狂犬疫苗脂质体冻干粉制备及免疫原性研究

采用薄膜分散联合冻融冻干法制备狂犬疫苗脂质体冻干粉,以包封率为主要考察指标,通过正交试验确定制备的最佳工艺,并考察其粒度分布、包封率及免疫原性;用狂犬疫苗脂质体和疫苗原液分别免疫小鼠,快速荧光灶抑制试验法检测中和抗体,体外试验法检测淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪检测淋巴细胞表面标记。结果表明:通过工艺优化所制备的狂犬疫苗脂质体冻干粉复溶后呈圆形或椭圆形,粒度分布均匀,平均粒径约为4.36μm,包封率为82.96%;中和抗体产生情况在前14d疫苗脂质体组明显高于疫苗原液组,后28d2组产生的中和抗体情况相似;狂犬疫苗脂质体组的淋巴细胞增殖指数和小鼠CD4+/CD8+比例与疫苗原液组相比,差异均显著。证明狂犬疫苗脂质体能够较早地产生中和抗体以提高对机体的保护效力,其不仅可增强体液免疫且可增强细胞免疫。     

鸡新城疫壳聚糖微球疫苗的制备及免疫效果研究

 【目的】新城疫是禽类的一种急性、高度接触性传染病,是危害养禽业的首要疫病。疫苗免疫是控制该病的首选方法,但目前常用的弱毒活疫苗和灭活疫苗具有各自的缺点,在实际应用中具有一定的局限性。故本研究拟制备新城疫壳聚糖微球疫苗,以弥补弱毒活疫苗和灭活疫苗的不足。【方法】利用壳聚糖为囊材,新城疫病毒液为芯材,戊二醛为交联剂,选择适当的乳化体系,制备出粒径小、分散性好的新城疫微球疫苗。将新城疫壳聚糖微球疫苗与LaSota活疫苗和新城疫灭活疫苗分别免疫SPF鸡,利用MTT试验和血清IgG HI试验,分别检测不同疫苗免疫后的细胞免疫和体液免疫水平,并在血清抗体水平为3log2时进行攻毒试验。【结果】制备的新城疫壳聚糖微球疫苗平均粒径为5.83 μm,均匀度较好,免疫试验鸡后可刺激机体产生较强的细胞免疫和体液免疫,与另外两组数据比较均有显著差异;且微球疫苗免疫组对强毒株的攻毒产生了较好的保护。【结论】新城疫壳聚糖微球兼有弱毒活疫苗和灭活疫苗的优点,具有较好的免疫保护效果,是一种具有广阔应用前景的新型疫苗。     

血根碱壳聚糖微球的制备工艺优化及体内外性能研究

本研究旨在探讨血根碱壳聚糖微球的最优制备方法,并对微球进行外观粒径表征和体内外研究。本研究建立了血根碱含量测定的HPLC法,运用乳化交联法制备血根碱壳聚糖微球,以载药量、包封率和平均粒径为评价指标,应用单因素试验和星点设计-响应面法优化制备处方。利用显微镜和扫描电镜观察微球外观形态,通过激光粒度仪测定微球粒径及其分布。采用动态透析法取不同时间点的血根碱原料药溶液和血根碱壳聚糖微球溶液,并考察两种溶液的体外释放度,最后进行药动学方程拟合。对不同组小鼠注射血根碱原料液和血根碱微球液,不同时间取组织血测定,观察体内分布及靶向性。结果表明:血根碱HPLC含量测定得曲线方程y=2.530 0x+43.323 1(R²=0.999 8,线性范围为10.0～50.0μg/mL)。单因素试验和星点设计-响应面法得最优处方:血根碱投药量60 mg,壳聚糖用量70mg,乳化剂用量5%,戊二醇用量0.25mL、水油体积比3:10,醋酸浓度2%、搅拌速度500r/min和交联时间3.5h。观察到血根碱壳聚糖微球形态近似球形及表面较光滑,测定得平均粒径(8.17±0.16)μm,粒径分布为...     

胺基化磁性壳聚糖微球的制备及其对苹果渣多酚的吸附研究

【目的】以苹果渣中多酚类化合物为吸附模型,制备一种可有效吸附分离苹果多酚的磁性高分子材料,并研究其吸附性能。【方法】采用化学共沉淀法制得Fe₃O₄磁核,与壳聚糖混合均匀后利用反相悬浮交联法制得磁性壳聚糖微球,并进行胺基化改性;采用单因素试验得到制备胺基化磁性壳聚糖微球的最佳工艺参数;通过透射电镜、超顺磁性对Fe₃O₄磁核进行表征,利用扫描电镜对胺基化磁性壳聚糖微球的表面特征进行观察。【结果】胺基化磁性壳聚糖微球对苹果渣多酚的吸附效果最佳;制备胺基化磁性壳聚糖微球的工艺参数为：2 mL 体积分数25%的戊二醛、5 mL/g的环氧氯丙烷和3 mL/g的乙二胺,按此条件制备的胺基化磁性壳聚糖微球对苹果多酚的饱和吸附率达到81.94%;电镜观察表明,制得的胺基化磁性壳聚糖微球达到微米级,呈规则球形,有良好的分散性。【结论】胺基化磁性壳聚糖微球是一种良好的苹果渣多酚吸附剂,有较好的工业化应用前景。     

