规模化种鸡场禽流感H9亚型的防控研究

禽流感H9亚型病毒是低致病性病毒,感染鸡群若无并发症,死亡率不高.单独感染临床表现主要为呼吸道症状。本文就某种鸡场防控禽流感H9亚型病毒的经验和抗体的血凝抑制效价的监测结果继续介绍。该规模场的鸡群在13日龄,35日龄,170日龄进行H9的免疫,不同日龄(1,5,17,24,31,37,48,55,72,87,95,105,111,122,135,150,164,175,185,192,205,222,236,243,255,265,275,290,310,325,334,350,368,391)的鸡群进行抗体检测,共采集样本4928份,抗体均值(HI Log2)分别为9.1,4.7,5.3,2.6,4.0,4.7,7.6,6.8,9.7,10.4,8.9,9.6,11.7,9.5,11.1,11.6,11.5,11.2,10.9,11.5,12.1,10.9,10.2,10.4,11.7,10.2,10.8,11.5,10.0,11.0,9.7,10.6,10.8,10.7,9.9。从防控结果看,临床无禽流感H9亚型感染症状.结果显示免疫禽流感H9疫苗后,可以产生较高的H9抗体,能达到防控禽流感H9亚型病毒感染鸡群的目的.     

免疫增强剂提高禽流感疫苗效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对鸡的免疫效力,将不同剂量免疫增强剂与H9禽流感抗原混合后制备疫苗,评价对SPF鸡的免疫效力。根据筛选结果,将最适剂量的免疫增强剂与H9禽流感抗原以共同混合的形式配制疫苗,并将免疫增强剂以伴侣形式与H5或H9禽流感疫苗混匀免疫商品鸡,评价免疫增强效果。结果表明,免疫增强剂与H9疫苗共同混匀,或将免疫增强剂制备成疫苗伴侣形式与H5或H9商品疫苗共同混合免疫商品鸡,均能使H5或H9疫苗免疫后抗体提前1周达到7lg2,免疫后2~3周抗体效价显著高于不含免疫增强剂的常规疫苗组。该免疫增强剂能提高H5和H9亚型禽流感疫苗对鸡的免疫效力,具有较好的应用前景。     

3株广西麻雀源H9N2亚型禽流感病毒对SPF鸡的致病性

【目的】明确麻雀源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)对鸡群的致病性,既有利于了解麻雀在H9N2亚型AIV传播生态链中的作用,对科学防控H9N2亚型AIV的暴发流行也具有重要意义。【方法】选取3株HA基因处于不同进化分支的广西麻雀源H9N2亚型AIV进行SPF鸡致病性试验,将84羽4周龄SPF鸡随机均分为4组(空白对照组和3个感染组)。感染组每组以100μL稀释至106EID₅₀/100μL的病毒液经鼻腔感染16羽SPF鸡,于病毒感染24 h后分别在各感染组放入剩余的5羽SPF鸡作为空白接触组,感染后观察鸡群的临床症状及剖检病理变化,在不同时间点采集器官组织制作病理切片并检测不同器官中的病毒滴度及分布情况。【结果】3株麻雀源H9N2亚型AIV在HA蛋白裂解位点处不存在多个碱性氨基酸插入现象,表现为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV(LPAIV)的典型分子特征;对鸡胚的半数感染量(EID₅₀)在10-6.0/0.2 mL~10-6.8/0.2 mL,半数致死量(ELD₅₀)在10-6.8/0.2 mL~10-7.2/0.2 mL。3株H9N2亚型AIV均可直接感染SPF鸡,且病毒在不同器官中的滴度及分布存在一定差异;感染SPF鸡后均未表现出明显的临床症状和死亡现象,但在上呼吸道的气管及肺脏出现一定程度的充血和出血、气管纤毛脱落及炎性淋巴细胞浸润等病变。3株麻雀源H9N2亚型AIV感染SPF鸡后的排毒期主要介于第1~7 d,且能不经体内适应而直接感染鸡群并排毒;3株麻雀源H9N2亚型AIV在SPF鸡各器官中的复制能力存在一定差异,可在气管和肺脏中进行有效复制,而在肝脏、脑、胰腺、胸腺、心脏、盲肠扁桃体及法氏囊中均未检测到对应的病毒。【结论】麻雀源H9N2亚型AIV可直接感染鸡群且具有在鸡群间水平传播的潜在风险,提示在家禽饲养、运输及销售等环节要做好相关的防护措施,切断AIV在野鸟与家禽间的传播途径,减少禽流感暴发造成的经济损失。     

