PRL-3及其同源异形体重组杆粒的构建和鉴定

目的构建PRL-3及其同源异形体重组杆状病毒表达载体,为下一步表达PRL-3及其同源异形体蛋白并从中草药活性成分中筛选出PRL-3抑制剂奠定基础。方法应用RT-PCR方法从高转移卵巢癌细胞HO-8910PM扩增PRL-3及其同源异形体编码序列,克隆到供体质粒pFastBac HTB,在DH10Bac菌中进行同源重组,经3种抗生素和蓝白斑筛选,得到Bacmid-HTB-PRL-3和Bacmid-HTB-PRL-3-variant,PCR鉴定其正确性。结果与结论成功构建了PRL-3及其同源异形体重组杆粒。     

双氧水对鼻咽癌细胞生长特性的影响及其机制的初步研究

目的:观察H2O2对人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)生长、增殖能力的影响,并探讨其可能机制。方法:用M TT及平板克隆形成实验、W estern B lot等检测H2O2诱导CNE-2Z后增殖能力、EGR-1、p53、p16、Cyclin D1的表达。结果:不同浓度H2O2可不同程度地抑制CNE-2Z细胞的生长增殖能力,同一时间点各实验组细胞抑制率相比差异有统计学意义,抑制率与H2O2浓度间表现出明显的剂量-效应关系。平板克隆形成实验的抑制率较M TT更明显。CNE-2Z无EGR-1、p16蛋白表达,可见p53、Cyclin D1蛋白表达;诱导培养后EGR-1、p53、Cyclin D1蛋白表达明显增加。结论:一定浓度的H2O2能抑制CNE-2Z细胞生长,其作用可能与EGR-1及p53蛋白表达增强有关;Egr-1基因在CNE-2Z中具有可诱导性,在肿瘤治疗中有一定的应用前景。     

三羟异黄酮对高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM的侵袭、转移及MTA1、nm23H1基因表达的影响

目的:研究三羟异黄酮(gen iste in)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法:以台盼蓝拒染法检测gen iste in对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;用T ransw ell小室法检测gen iste in对HO-8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响;RT-PCR分析M TA 1及nm 23H1mRNA的表达。结果:50μm o l/L的gen iste in作用细胞6h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和趋化运动能力,抑制率分别为(21.08±3.12)%和(17.15±2.01)%;25~100μm o l/L gen iste in作用HO-8910PM细胞24h后,明显下调M TA 1 mRNA的表达,上调nm 23H1mRNA表达水平。结论:gen iste in能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭和运动能力。gen iste in抗肿瘤侵袭转移的作用机制与M TA 1 mRNA的表达下调和nm 23H1mRNA表达上调有关。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂系统在鼻咽癌细胞系及其两个克隆株中的表达和意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统3种主要成分(uPA、uPAR、PAI—1)在一鼻咽癌细胞系(CEN—2Z)及其它的两个克隆株(CNE—2Z—H5、CNE—2Z—H5—9)中的作用。方法：应用逆转录聚合酶反应(RT—PCR)方法检测uPA系统各因子在基因转录水平的表达。结果：uPA，uPARmRNA在CNE—2Z—H5—9中表达最高，在CNE—2Z中表达最低；PAI—1mRNA在CNE—2Z—H5—9中无表达，在CNE—2Z，CNE—2Z—H5有表达，但差异无显若性。结论：uPA、uPAR可能促进鼻咽癌细胞侵袭、转移，PAI—1可能起抑制作用。     

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的抑制作用

目的研究辛伐他汀(SIM)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的抑制作用。方法MTT法检测SIM对HO-8910PM细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析SIM对细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果SIM抑制HO-8910PM细胞的增殖,细胞被阻滞在G0/G1期;荧光染色法显示经SIM作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体。结论SIM在体外能有效地抑制癌细胞的增殖,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。     

斑蝥素抑制NF-kB（P65）及Smad3在高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM中的表达

目的:研究斑蝥素对H O- 8910 PM细胞内N F- κB(P6 5 )、Smad3蛋白及NF- κB(P6 5 ) m RN A表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制。方法:用Western blot分析N F- κB(P6 5 )及Smad3蛋白的表达;RT- PCR分析NF- κB(P6 5 ) m RNA的表达。结果:2 5～10 0μmol/ L的斑蝥素作用于H O- 8910 PM细胞2 4 h后,明显下调N F-κB(P6 5 )及Smad3蛋白表达和NF-κB(P6 5 ) m RN A表达(P<0 .0 1) ,并呈一定的剂量效应。结论:斑蝥素抗肿瘤侵袭、转移与抑制NF- κB(P6 5 )、Smad3蛋白和NF- κB(P6 5 ) m RNA的表达有关。     

洛伐他汀影响人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM转移相关能力的研究

目的研究洛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM转移相关能力的影响。方法分别运用MTT法、Transwell小室法、细胞粘附人工重组基底膜实验检测洛伐他汀对HO-8910PM细胞的细胞毒作用,对细胞的侵袭能力和趋化运动及对细胞粘附能力的影响。结果洛伐他汀作用HO-8910PM细胞6h后能抑制其体外侵袭、趋化运动和粘附能力,其中8μmol/L抑制率分别为(79.18±0.21)%、(59.40±0.80)%和(14.08±1.28)%。结论洛伐他汀能有效地抑制人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的侵袭、趋化运动和粘附能力,是潜在的抗肿瘤转移药物。     

bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达

目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。     

人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)单克隆株细胞膜电学特性的研究

从人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)中分离出单克隆株4-2-H_5、5-1-F_1,5-2-F_7进行体外培养,分别计算各克隆株细胞倍增时间和分裂指数,用玻璃微电极细胞内记录方法测量细胞膜电位,结果表明:(1)随培养时     

