２ｎ＝４０染色体数，ＳＴ、ＣＴ和ＵＥ＿８细胞染色体数最少为６０条，最多为８８条，其变动范围在６０～８８条之间，从分析骨髓瘤和杂交瘤９个细胞，每个细胞平均染色体数为６９．２２，是正常小白鼠２ｎ＝４０的１．７３倍。从染色体倍体看，骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞，倍体呈不规则状态，呈单体或多体。这与正常小白鼠细胞染色体呈规则的２倍体，表现出明显的不同。     

抗MATSA单克隆抗体的制备与鉴定

【目的】制备抗鸡马立克氏病肿瘤相关表面抗原(Marek’s disease tumor-associated surface antigen,MATSA)的单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAb),为马立克氏病的相关研究及研制以MATSA单克隆抗体为载体的抗肿瘤药物提供材料。【方法】用纯化的MATSA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其染色体进行分析。将阳性杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠,制备McAb腹水,采用硫酸铵盐析法粗提McAb,并鉴定其所属亚类。【结果】获得了3株能稳定分泌MATSA McAb的杂交瘤细胞株B3、H6和D6,其培养上清液抗体效价为26~27,Balb/c小鼠接种细胞制得的腹水效价为210~211。染色体分析结果显示,3株杂交瘤细胞染色体数目均为52±2对。3株杂交瘤细胞株所分泌的McAb均为IgG 2b亚类,可与MSB1细胞反应。【结论】获得了MATSA的McAb。     

抗犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

[目的]筛选出稳定分泌抗犬瘟热病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]用纯化的犬瘟热病毒(CDV)抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA和有限稀释法克隆杂交瘤细胞。研究了杂交瘤细胞的稳定性和染色体数,测定了单克隆抗体的效价并鉴定其特异性和亚型。[结果]经反复筛选和亚克隆后,共获得3株能稳定分泌抗CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3株单抗对CDV均有较高的特异性,与犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒均不反应。3株杂交瘤细胞的腹水效价为1∶(8 000~128 000),细胞培养上清效价为1∶(256~512),染色体数为80~100。3株单克隆抗体重链均属于IgG1,轻链均属于κ链。[结论]该研究为研制CDV快速检测试剂盒奠定了基础。     

鲤春病毒血症病毒核蛋白原核表达及单克隆抗体制备

以含有鲤春病毒血症病毒核蛋白基因的质粒N-RFP为模板,通过PCR方法扩增N基因编码区全长,大小为1 254bp。将该基因连接到pGEX-KG载体上,构建了SVCV-N-KG重组质粒。将重组质粒转化到BL21菌株中进行诱导表达,采用SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳分析鲤春病毒血症病毒N蛋白的表达情况。以纯化后的N蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA测定免疫小鼠的血清效价。将血清效价较高的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,4次亚克隆后,通过ELISA及染色体数目分析筛选出1株杂交瘤细胞,命名为N-2。将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔制备单克隆抗体。经间接免疫荧光和免疫印迹实验证明该抗体可以特异性识别鲤春病毒血症病毒N蛋白。进一步分析表明,该抗体识别的靶位点位于N蛋白第227~336位氨基酸之间。     

甘薯属物种根尖细胞涂抹制片方法的探讨(简报)

植物根尖细胞涂抹制片方法,是观察植物染色体最常用的方法,也是研究染色体组型染色体分带的基础。甘薯属包括有不同染色体数的物种,即二倍体、四倍体、六倍体。由于甘薯属物种的染色体小和染色体数目多,以及受染色体制片技术的局限,使得对甘薯属物种体细胞染色体形态、组型分析研究很少,仅见有关甘薯属物种染色体数目个别报道。这对从细     

猪骨骼肌卫星细胞体外培养

探索和建立猪骨骼肌卫星细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。结果表明,通过机械法与酶消化法相结合的方法,15%血清完全培养液分离、培养细胞效果最好,对培养细胞进行了形态观察、生长曲线测定、染色体分析。结果表明,培养的细胞具有正常的大小、形态和染色体数目,该方法所获得的猪骨骼卫星细胞可在体外稳定培养,为有关实验提供充足的猪骨骼卫星细胞。     

抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的研制及应用

将纯化的猜传染性胃肠炎病毒免疫 BALB/C 小白鼠后,取免疫脾细胞与骨髓瘤细胞在 PEG 存在下进行融合,HAT-1640培养液筛选,并用 ELISA 间接法检测阳性克隆。通过有限稀释法进行三次克隆化后,获得了二株稳定分泌抗 TGEV 的单克隆抗体杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞染色体皆在95条以上;其分泌抗体均属 IgG_1亚类。通过阻断试验证明其作用的特异性。对该单抗在诊断上的初步应用作了探讨。     

用于骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞增殖以及杂交瘤细胞抗体产生的无血清培养基

小鼠骨髓瘤SP#-2/0细胞和小鼠杂交瘤7E8细胞不需经低浓度血清的适应性培养即能在无血清培养基Ⅰ（SFM-Ⅰ）中良好生长、增殖。培养获得的最大活细胞密度分别为2.57×10#+6/ml和1.88×10#+6/ml,对大于1×10#+6/ml活细胞密度的维持时间均为84小时。这两方面均优于用无血清培养基Ⅱ（SFM-Ⅱ）或用有血清培养基Ⅱ（SCM-Ⅱ）培养的效果。SFM-Ⅰ培养7E8细胞的培养上清中,特异性单克隆抗体ELISA效价为1∶800,与SFM-Ⅱ和SCM-Ⅱ培养上清的效价相同。SFM-Ⅰ可望用作杂交瘤细胞体外大规模无血清培养生产单克隆抗体的首选培养基。SFM-Ⅱ培养的细胞从初始密度增殖至1×10#+6/ml时,其增殖速度与有血清培养基相近,大于SFM-Ⅰ培养细胞的增殖速度。用SFM-Ⅱ进行SP#-2/O、7E8和大鼠骨髓瘤IR983细胞的连续传代培养,细胞始终圆整、立体感强,具有高度活力和较快的增殖速度。SFM-Ⅱ适宜用于骨髓瘤和杂交瘤细胞的无血清传代培养。     

新城疫病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

将复性的重组NDV HN蛋白免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤.通过ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗HN单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞4E11.ELISA和Western-blot结果表明,该MAb能与NDV特异性反应,而不与H9亚型AIV,IBDV,EDS76,IBV和CIAV交叉...     

副结核分枝杆菌McAb的某些特性鉴定

以超声波粉碎的副结核分枝杆菌地方株Ｃ２抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经与ＮＳ－１骨髓瘤细胞三次融合，获得了３株能稳定分泌抗副结核分枝ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系，其染色体数目为７８－１１０条，分别为ＩｇＭ和ＩｇＧ２。应用间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养液，腹水和血清效价为１０＾－２～１０＾－７。交叉试验证明，ＭｃＡｂＯ１与受试的各株副结核分枝杆菌反应强烈，与牛分枝杆菌和草分枝杆菌有微弱特异性抗原之一。ＳＤＳ－Ｐ     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以提纯的IBV-M病毒抗原免疫BALB/C小鼠,末次免疫后三天取脾细胞与SP_2/O细胞在50％PEG2000作用下融合,三次融合两次获得成功。经抗体检测、筛选和克隆化培养,最后获得三株分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系。三株杂交癌细胞经体外连续传代培养2个多月,以及液氮冻存4个月后复苏培养,仍能稳定地分泌抗体。     

分泌抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用超滤膜超滤浓缩法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒 (Infectious Bursal Disease Virus)疫苗株 D78免疫 BALB/ c小鼠。取其脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞进行融合 ,经筛选克隆 ,成功地建立了 13株分泌抗 IBDV D78的杂交瘤细胞株 ,这些杂交瘤细胞株的稳定性好、特异性强 ,腹水和无血清培养上清 (浓缩 30倍 )中 Mc Abs的效价分别达 16 6和 10 3以上     

猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用经超滤浓缩、PEG 沉淀,氯化铯密度梯度离心纯化的猪细小病毒(PPV)免疫 BALB/C 小白鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP_2/O在PEG 存在下融合,经 HAT 筛选、ELlSA 测定及3次克隆化后,获得3株(P-15—36—6,P-15—45—51,P—15—52—28)能持续稳定分泌抗 PPV 单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株杂交瘤细胞的染色体数均在95条以上,经分类测定,其免疫球蛋白均属 Ig G,且均为 IgG_1亚类。阻断试验证明单抗具有抗 PPV 的特异性。利用间接 ELISA 抑制试验进行了单抗在诊断上应用研究。     

磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)单克隆抗体的制备及初步鉴定

用磺胺间二甲氧嘧啶人工免疫原(BSA-SDM)免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术筛选抗磺胺间二甲氧嘧啶单克隆抗体(SDMmAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备SDMmAb,并鉴定其免疫学特性;鉴定结果表明,筛选出3株杂交瘤细胞,单克隆抗体的蛋白亚型为IgG1;分子量为178.1KDa,染色体数目为76～87条。与其他7种磺胺药(SD、SMM、SMZ、SQ、ST、PST、SMT、SPD)有很高的交叉反应性,可用于推广磺胺类药物多残留快速检测试剂盒的研制应用。     

小尾寒羊骚痒病单抗制备及免疫组化检测方法的初步建立

【目的】通过表达羊PrPc核心片段、单抗制备，最后建立免疫组织化学检测羊痒病方法。【方法】用PCR方法从小尾寒羊基因组DNA中扩增编码PrPc核心片段DNA， 并克隆到硫氧还原蛋白融合表达载体pET-32a（+）上，转化至E.coli BL21，IPTG诱导融合表达。以纯化的重组小尾寒羊PrPc核心片段免疫PrPc基因敲除小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，制备羊核心片段单克隆抗体。【结果】通过上述方法，得到相对分子质量约为35 kD的重组小尾寒羊PrPc核心片段，筛选出六株能稳定分泌针对小尾寒羊PrPc核心片段特异单抗的杂交瘤细胞株。免疫组化试验表明,其中4株可特异性识别羊痒病脑组织切片中耐PK酶消化的PrPsc，经5次重复试验表明：所制备单抗与对照单抗F89结果完全一致。【结论】利用原核表达，单抗制备等技术制备出PrP特异性单克隆抗体，用笔者自己研制的单抗作为核心试剂初步建立了羊痒病免疫组化检测方法。     

抗牛型结核分支杆菌单克隆抗体的制备和鉴定

运用杂交瘤细胞技术,以牛型结核分支杆菌免疫Balb/c小鼠,用其超声波裂解液筛选杂交瘤细胞,得到了2株能稳定分泌抗牛型结核杆菌抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5D4和4C3,并对它们的特性作了初步鉴定.经鉴定,2株单克隆抗体均为IgG1亚类.腹水经ELISA检测,效价可达1∶1×104~1∶1×105,同时分析了2株单抗的抗原位点,结果表明2株单抗针对不同的抗原位点.单抗的特异性试验结果显示,2株单抗与大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌等均没有反应,但都与人型结核分支杆菌有不同程度的交叉反应.并应用免疫胶体金技术制备牛结核杆菌胶体金快速诊断试纸条做应用性鉴定.该试纸条只与结核杆菌发生反应,而不与沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、李氏杆菌等发生交叉反应.该试纸条最低能检测出浓度为1×106个/mL的牛结核杆菌菌液,有较高的灵敏度.     

抗雌二醇单克隆抗体的制备与鉴定

活化雌二醇(E2)C3处的酚-OH,与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备得E2的完全抗原,利用完全抗原免疫动物,采用单克隆抗体技术,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生腹水等过程,最后获得了E2的单克隆抗体,对纯化的单克隆抗体的性质鉴定,结果显示:其抗体效价为1:106,抗体属于IgG2a型;分子量为179000Da;E2单克隆抗体的亲和常数K2.9108L/mol。     

猪圆环病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备

以大肠杆菌表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组衣壳蛋白(GST-CAP2)为抗原,以一定的免疫程序接种BALB/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按常规杂交瘤技术进行融合.以GST-CAP2以及猪圆环病毒1型(PCV1)重组衣壳蛋白(GST-CAP1)为包被抗原,经间接ELISA筛选获得2株能稳定分泌针对PCV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(M1和G1).通过dot-ELISA、Western-blotting以及间接免疫荧光(IFA)技术证明G1株分泌的单抗同时识别PCV1和PCV2, 而M1株分泌的单抗则特异性针对PCV2.该单抗的制备将为进一步建立快速检测PCV的方法奠定基础.     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