H9N2亚型禽流感病毒株的分离和鉴定

用非免疫鸡胚从病死鸡的脑组织中分离到禽流感病毒。此病毒能凝集鸡红细胞,而且这种凝集可以被特异性抗血清所抑制。通过对分离株进行血清学试验、最小致死量致死鸡胚平均死亡时间测定、鸡致病力试验、回归试验,证明该分离株为H9N2亚型禽流感病毒。     

广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及遗传进化分析

[目的]明确广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子遗传变异规律及其对公共卫生安全的影响,为H9亚型禽流感(AI)的防控提供参考依据.[方法]从广西某肉鸡养殖场采集病料,经SPF鸡胚接种进行病毒分离,对初步鉴定为H9亚型AIV分离株的HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M和NS等8个基因片段进行克隆测定及遗传进化分析,同时对分离毒株的生物学特性进行测定.[结果]从广西发病鸡群中分离获得一株H9N2亚型AIV,命名为A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2).分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)HA基因的裂解位点为PSRSSR↓GLF,具有典型的低致病性AIV(LPAIV)分子特征,在遗传进化关系上属于4.2.5分支,与国内常用H9N2亚型AIV疫苗株所属的4.2.3分支存在一定差异;其他7个基因也分别来源于不同的AIV亚型.分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016 (H9N2)同时具备与α-2,3唾液酸和α-2,6唾液酸受体结合的特性,且具有感染人类的潜在风险;其感染鸡群后病毒分布主要集中在气管、肺脏和脾脏,可通过呼吸道和消化道同时排毒,且在攻毒后第1d即开始排毒,第5d为排毒高峰.[结论]从广西发病鸡群中分离获得的A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)属于LPAIV,是由不同亚型AIV重组产生的H9N2亚型新毒株,可导致鸡群疫苗免疫失败,且具有感染人类的潜在风险.     

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查

为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。     

长葛市某蛋鸡场高致病性禽流感疫苗免疫效果分析

禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病,疫苗免疫接种是预防禽流感最经济、有效的手段,为探讨高致病性禽流感疫苗的免疫效果,长葛市某蛋鸡场采用H5亚型禽流感三价灭活疫苗对17日龄鸡群进行首免,对55日龄鸡群进行二免,对124日龄鸡群进行三免,对鸡群免疫后的抗体水平进行了监测与分析。结果显示首免后39天,H5亚型Re-6抗体平均值(log2)达到3.9,二免后16天、32天、48天、63天鸡群H5亚型Re-6抗体平均值(log2)分别达到6.1、7.8、7.0、6.9,三免后9天、24天、39天鸡群H5亚型Re-6抗体平均值(log2)分别达到7.6、8.5、8.0。经过三次免疫之后,鸡群抗体值均达到较高水平,该养殖场的免疫程序对鸡群起到良好的免疫保护效果。     

免疫增强剂对禽流感疫苗免疫持续期、安全性和鸡淋巴细胞转化的影响

在配制H9亚型禽流感疫苗过程中添加免疫增强剂VA5制成VA5-H9疫苗免疫鸡,或将VA5制备成油乳剂以疫苗伴侣形式与商品化H5亚型禽流感疫苗混合(VA5-H5)后免疫鸡,监测鸡的抗体持续期、疫苗安全性和鸡淋巴细胞的转化情况。抗体检测结果表明,VA5与H5或H9亚型禽流感疫苗混用能有效延长抗体持续期4周,H5抗体提前1周达到7lg2。安全性研究表明,以VA5-H9疫苗经一次单剂量、一次2倍剂量和单剂量间隔2周重复免疫这3种方式免疫鸡后,含VA5的疫苗与常规疫苗的吸收类似,说明VA5不影响鸡体对疫苗的吸收。淋巴细胞转化试验结果显示,VA5能提高免疫鸡淋巴细胞转化效率。可知,获得的VA5免疫增强剂能有效延长抗体持续期,且不影响疫苗的安全性,并提高免疫鸡的淋巴细胞转化活性。     