FBXO31对肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨FBXO31基因对肺腺癌细胞系A549增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31表达质粒及FBXO31 siRNA序列分别转染肺癌A549细胞,用Western blot、MTT、平板克隆、划痕和Transwell实验分别检测A549细胞中FBXO31蛋白表达、细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力.结果Western blot显示FBXO31表达质粒转染上调A549细胞中FBXO31蛋白表达,而转染siRNA下调FBXO31蛋白表达.FBXO31基因过表达增强A549细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力,而FBXO31基因沉默抑制细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力(P＜0.01).结论FBXO31基因可促进肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力.     

槲皮素对BEL-7402细胞生长抑制作用的研究

[目的]探讨槲皮素对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。[方法]体外培养BEL-7402细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶（APA）法检测细胞增殖抑制率;光镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。[结果]槲皮素对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为4μg/ml。光学显微镜下可见细胞密度明显降低。经槲皮素作用6、12h后,流式细胞术检测到细胞凋亡率显著增加。[结论]槲皮素对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,可诱导肝癌细胞凋亡。     

鼻咽癌上皮细胞系CNE—2Z及其克隆株CNE—2Z—H5的细胞遗传学研究

目的：研究鼻咽癌上皮细胞系ＣＮＥ－２Ｚ及其克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５的核型特征和标记染色体。方法：常规细胞培养和制片后进行染色体Ｇ显带，按人类细胞遗传学国际命名体制（ＩＳＣＮ）进行核型分析。结果：ＣＮＥ－２Ｚ的染色体数目在７４～９６之间，众数为８６～８７，ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５的染色体数目在８３～９３之间，众数为８６～８８，两种细胞均有一系列结构复杂的标记染色体，其中１８条出现大部分被分析细胞中，其结构     

大豆高赖氨酸基因PM8在烟草中的超量表达及其抗非生物胁迫功能研究

应用生物信息学方法在GenBank数据库查找到1条编码大豆LEA3蛋白的高赖氨酸蛋白基因PM8(登录号:Z22872),并利用RT-PCR方法从大豆干种子中克隆得到该基因,序列分析表明,PM8基因与GenBank上的序列存在5个碱基的差异,使编码蛋白的赖氨酸重量比由原来的19.65%增加为19.93%。构建了PM8基因的植物表达载体pEMT-PM8,用农杆菌介导法转化烟草。从转PM8基因的PCR阳性植株中选取5个既抗盐又抗旱的株系进行Real-timePCR检测。结果表明,PM8基因全部超量表达。研究为培育高营养品质且抗逆的转基因作物研究提供了一条新的途径,具有重要的研究价值。     

雷公藤内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选

目的:从雷公藤根(Tripterygium wilfordii)茎及叶中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。方法:采用微生物纯化方法分离雷公藤植物的内生真菌,根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用HCT-8(人结肠癌细胞)、Bel-7402(人肝癌细胞)、BGC823(人胃癌细胞)、A549(人肺癌细胞)为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果:从雷公藤不同器官中分离得到64株内生真菌,经形态观察鉴定为3目,5科,11属。其中5株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。结论:雷公藤内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

低分化鼻咽癌细胞系及其2个单克隆株浸润羊膜的电镜观察

利用电镜比较观察了经细胞培养的低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)及其2个单克隆株(4-2-H_5,5-1-F_1)对羊膜浸润的特点和浸润能力,结果表明:4-2-H_5及CNE-2Z浸润羊膜的能力比5-1-F_1强;浸润羊膜具有粘附、伸出伪足、溶解破坏及侵入羊膜等几个阶段;讨论了浸润羊膜的某些机理。     

应用抑制消减杂交技术克隆鼻咽癌转移调控基因

目的：分离并鉴定高低转移表型不同的人鼻咽癌细胞株差异表达cDNA序列,了解鼻咽癌转移抑制基因或具有抑制活性的核苷酸序列。方法：以具有高低转移潜能不同的人鼻咽癌细胞株为研究对象,应用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）和T／A克隆法构建差异表达cDNA消减文库,对差异表达的cDNA进行测序和生物信息学分析。结果：成功构建人鼻咽癌细胞克隆株差异表达cDNA消减文库,从随机测序10个克隆中获得6个在低转移鼻咽癌细胞株中高表达cDNA序列,它们都与已知的人类基因片段具有高度同源性。结论：应用抑制消减杂交技术,从一对具有高低转移表型差异的鼻咽癌细胞株中获得6条可能与肿瘤转移抑制相关的cDNA序列,它们可能在维持肿瘤细胞的稳定和抑制肿瘤转移中起重要作用。     

人低分化鼻咽癌细胞克隆亚系的分离及生长特性观察

应用有限稀释法，从人低分化鼻咽癌上皮细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）中分离出２５个克隆亚系。根据细胞电泳率，筛途出３个电泳率差异较大的克隆亚系（Ｈ５、Ｆ１和Ｆ７），并对其生长特性进行观察，发现细胞电泳率大的克隆亚系较电泳率小的克隆亚系生长能力强，而母系的细胞电泳率及细胞生长能力均居于中等。