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苦皮藤素人工抗原的合成与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
采用琥珀酸酐法合成了苦皮藤素 的衍生物苦皮藤素 -半琥珀酸酯(CA-SG),在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳化二亚胺法合成了苦皮藤素 的人工抗原(CA-BSA,CA-BSA2),采用紫外分光光度计法、SDS-PAGE及PAGE电泳法对合成的人工抗原进行了定性鉴定,结果均表明人工抗原合成成功。根据半抗原、人工抗原及其载体在240nm处的紫外吸光值,计算出2种人工抗原中半抗原与载体的分子结合比率分别为11.6和10.7。 相似文献
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苦皮藤素Ⅴ人工抗原的合成与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
采用琥珀酸酐法合成了苦皮藤素 的衍生物苦皮藤素 -半琥珀酸酯(CA-SG),在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳化二亚胺法合成了苦皮藤素 的人工抗原(CA-BSA,CA-BSA2),采用紫外分光光度计法、SDS-PAGE及PAGE电泳法对合成的人工抗原进行了定性鉴定,结果均表明人工抗原合成成功。根据半抗原、人工抗原及其载体在240nm处的紫外吸光值,计算出2种人工抗原中半抗原与载体的分子结合比率分别为11.6和10.7。 相似文献
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【目的】建立一种敏感性高、特异性强的抗苦马豆素(Swainsonine,SW)抗体的ELISA检测方法。【方法】用SW人工抗原(SW-BSA)免疫小鼠,制备抗SW血清,通过ELISA法进行血清抗SW抗体效价检测,比较以SW-OVA或SW为包被抗原的检测结果,分析包被抗原浓度、封闭剂等对测定结果的影响,以确定测定的最佳条件。【结果】以SW-OVA为包被抗原的检测结果明显优于以SW为包被抗原;抗苦马豆素抗体的最佳测定条件为:以1.0μg/mL SW-OVA作为包被抗原,于4℃包被过夜或37℃包被2 h,选用15 g/L的明胶作为封闭剂,酶标抗体的工作浓度为1∶1 500。【结论】建立的抗苦马豆素抗体ELISA检测方法,特异性强、稳定性高,为进一步研究苦马豆素人工抗原的免疫原性等奠定了基础。 相似文献
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【目的】探索高效苦马豆素(SW)人工抗原SW-BSA的合成方法。【方法】设计新的技术路线,合成SW人工抗原制备的关键中间产物SW-对甲基苯甲酸,并进行波谱分析。应用EDC法将SW-对甲基苯甲酸分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接,制备免疫抗原SW-BSA和包被抗原SW-OVA,通过小鼠免疫试验检测所合成的SW-BSA的免疫原性。【结果】合成的SW-对甲基苯甲酸的结构与预期目标产物一致;合成的SW-BSA可刺激小鼠产生针对SW的抗体;通过薄层层析技术可对反应进程进行即时检测。【结论】SW-BSA人工抗原合成成功,该人工抗原具有良好的免疫原性。 相似文献
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为了制备可用于检测氟苯尼考的特异性多克隆抗体,采用戊二醛法合成氟苯尼考的人工抗原FFA-BSA、FFA-OVA、紫外分光光度计进行鉴定,用FFA-BSA免疫BALB/C雌性小鼠获得可用于检测氟苯尼考的特异性多克隆抗体,并用间接ELISA法对其进行特异性鉴定。结果显示:经过紫外扫描鉴定,成功合成了人工抗原合 FFA-BSA和FFA-OVA,偶联比分别为12∶1和11∶1。制备的抗体效价低于1∶32000,抑制率为50%( IC50)时的氟苯尼考浓度为36.9 ng/mL。可见,本试验制备的氟苯尼考多克隆抗体具有较好的亲和力和高特异性,有良好的应用价值。 相似文献
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[目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。 相似文献
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制备磺胺类药物母核结构的半抗原(H),通过免疫家兔得到多克隆抗体,为制备针对多种磺胺类药物的单抗和磺胺药检测免疫胶体金试纸条研制奠定基础。以对乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)和对氨基苯甲酸甲酯(PA-BA)合成磺胺母核的半抗原(H);以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用混合酸酐法,合成了免疫原H-BSA和包被原H-OVA通过紫外光谱定性证明偶联物偶联成功与否,以H-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,ELISA法对其特异性及效价进行检测。成功合成了磺胺母核人工抗原即免疫原H-BSA和包被原H-OVA,二者的蛋白浓度分别为8.46 mg/mL和10.53 mg/mL,结合比分别为13∶1和9∶1;制备的多克隆抗体特异性良好,血清效价为1∶256 000。 相似文献