猪苓多糖脂质体的制备及表征

目的:旨在通过薄膜分散法-微孔滤膜挤压法制备脂质体,并对脂质体包封率、粒度分布、zeta电位进行检测。方法:主要通过单因素试验及正交试验筛选出最佳的制备工艺,且验证工艺的合理。脂质体利用薄膜分散法制备并测定包封率,考察脂质体的形态。结果:所制备出的猪苓多糖脂质体包封率较高,粒径均匀,显微镜下脂质体均匀圆整、近球形。     

4种多糖对口蹄疫疫苗免疫反应的影响

目的:该研究旨在探讨口服黄芪多糖、白术多糖、黄芩多糖和金银花多糖等4种多糖对小鼠注射口蹄疫疫苗 后体液免疫和细胞免疫反应的影响.方法:试验选取4~6周龄ICR小鼠42只,随机分为6组,每组7只.各试验 组小鼠分别灌服多糖或生理盐水,连续给药4d后,注射口蹄疫疫苗进行首次免疫,间隔14d后2次免疫.2免后2 周采集血清测定抗体质量分数,同时无菌取脾,制备脾细胞悬液,测定淋巴细胞增殖能力、细胞因子的表达水平和 CTL杀伤能力.结果:结果显示,与对照组相比在二免后14d,这4种多糖均不同程度促进了淋巴细胞增殖反应, 诱导产生了较高水平的IgG抗体,同时能够上调CD4 T 细胞IL-2,IL-4,IFN-γ和CD8 T 细胞IFN-γ的表达,并 增强了CTL反应.结论:免疫前口服这4种多糖均可提高Th1,Th2型免疫反应,进而增强小鼠的体液和细胞免疫 反应.该研究为增强口蹄疫疫苗的免疫应答提供了新途径,同时也表明受试的3种多糖均具备良好的佐剂潜力.     

PEG3000修饰的脂质体作为流感疫苗佐剂的研究

采用冻融-冻干法制备目标产品,用MTT法以刺激指数作为主要评价指标,通过单因素方差分析确定最佳处方;最佳处方制备的目标产品,通过腹腔免疫小鼠7、14和28 d后,用MTT法和表面标记法以刺激指数和CD4+/CD8+比值为评价指标进行细胞免疫原性研究;用微量血凝抑制法以抗体滴度比为评价指标检测体液免疫原性,探讨聚乙二醇(PEG)3000修饰的脂质体作为流感疫苗佐剂的最佳制备工艺和免疫原性。结果表明:PEG3000占卵磷脂的摩尔百分比为4%时,脂质体成膜后加入PEG3000制备的流感疫苗脂质体冻干粉为最佳处方;在1个免疫周期中, PEG3000修饰的流感疫苗脂质体组和其他组有显著差异(P0.05)。这说明最佳处方制备的PEG3000修饰流感疫苗脂质体免疫原性增强且免疫时效延长。     

啶虫脒/羧甲基壳聚糖缓释微球性能研究

[目的]探索啶虫脒/羧甲基壳聚糖缓释微球的最佳制备条件。[方法]以啶虫脒为囊心药物,以羧甲基壳聚糖-阿拉伯胶-明胶作为载体材料,采用锐孔法制备啶虫脒缓释凝胶微球,以包封率为参考指标,通过正交试验探究啶虫脒缓释微球的最佳制备条件,并探讨壳聚糖缓释微球对啶虫脒的缓释性能。[结果]啶虫脒缓释微球的最佳制备条件为：25 g/L羧甲基壳聚糖、羧甲基壳聚糖-啶虫脒的浓度比为2∶1、1.5%氯化钙、戊二醛浓度为5%。所制备的啶虫脒/羧甲基壳聚糖-阿拉伯胶-明胶缓释凝胶微球的包封率达48.56%,并具有很好的缓释性能,缓释时间达60 h以上。[结论]制得的羧甲基壳聚糖-阿拉伯胶-明胶微球对啶虫脒有控制释放的作用。     

甘草次酸脂质体对OVA免疫小鼠免疫应答的影响

为了观察甘草次酸被脂质体包封后其免疫增强作用的变化,选取100只小鼠,随机分成4组,分别用含有甘草次酸脂质体(GAL)、甘草次酸(GA)、空白脂质体(BL)和油佐剂(OIL)的卵清蛋白(OVA)免疫小鼠。采用ELISA法测定用OVA免疫的小鼠血清中免疫球蛋白Ig G及细胞因子IL-2,IFN-γ的浓度变化;采用MTT法测定脾淋巴细胞的增殖。结果表明,GAL能显著增加Ig G,IL-2和IFN-γ的浓度,促进淋巴细胞增殖,且效果好于GA,BL或油佐剂。表明GA经脂质体包封后,二者可协同增强免疫。     

北冬虫夏草超微粉对小鼠免疫功能的增强作用

用北冬虫夏草超微粉饲喂昆明种小鼠,观察小鼠胸腺指数、脾脏指数、脾淋巴细胞增殖能力和巨噬细胞吞噬能力等免疫功能的变化.结果显示:与对照(饲喂生理盐水)比较,低剂量(19.45 mg/kg)的北冬虫夏草超微粉能显著提高小鼠胸腺和脾脏指数、脾淋巴细胞增殖能力和巨噬细胞吞噬能力(P＜0.05),说明北冬虫夏草超微粉对小鼠免疫器官、细胞免疫功能和巨噬细胞功能有明显的增强作用;北冬虫夏草超微粉增强小鼠免疫功能的作用不随剂量的增加而增加.     

