微滴式数字PCR定量检测鸡毒支原体方法的建立

为建立微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）定量检测鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）方法,以MG的mgpc基因序列为目的序列,在其保守区域内设计合成了1对特异性引物和1条探针,通过各反应条件优化,建立了检测MG的ddPCR方法,并测定了建立方法的特异性、敏感性以及重复性。结果显示：建立方法的最佳引物浓度为20 μmol/μL,探针浓度为10 μmol/μL,退火温度为55 ℃;该方法只检出MG,没有检出鸡滑液囊支原体、禽衣阿华支原体、禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽脑脊髓炎病毒、禽偏肺炎病毒、禽呼肠孤病毒、鸡沙门氏菌和鸡大肠杆菌,且相互间没有交叉反应;本方法最低检测MG重组质粒标准品的检测限为3.9拷贝/μL。重组质粒标准品浓度在3.9~41 025拷贝/μL范围内,绘制的ddPCR绝对定量曲线与测得值呈良好的线性关系（R2 = 0.999）;3次重复检测试验结果的变异系数均小于5%。对采集的60份病鸡喉拭子、气囊拭子及肺样品进行MG检测,结果ddPCR方法的阳性检出率（15.0%）高于荧光定量PCR方法（13.3%）。结果表明,本研究建立的ddPCR方法定量检测MG特异性强,灵敏度高,重复性好,为绝对定量检测MG提供了技术手段。     

论我国城市房屋拆迁中的政府角色定位

在我国城市拆迁中,由于城市房屋拆迁运作机制的不完善,存在很多矛盾和纠纷。主要存在着公共利益的界定、拆迁的强制性和政府的保护性困境等制度性障碍,同时政府在拆迁过程中可能会因为拆迁许可等行政审批中出现的受贿行为和保护违规拆迁人获得个人好处。本文通过运用新公共管理的相关理论和政府管制理论进行分析,提出了注重公共利益的科学表达,加强政府的监管和谨慎地使用行政强制拆迁、加强立法规范政府行政行为以防止权力寻租等政策建议。     

硅肥对冬小麦磷素吸收转运的影响

研究了大田条件下硅对小麦(Triticum aestivum L.济麦22)干物质积累与分配比例,磷吸收转运的影响。结果表明:施用硅酸钾肥料促进作物对P的吸收与利用,从而促进小麦生长和提高生物量;在适宜的硅酸钾肥料施用量90 kg hm^-2下,小麦地上部干物质积累及分配表现出最优,不适宜的硅酸钾肥料施用量将不利于穗形成期干物质在穗部的优先分配;小麦总硅吸收量与总磷吸收量呈显著线性相关;穗中13.8%～28.3%的磷素是靠秸秆转运而来,施硅肥显著促进了磷素在穗的累积,且累积量随着施硅肥增加而降低,各施硅肥处理的磷素转运效率在36.6%～44.3%之间,随着施硅肥量增加而降低。本研究表明,在土壤酸化严重的胶东地区,推荐T2处理(90 kg硅酸钾hm^-2),能取得较好的小麦增产效果。     

鸡传染性支气管炎病毒广西流行株3种主要结构蛋白基因的遗传变异分析

为了解鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株的遗传变异情况,应用RT-PCR方法对2004-2007年的7株广西IBV分离株的纤突蛋白S1基因、核(N)蛋白和膜(M)蛋白基因进行扩增、克隆、测序和同源性比较及系统进化分析。结果显示广西IBV分离株S1基因存在广泛的基因点突变,部分毒株出现基因插入和缺失,分离株之间氨基酸同源性为74.2%～98.7%;N基因无插入和缺失,但存在基因点突变,分离株之间氨基酸同源性为91.7%～99.3%;M基因存在点突变和插入现象,分离株之间氨基酸同源性为90.7%～98.2%。以疫苗株H120为参照,广西IBV分离株的S1、N和M基因都出现了变异,其中S1基因变异程度最大。7株广西IBV在S1、N和M基因氨基酸序列系统进化树中分别集中在2、3和3个基因群中,其中4株的S1、N和M基因分型结果不一致。结果表明广西IBV分离株的S1、N和M基因已发生变异,广西IBV存在广泛的基因突变、缺失或插入现象。研究的结果提示流行株的遗传变异可能是目前影响疫苗免疫效果的主要原因。     