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研究制备能有效用于金霉素残留检测的特异性多克隆抗体采用戊二醛法和混合酸酐法合成2种不同的金霉素-BSA完全抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,应用ELISA法鉴定抗金霉素多克隆抗体结果表明,2种血清的抗体效价最高均达32×105,而戊二醛法制备的抗原产生的抗体具有更高的亲和力,抑制率为50%时的金霉素的质量浓度(IC50)为962 μg·mL-1,金霉素的最低检测限为667 ng·mL-1,金霉素和四环素的交叉反应率为77%研究结果为畜产品中四环素类抗生素残留的检测奠定了较好的基础 相似文献
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【目的】建立CD58特异性抗体的制备方法,及检测CD58抗体的间接ELISA方法。【方法】用CD58混合弗氏佐剂和兔淋巴细胞吸附CD58的方法免疫家兔获取CD58的抗体,双向免疫扩散试验检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体水平。【结果】两种方法都能够使动物机体产生免疫应答;双向免疫扩散试验证实,弗氏佐剂法获得2种抗体,淋巴细胞吸附法制备抗原可获得1种抗体;间接ELISA检测法CD58的最适包被浓度为10.0μg/mL,最佳封闭液为10 g/L明胶,辣根酶标记的羊抗兔IgG工作浓度为1∶2 000。【结论】兔淋巴细胞吸附法可制备针对CD58的单一抗体,间接ELISA检测方法可以用于CD58抗体水平的检测。 相似文献
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《吉林农业大学学报》2014,(1)
为开发研制牛病毒性腹泻-黏膜病毒(BVDV)及牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的联合亚单位疫苗,开展了BVDV E2蛋白、IBRV gD蛋白主要抗原表位串联表达及免疫原性研究。利用2步PCR法获得E2-gD基因,构建原核表达载体pET28a-E2-gD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE结果显示重组蛋白表达,BCA工作盒测定纯化蛋白浓度为2.69 mg/mL;Western-blot结果显示其具有作为免疫原的特异性;免疫家兔制备抗血清,血清中和试验结果表明,中和抗体效价为44.7(IBRV)/22(BVDV)。这说明E2-gD蛋白免疫原性较好,可诱导产生较高效价的中和抗体。 相似文献
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以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒 总被引:3,自引:0,他引:3
【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP抗体的ELISA方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg·mL-1;检测199份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。 相似文献
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对硫磷抗体制备及其性质分析 总被引:6,自引:0,他引:6
人工降解对硫磷,得到了具有氨基活性的半抗原化合物——对氨基对硫磷,再通过戊二醛法和重氮法使之与载体蛋白连接,分别获得了抗原Ⅰ和抗原Ⅱ,在其基础上制备了抗体Ⅰ和抗体Ⅱ。ELISA试验结果表明,抗体Ⅰ对对硫磷的识别能力较弱,但能识别对氨基对硫磷并具有很好的特异性,抑制中浓度(IC50)为5.1ng/ml,最低检测限为2.4ng/ml;抗体Ⅱ对对氨基对硫磷的识别能力较弱,但对对硫磷具有很好的特异性,抑制中浓度(IC50)为5.2ng/ml,最低检测限为0.1ng/ml。 相似文献
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通过合成氯霉素完全抗原,制备氯霉素的多克隆人工抗体,建立氯霉素(CAP)的免疫学检测方法。采用重氮法合成氯霉素完全抗原,以氯霉素牛血清白蛋白(CAP-BSA)免疫大耳白家兔,用ELISA方法进行鉴定和特性分析。结果显示,该抗血清与链霉素、青霉素、四环素等常见抗生素的交叉反应率均小于2.1%,IC50为13.65 ng/ml,检测限达到1.01μg/L。获得了选择性好、特异性较高的氯霉素特异抗体,可用于氯霉素的快速定量检测。 相似文献