鸡白细胞介素-18对H9亚型禽流感灭活油乳苗的免疫增强作用

[目的]探索鸡白细胞介素-18（IL-18）在H9禽流感（AI）灭活油乳苗免疫中的免疫佐剂作用.[方法]从鸡脾淋巴细胞中克隆鸡IL-18基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建真核表达质粒pIL-18.将重组真核表达质粒pIL-18、H9亚型AI灭活油乳苗及其二者联合分别免疫14日龄SPF鸡,检测其细胞免疫和体液免疫水平,评价鸡IL-18在H9亚型禽流感灭活油乳苗中的免疫增强作用.[结果]成功克隆了鸡IL-18全基因,大小为597 bp.质粒pIL-18和H9亚型AI灭活油乳苗联合免疫的SPF鸡所产生的HI抗体效价在接种第4周后明显高于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组;其T淋巴细胞的增殖反应也强于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组.[结论]质粒pIL-18能提高H9亚型禽流感灭活油乳苗诱发的免疫应答,为研究防制禽流感的新型疫苗提供了新思路.     

禽流感病毒疫苗免疫效果的分析

通过检测免疫禽流感病毒后禽类所产生抗体滴度,并进行比较和分析,结果发现,蛋鸡在85日龄左右进行禽流感疫苗免疫效果最佳(P0.01),H5亚型禽流感免疫鸡和鸽其抗体滴度达到了5以上,而对鹌鹑和鸭几乎没有效果;单价禽流感疫苗和多价苗对鸡群免疫的效果不同,多价苗的免疫效果不如单价苗。     

肉鸽H9亚型禽流感的诊断与病毒分离及鉴定

通过分子PCR检测,初步证明在湖北一发病肉鸽群感染H9亚型禽流感病毒。病原分离后,盲传3代,其血凝效价达到109~1011,经生物学特性进行测定,其鸡胚半数致死量为107.5,9日龄鸡胚平均致死时间为54.3 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数为1.8,6周龄小鸡静脉接种致病指数为2.0,证明该H9亚型禽流感为毒力较强。将该病毒回归非免疫肉鸽,能产生典型的H9亚型禽流感症状,采集其肺、喉头、泄殖腔等病变组织进行病毒分离,均可分离到H9亚型AIV。     

做好禽流感传染病防控工作的思考与建议

正1禽流感的症状与传播途径1.1症状。禽流感病毒,属于甲型流感病毒,根据禽流感病毒对鸡和火鸡的致病性的不同,分为高、中、低/非致病性三级.目前研究发现,人感染禽流感的传染源为携带病毒的禽类。既往确认感染人的禽流感病毒有H5N1、H9N2、H7N2、H7N3、H7N7、H5N2、H10N7,症状表现各不相同。1.2传播途径。研究认为,人感染H5N1亚型禽流感的主要途径是密切接触病死禽,高危行为包括宰杀、拔毛和加工被     

禽多杀性巴氏杆菌、H9亚型禽流感二联灭活疫苗研制及免疫效力试验

采用鸡胚共同增殖禽多杀性巴氏杆菌和H9亚型禽流感病毒的方法制备的抗原中含巴氏杆菌数≥4×1010CFU/mL、H9亚型禽流感病毒含量≥109.38EID50/mL,经灭活后制备3批二联灭活疫苗并进行了相关检验。结果表明,所研制的3批二联疫苗的物理性状、无菌检验以及安全检验均符合相关质量标准;用3批疫苗分别免疫试验鸡和试验鸭,21 d后对禽多杀性巴氏杆菌免疫保护率均为90%以上,对H9亚型禽流感免疫保护率均为85%以上。     

H9N2亚型禽流感可疑病料的病毒分离及初步鉴定

通过对H9N2亚型禽流感可疑病料的病毒分离、RNA提取、PCR扩增、基因测序以及SPF鸡回归感染试验、鸡胚接种试验并收取尿囊液进行二次测序对比等,初步证明病料中含有H9N2亚型禽流感病毒。研究所用方法及操作理论可为实际生产提供预防及治疗的意见与建议。生产时应加强饲养管理,根据具体情况制定管理方案;认真执行各项隔离制度,防止传染源的传入与传播;定期消毒,降低环境中病毒的含量。实施全进全出的饲养管理制度,避免各种日龄的家禽混养,此外,应建立有效的监测系统。     

