饲料和饲料原料中致泻性大肠杆菌的检测

[目的]了解饲料及饲料原料中致泻性大肠杆菌的污染情况。[方法]2015—2016年,应用多重PCR技术对463批饲料及饲料原料中致泻性大肠杆菌进行检测。[结果]463批样品共检出12批阳性样品,检出率为2.6%,其中以EPEC、ETEC、EHEC为主。EPEC阳性样品7批,阳性率1.50%;ETEC阳性样品3批,阳性率0.65%;EHEC阳性样品2批,阳性率0.43%。[结论]饲料和饲料原料中致泻性大肠杆菌污染比较严重,应进一步加强管理。     

河南省部分地区猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分子流行病学调查

为掌握河南省猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分布和流行情况，对2013-2018年从河南省内分离的856株大肠杆菌进行floR、CTX-M、mcr-1等三种耐药基因筛查检测，调查其分布特征，并对猪源大肠杆菌耐药基因在郑州、开封、焦作、许昌四个地区的分布和流行趋势进行了分析研究。结果显示，2013-2018年floR基因的检出率一直保持在较高水平，CTX-M基因的检出率持续增长，mcr-1基因的检出率在2014年达到最高，之后逐年下降，直到2018年未检出，并且不同地区耐药基因的流行趋势有一定差异。     

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定饲料中地昔尼尔

实验建立了超高效液相色谱-串联质谱测定饲料中地昔尼尔的方法。饲料样品经过乙腈提取,取部分上清液氮气吹干,用20%甲醇溶液(含0.2%甲酸)溶解,经过Waters Oasis MCX固相萃取小柱净化,然后用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm i.d.,1.8μm)分离,以甲醇和水为流动相进行洗脱,外标法定量。对前处理及液相色谱和质谱条件进行优化。结果表明,地昔尼尔质量浓度在1～500μg/l范围内线性良好,相关系数大于0.998;在10～200μg/kg的添加水平,平均加标回收率为74.2%～83.8%;相对标准偏差为5.5%～7.5%;方法的检出限低至1.0μg/kg,定量下限低至2.0μg/kg。该方法灵敏、稳定性好,可满足饲料中地昔尼尔的检测与确证的要求。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量

该试验建立了使用超高效液相色谱-串联四极杆质谱测定原料乳和奶粉中三聚氰胺含量的检测方法.用三氯乙酸溶液和乙酸铅提取,提取液经MCX固相萃取柱净化后用UPLC-MS-MS进行检测.色谱条件:CAPCELL PAK CR1:4柱(2.0 mm×100 mmi.d.,5 μm),流动相:乙腈-0.01 mol/L乙酸铵溶液,梯度洗脱流速0.3ml/min.采用正离子模式的电喷雾质谱检测,以一级质谱得到的准分子离子m/z 126.8作为母离子,进行碰撞诱导解离(CID)二级质谱(MS2)分析,选择母离子和MS2的碎片离子m/z 84.9、67.8定性确证.提取m/z 84.9离子质量色谱峰面积定量.基质标准线性范围为0.01～1.00 μg/ml,检出限10 μg/kg(S/N=10),原料乳回收率为82.4%～97.8%,奶粉回收率为80.7%～95.7%.     

河南省鸡源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为了掌握河南省鸡源大肠杆菌的耐药性情况,从规模化鸡场抽取样品120批,通过细菌的分离、纯化,采用BD Phoenix^TM-100全自动微生物鉴定系统对分离的大肠杆菌进行鉴定,并通过微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性分析。结果显示,共分离菌株100株,分离率为83.3%。分离菌株对四环素、氨苄西林、磺胺异噁唑、恩诺沙星、复方新诺明耐药严重,耐药率均在80%以上,表明河南省鸡源大肠杆菌耐药情况较为严重。     

新乡地区部分鸡场鸡大肠杆菌分离鉴定和药敏试验

鸡大肠杆菌病现今在我国养殖业内非常普遍,且高死亡率给养殖业带来了巨大的损失,由于抗生素使用不当,导致细菌耐药性问题形势严峻。试验采集新乡地区部分鸡场疑似大肠杆菌病鸡样品26份,检测结果均阳性。随机选择9株菌株进行耐药性检测,结果显示此地区大肠杆菌对卡那霉素、多粘菌素、庆大霉素、磺胺甲噁唑耐药率均为100%,对其余8种药物均表现出高敏感性。试验为新乡地区养殖鸡时的临床用药提供了理论依据,提高了疗效,减少了耐药性的产生。     

氟苯尼考粉中非法添加四种喹诺酮类药物的HPLC检测方法研究

建立了高效液相色谱法检测氟苯尼考粉中非法添加氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的方法.用十八烷基键合硅胶色谱柱,以A(磷酸3.0 mL加水至1000 mL,三乙胺调pH值至3.0±0.1,加乙腈50 mL)-甲醇(88:12)为流动相,采用二极管阵列检测器,采集波长为200 ～400nm,分辨率1.2 am,记录光谱图和283 nm波长处的色谱图,流速1.0 mL/min,柱温30℃.结果显示,4种喹诺酮类药物的浓度在0.5 ～ 200 μg/mL范围内呈良好的线性关系,添加回收率在98.5％ ～100.9％之间,相对标准偏差在0.14％ ～ 0.74％之间,检测限0.5 mg/g.本方法快速、准确,可用于氟苯尼考粉中非法添加喹诺酮类药物的定性和定量检测.     

HPLC法测定麻杏石甘散中苦杏仁苷的含量

建立HPLC法测定麻杏石甘散中苦杏仁苷含量的方法。色谱柱为Waters XBrige^TM C18（4．6mm×150mm。5μm）;以水-甲醇-乙腈（90．0：1．0：9．0）为流动相;流速：1．0mL／min;柱温：40℃;检测波长：207nm．苦杏仁苷的线性范围为1．6008×104-8．004×104μg,R2=1．0000,平均回收率为97．26％（RSD为0．4％）。本方法快速、简便、准确,能有效测定麻杏石甘散中苦杏仁苷的含量。     

生鲜乳中单核细胞增生李斯特菌3种检测方法的比对

为确定生鲜乳中单核细胞增生李斯特菌的快速检测方法,以从河南省奶站及奶牛养殖场抽取的267批生鲜乳为检测对象,分别采用传统培养法、PCR检测法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法进行检测,并以传统培养法为参考标准,对检测结果进行比对确认。结果显示:常规的传统培养法检出阳性3份;PCR法检出阳性5份,经传统培养法确认阳性3份,符合率为60%;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检出阳性3份,经传统培养法全部确认为阳性,符合率为100%。结果表明,同传统培养法相比,PCR法容易产生假阳性结果,而基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法能够快速、准确检测生鲜乳中单核细胞增生李斯特菌,适合于大批量样品的快速检测。     

超高效液相色谱法测定饲料中地昔尼尔

本研究建立了超高效液相色谱测定饲料中地昔尼尔的方法。饲料样品经过乙腈提取,取5mL上清液氮气吹干,用20%甲醇溶液(含0.2%甲酸)溶解,经过Waters Oasis MCX固相萃取小柱净化,然后用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100mmi.d.,1.8μm)分离,以甲醇和水为流动相进行洗脱,外标法定量。结果表明,地昔尼尔质量浓度在0.05～100μg/mL内线性良好,相关系数大于0.9999;在10～200mg/kg的添加水平,平均加标回收率为78.0%～86.3%;相对标准偏差为4.2%～6.1%;方法的检出限低至0.05mg/kg,定量下限低至0.1mg/kg。该方法简单、快速、灵敏,可满足饲料中地昔尼尔的快速筛选检测的要求。