蒲公英提取物与狼毒素总黄酮主要药效作用研究

采用平板法、试管法测定两种蒲公英乙醇提取物与狼毒素总黄酮(TFC)对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌体外抑制作用和最小抑菌浓度(MIC)以及最小杀菌浓度(MBC),利用二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验、牛奶致热试验观察三者的抗炎、解热作用。结果表明,狼毒素总黄酮(TFC)与蒲公英40%乙醇提取物(40%HT)具有中度抑菌作用,且二者组合有显著的抑菌作用;狼毒素总黄酮40%乙醇提取物在500、250 mg/kg,90%乙醇提取物(90%HT)在500 mg/kg剂量下显著抑制二甲苯致小鼠耳廓的肿胀(P<0.01);狼毒素总黄酮不具有解热作用,两种蒲公英提取物均能显著抑制牛奶致热(P<0.01或P<0.05)。     

紫花地丁抑菌活性成分的研究初报

采用活性跟踪法从紫花地丁的氯仿萃取物中分离得到1个抗菌活性成分(化合物1),并以停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、乳房链球菌和沙门氏菌为供试菌,对紫花地丁的抑菌活性及其活性成分进行了初步研究。结果表明,化合物1初步鉴定为黄酮类化合物;紫花地丁的主要活性成分位于甲醇-水(V(甲醇)∶V(蒸馏水)=1∶1)萃取物和氯仿萃取物中;化合物1对以上6种供试菌的最小抑菌浓度依次为0.039,0.078,0.156,0.313,0.625和1.25mg/mL;对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的最小杀菌浓度≤2.5mg/mL,对停乳链球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的最小杀菌浓度>2.5mg/mL。     

新狼毒素B及其衍生物的抑菌活性研究

采用药敏纸片法对新狼毒素B(化合物1)及其羟基取代产物(化合物2)、羰基还原产物(化合物3)和狼毒色原酮(化合物4)、青霉素钠(化合物5)、头孢哌酮钠(化合物6)进行抑菌活性检测和比较。结果发现,化合物1和化合物2对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌5种供试菌均有不同程度的抑菌活性,即二者对革兰氏阳性菌和阴性菌均有活性,其中化合物1较化合物2的活性更强。化合物1~化合物5对4种球菌的抑菌活性大小次序为5>1>3>4>2。化合物1~化合物4、化合物6对大肠杆菌的活性大小为6>3>1>2>4。从而初步得出新狼毒素B分子中羟基为主要活性基团,另外,其经过羰基还原后虽然对4种球菌的抑菌活性有轻微的降低,但是对大肠杆菌的活性增强了,也就是说其抑菌活性的选择性提高了。     

肉鸡弯曲杆菌噬菌体的筛选及应用

试验旨在筛选肉鸡弯曲杆菌特异性裂解型噬菌体并对其在肉鸡生产中的合理应用进行探讨。从肉鸡屠宰场收集弯曲杆菌噬菌体筛选样本,通过与当地肉鸡弯曲杆菌流行株共孵育、增殖、纯化获得特异性弯曲杆菌噬菌体。对上述弯曲杆菌噬菌体生物学特性（宿主范围、致死曲线、形态学特征等）进行鉴定;将筛选得到的弯曲杆菌噬菌体作为饲料添加剂,以5×10⁷、1×10⁸、5×10⁸、1×10⁹和5×10⁹ PFU/d 5个添加量添加于38日龄雄性罗斯308肉鸡饲粮中,观察不同噬菌体添加量对肉鸡盲肠内容物中弯曲杆菌的清除效果;最后通过比较2种噬菌体不同配比条件对肉鸡弯曲杆菌清除率及对肉鸡生长性能的影响建立使用方案。结果显示,试验从当地肉鸡屠宰场以空肠弯曲杆菌标准株L26为宿主菌共分离到12株空肠弯曲杆菌噬菌体,与从肉鸡养殖场分离的7株空肠弯曲杆菌共孵育,并选择裂解谱广且噬菌斑大的噬菌体BP11和BP12进行纯化和增殖。经形态学鉴定,2株噬菌体均符合肌尾噬菌体科（Myoviridae）特征,并具有较宽的裂解谱,但二者对相同宿主菌的裂解能力表现差异性;BP11添加量为1×10⁹ PFU/d,BP12添加量为5×10⁸ PFU/d时均能达到显著裂解效果;BP11与BP12混合添加组在不影响屠宰指标的前提下可显著降低肉鸡泄殖腔弯曲杆菌携带量。本研究结果为肉鸡生产过程中弯曲杆菌污染的防控及噬菌体的合理利用奠定理论基础。     