铁冬青物候观测

在雷州半岛建立固定样地对铁冬青的形态特征、生物学特性、物候规律及生长规律等进行观测研究。结果表明:(1)铁冬青人工林的开花、结实和果实成熟期比天然林略早,低纬度、阳坡比高纬度、阴坡的种子成熟期提早15~20 d;铁冬青的人工林一般10年生开始开花结实,花芽形成期在2—3月,3月中旬开始开花,4月为盛花期,5月上旬—7月幼果形成,11月下旬—翌年2月果实成熟。(2)铁冬青天然林种子比人工林的种子发芽率高,孤立木种子比纯林的种子发芽率明显高,老树比幼树种子发芽率高,而不同种源间发芽率、发芽时间差异不明显。(3)2年生的铁冬青的生长随着气温与降雨量增大而加快,铁冬青的树高、地径与冠幅的生长高峰期出现于7月、8月和9月,这3个月占全年生长量的60%左右。     

黄河三角洲重度盐碱地甜高粱品种筛选和配套施肥技术研究[ ]

本研究以中科院科甜系列甜高粱为研究对象，针对重度盐碱地，从种植品种、肥料配比和有机肥类别三个方面进行试验，目的为了探索重度盐碱地甜高粱的种植技术，为黄河三角洲重度盐碱地甜高粱的栽培推广提供理论依据和技术支持。结果表明:（1）种植资源评比试验:在重度盐碱地对科甜13（KT13）、22（KT22）、41（KT41）、42（KT42）、43（KT43）5个甜高粱种质资源进行资源评比，KT41产量最高，达到82.87 t/hm2，KT13其次，产量为66.28 t/hm2。（2）重度盐碱地肥料配比试验:底肥施加300kg/hm2复合肥和15t/ hm2有机肥（H1Y1）、30t/ hm2有机肥（H0Y2）；300kg /hm2复合肥和30t/ hm2有机肥（H1Y2）均能显著提升重度盐碱地甜高粱产量，H0Y2处理产量最高，达到73.16t/hm2，相比于对照增幅达到64%。（3）重度盐碱地有机肥类别试验:施加牛粪、有机肥和海藻肥均能提升重度盐碱地中甜高粱产量，在相同投入成本下，海藻肥处理的产量最高为67.88 t/hm2，相比于对照处理增幅39.8%。综上考虑，在黄河三角洲重度盐碱地可选择KT13和KT41两个耐盐碱资源，底肥中施加15 t/hm2以上的普通有机肥或者牛粪同时配施复合肥，有机肥可选择微生物有效活菌数≥5亿/g的高品质海藻肥替代普通有机肥，进行甜高粱种植能获得较好的产量。     

河南省部分地区猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分子流行病学调查

为掌握河南省猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分布和流行情况，对2013-2018年从河南省内分离的856株大肠杆菌进行floR、CTX-M、mcr-1等三种耐药基因筛查检测，调查其分布特征，并对猪源大肠杆菌耐药基因在郑州、开封、焦作、许昌四个地区的分布和流行趋势进行了分析研究。结果显示，2013-2018年floR基因的检出率一直保持在较高水平，CTX-M基因的检出率持续增长，mcr-1基因的检出率在2014年达到最高，之后逐年下降，直到2018年未检出，并且不同地区耐药基因的流行趋势有一定差异。     

鸡传染性支气管炎病毒快速诊断方法的建立

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性的呼吸道疾病,不同日龄、性别、品种鸡均可易感.IB为世界动物卫生组织及我国规定的家禽B类传染病,也是至今严重危害我国养禽业的疫病之一.IBV可破坏呼吸道黏膜的完整性,促进其他条件性疾病如支原体混合感染以及大肠杆菌等继发感染而提高鸡群的死亡率.     

一株鸭源H1N6亚型禽流感病毒的分离鉴定及HA和NA基因序列分析

为了解禽流感病毒(AIV)在广西中越边境地区的流行情况,本研究在该地区活禽市场开展禽流感病原监测。监测过程中分离鉴定出1株H1N6亚型禽流感病毒,命名为A/Duck/Guangxi/F01/2016(H1N6),对其HA和NA基因进行序列测定,并与GenBank中下载的相关参考序列进行比对和遗传进化分析。结果显示,分离株HA基因与A/sparrow/Guangxi/GXs-1/2012(H1N2)的核苷酸同源性最高(96.9%),NA基因与A/Pavo cristatus/Jiangxi/JA1/2016(H5N6)的核苷酸同源性最高(98.2%)。HA基因裂解位点氨基酸序列为PSIQSR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒分子特征;与部分N6亚型禽流感病毒一样,分离株NA基因有11个氨基酸缺失。此外,本研究还对分离毒株的受体亲和性进行了测定,结果显示该病毒优先结合唾液酸α-2,3-Gal受体。本研究结果表明A/Duck/Guangxi/F01/2016(H1N6)是一株重组低致病性禽流感病毒。     

牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立

为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvr C基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。