应用RT-PCR和病毒学方法检测低致病力禽流感感染的研究

分别应用病毒分离和鉴定试验以及禽流感病毒(AIV)型特异性RT-PCR技术,对疑似H9亚型AIV感染的10份病死鸡组织病料进行了实验室诊断。结果有7份病例用上述两种方法检测均为阳性;2份病料仅分离到H9亚型AIV;1份病例仅H9亚型RT-PCR阳性。研究表明,对于H9亚型AIV临床组织样品的检测,病毒分离试验的敏感度高于RT-PCR。当检测因运输或消毒药物作用而导致病料中病毒死亡的H9亚型AI临床病例时,RT-PCR有明显的优势。将RT-PCR和病毒分离鉴定两种方法相结合,可提高临床样本的H9亚型AIV的检出率。     

中药制剂SHY对新城疫、禽流感H9、H5亚型病毒的抑制和攻毒保护效果

本试验利用蔷薇科植物提取物（SHY）分别与新城疫、禽流感H9、H5亚型病毒作用后,接种10 d SPF鸡胚,评价SHY对病毒的抑制作用;给21 d SPF鸡连续口服该中药提取物5 d后,分别用新城疫、禽流感病毒攻击,观察对SPF鸡的保护作用.结果表明：SHY测试剂量对SPF鸡胚没有毒性;20、10、5和2.5 mg/mL提取物与一定量的新城疫、禽流感H9亚型病毒作用后,鸡胚全部存活,病毒测定为阴性;与禽流感H5亚型病毒作用后,2.5 mg/mL组不能完全保护鸡胚存活（6/8）,病毒分离阳性.在攻毒试验中,SPF鸡分别按60、50、40和20 mg口服后,用新城疫和禽流感H9亚型攻毒保护分别为5/5、5/5、5/5和4/5.显示SHY不但能显著抑制新城疫、禽流感H9和H5亚型在鸡胚上增殖,而且能保护新城疫、禽流感H9亚型病毒的攻击.对SHY深入的研究,有望开发出有效抗禽流感药物.     

防控高致病性禽流感的主要措施

高致病性禽流感可引起各种日龄、各种品种的鸡发病。易感鸡群与发病鸡群或其污染物品的接触可造成鸡群感染;也可通过空气经呼吸道为传播途径感染鸡群。鸡群饲养管理不善、营养状况不良、生物安全措施不严、免疫状况不佳、鸡只散养、发病鸡的淘汰和运输处理不当以及人员流动、活鸡交易行为、环境应激因素等都是本病传播的重要原因。防控禽流感,健全和强化生物安全措施是基础,实施综合性防治是关键。     

抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

以H9亚型禽流感病毒免疫Balb／C小鼠，细胞融合后用血凝抑制试验检测细胞培养上清，结果获得3株阳性细胞株，分别命名为6E6、6B6、5B4。经2次亚克隆后，所有杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感H9亚型特异抗体的能力。特异性试验证明，3株单克隆抗体仅与试验的H9病毒株反应，与H5亚型禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鹅源腺病毒等不反应。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明，3株单克隆细胞的上清均能与感染H9亚型病毒的鸡成纤维细胞呈特异性绿色荧光反应。实验性病毒检测结果表明，IFA方法检测H9禽流感比鸡胚接种分离病毒的效果好、灵敏度高，是一种经济实用的方法。获得的单克隆抗体可在禽流感流行病学的监测及预警预报中发挥重要作用。     

H9亚型禽流感SPF鸡发病模型的构建

为了构建理想的H9亚型禽流感病毒(AIV) SPF鸡发病模型,对不同日龄SPF鸡、不同感染方法进行了预试验,最后选用SPF青年蛋鸡为试验动物,采用AIV H9N2毒株与大肠杆菌强毒株、IBV M41株各0. 5m L联合滴鼻感染的方法,进行了发病模型构建。结果表明,试验鸡发病症状明显、病变典型,这为进一步完成H9亚型禽流感防治药物的临床疗效评价奠定了基础。     

免疫金探针快速检测禽流感病毒研究

本试验将兔抗禽流感H5、H9亚型病毒抗体纯化后,分别与制备的胶体金研制成免疫金探针,用改良的渗滤法安全快速地检测被检材料中禽流感H5、H9亚型病毒。试验表明,该法对禽流感H5、H9亚型病毒的检测灵敏度分别为1.62μg.ml-1和1.25μg.ml-1。对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。阻断试验和交叉试验表明该法有很高的特异性。对禽流感H9亚型病毒人工发病鸡的病毒检测阳性率为70%,与临床疑似病例禽流感病毒分离的阳性符合率为100%。