苦马豆素降解菌YLZZ-2的降解特性与条件优化

YLZZ-2是一种具有降解苦马豆素活性的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。采用正交试验设计对影响其降解能力的培养基初始pH值、温度、底物浓度和摇床转速等4个因素进行优化,以对YLZZ-2的降解特性进行初步了解。结果表明:YLZZ-2菌在pH 7.0,温度30℃,SW添加浓度5%,转速160 r.min-1时具有最佳降解SW能力。抗性检测表明,该菌具有氨苄青霉素、卡那霉素双重抗性,质粒消除后抗性消失,降解性也丧失,说明YLZZ-2菌降解SW的功能与质粒相关。     

紫花地丁抗菌活性成分研究

采用超声波提取技术提取紫花地丁中的抗菌活性成分,通过抑菌试验进行活性部分追踪,运用化学方法进一步分离纯化其抗菌活性成分,并用紫外光谱分析和高效液相色谱法(HPLC)测定其纯度,最后用试管比浊法测定其抗菌活性。结果表明,分离纯化所得的化合物为黄酮类,纯度为97.50%;该化合物对沙门氏菌和乳房炎病原菌包括金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、无乳链球菌及大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为312,39,156,156,312及39μg/mL,最低杀菌浓度分别为625,312,312,312,625及312μg/mL。     

蒲公英提取物对乳房炎病原菌的抑菌活性分析

为了研究蒲公英的有效抑菌成分,利用超声提取技术对蒲公英进行提取,通过大孔吸附树脂D101分离其活性部分。试管法试验表明40%乙醇洗脱部分含有酚类物质,90%乙醇洗脱部分含有黄酮类化合物。经药敏试验证明90%和40%的乙醇洗脱部分为蒲公英的主要抑菌部位,对奶牛隐性乳房炎主要病原菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌有明显的抑菌效果。     

西藏3种疯草中合成苦马豆素内生真菌的鉴定

 【目的】从西藏毛瓣棘豆、冰川棘豆、茎直黄芪中分离内生真菌。【方法】应用薄层色谱法、气相色谱、气相色谱-质谱联用法检测内生真菌中的苦马豆素（swainsonine,SW）,筛选可生成SW的内生真菌;应用聚合酶链反应对真菌的ITS序列和IGS序列进行扩增,并根据ITS序列信息构建系统发育树,确定其种属分类;对IGS序列进行限制性酶切,并分析酶切产物。【结果】从3种疯草中分离到可以产生SW的4株内生真菌,各菌的形态、ITS序列的同源性与埃里格孢属真菌较为接近,系统发育分析表明4株真菌均为棘豆埃里格孢菌。ITS序列和IGS序列的限制性片段的分析表明,4株真菌遗传距离较近,但仍存在种间变异,可能为棘豆埃里格孢菌的不同亚种。【结论】本研究结果为探讨内生真菌合成SW机理研究奠定了基础,为动物疯草中毒病的防除和疯草资源的合理利用提供了新思路。     

家兔血清中苦马豆素的气相色谱测定方法

建立家兔血清中苦马豆素(SW)浓度的气相色谱测定方法,为SW的毒理学和免疫学研究提供条件。饲喂家兔甘肃棘豆草粉后,分别于5、10、20d采集血液并分离血清;血清经过丙酮沉淀、超声和离心净化处理后,冷冻干燥;冻干物经硅烷化试剂衍生化反应,用气相色谱内标法测定血清中SW的含量。结果显示,测定SW的线性范围为0.00008～2.5g/L,相关系数γ=0.9996,检出限为0.00008g/L。在0.001、0.01、0.1、1.0g/L分别添加SW的回收率为89.81%～96.23%,相对标准偏差为2.46%～4.35%。结果表明,该方法准确、灵敏、快速、简便,适用于家兔血清中SW含量的测定。     

抗苦马豆素抗体ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种敏感性高、特异性强的抗苦马豆素(Swainsonine,SW)抗体的ELISA检测方法。【方法】用SW人工抗原(SW-BSA)免疫小鼠,制备抗SW血清,通过ELISA法进行血清抗SW抗体效价检测,比较以SW-OVA或SW为包被抗原的检测结果,分析包被抗原浓度、封闭剂等对测定结果的影响,以确定测定的最佳条件。【结果】以SW-OVA为包被抗原的检测结果明显优于以SW为包被抗原;抗苦马豆素抗体的最佳测定条件为:以1.0μg/mL SW-OVA作为包被抗原,于4℃包被过夜或37℃包被2 h,选用15 g/L的明胶作为封闭剂,酶标抗体的工作浓度为1∶1 500。【结论】建立的抗苦马豆素抗体ELISA检测方法,特异性强、稳定性高,为进一步研究苦马豆素人工抗原的免疫原性等奠定了基础。