戊二醛改性壳聚糖的制备及其对雌激素吸附性能研究

以乙酸乙酯作为致孔剂,戊二醛作为改性剂,制备了改性壳聚糖微球,并对合成条件以及吸附性能进行了研究。结果表明:壳聚糖、乙酸乙酯、50%戊二醛为30:1:3条件下制得的改性壳聚糖微球吸附效果最佳;改性壳聚糖对雌二醇、此三醇和己烯雌酚均具有良好的吸附性能和较快的吸附速度,而对雌三醇的吸附性能最强。     

Sr－Fe－壳聚糖磁性纳米微球对亚甲基蓝的吸附效果

[目的]研究Sr-Fe-壳聚糖磁性纳米微球对亚甲基蓝的吸附效果。[方法]以SrFe_(12)O_(19)为内核、壳聚糖为外壳,制备了Sr-Fe-壳聚糖磁性纳米微球,将其用于对亚甲基蓝的吸附,并探讨了吸附时间、染料初始浓度、吸附剂投量、pH、温度等对吸附效果的影响。[结果]Sr-Fe-壳聚糖磁性纳米微球吸附过程基本在30 min内完成,且吸附率均达到96.3%;磁球对MB的吸附有较好的pH和温度适应性,在中性偏碱范围内(pH 7~11),25~50℃时,吸附率均保持96.0%以上;染料初始浓度为10~30 mg/L时,磁球吸附率随初始浓度的增加有轻微下降,但仍保持在95.2%以上;在染料初始浓度为30 mg/L时,磁球最佳投量为1.00 g/L,吸附率为97.4%;Sr-Fe-壳聚糖磁性纳米微球对亚甲基蓝的吸附符合Langmuir等温吸附方程,吸附过程符合准二级动力学方程特征。[结论]该研究为染料废水的吸附处理提供了一种新的材料与方法。     

GM-CSF与猪瘟病毒E2基因共表达载体的构建及其诱导的免疫应答

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对猪瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫应答诱导的影响,将CSFVE2基因和GM-CSF片段插入真核表达载体pcDNA3.0内构建pcE2,pcE2-GF及pcGF核酸疫苗.动物试验时,50只雌性供试小鼠随机分为5组,即pcE2,pcE2-GF,pcDNA3.0,pcGF,生理盐水组,每组10只.0,2,4周于小鼠左后肢胫前肌进行肌注免疫,质粒量为每只每次50μg.每次免疫前和末次免疫后2周尾静脉采血收集血清,ELISA检测血清内特异性IgG水平.末次免疫后1周每组随机选3只无菌取脾,MTT法检测淋巴细胞增殖情况.结果表明,与对照组比较,pcE2和pcE2-GF第3次免疫2周后,免疫小鼠IgG抗体水平逐渐增高,淋巴细胞的转化率也明显增高,且pcE2-GF免疫组的IgG抗体水平和淋巴细胞的转化率高于pcE2免疫组.可见,细胞因子GM-CSF可有效提高猪瘟病毒E2基因核酸疫苗的免疫应答.     

伊维菌素脂质体的制备工艺

为优化制备伊维菌素脂质体处方和工艺,选用薄膜分散—超声法制备伊维菌素脂质体,研究制膜旋转蒸发转速、有机溶剂以及洗膜震速等对伊维菌素脂质体包封率和稳定性的影响.确定出最佳制备试验条件:乙醚为有机溶剂,制膜旋转蒸发转速150r/min,洗膜震速50~100r/min.以正交试验法优选出制备伊维菌素脂质体的最佳工艺处方:磷脂与胆固醇的质量比为1∶0.1;伊维菌素与总脂质量比1∶10;PBS液的pH值7.0;水相体积比4∶3.按最佳试验条件和工艺处方制备的脂质体,最高包封率达到(84±1.6)%,工艺稳定,镜下观察脂质体形态圆整,粒径小而均匀,无游离结晶物.     

GM-CSF与SS融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖及GH和IGF-1分泌的影响

以小白鼠为试验对象,分别肌肉注射生理盐水及pcS/2SS、pGM-CSF/SS、pGM-CSF pcS/2SS质粒,每只50 μg,免疫后第3周以相同剂量加强免疫1次,测定不同质粒对小鼠淋巴细胞增殖反应及血浆生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)分泌水平,探讨GM-CSF对生长抑素DNA疫苗的免疫增强作用.结果表明: GM-CSF可增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,以pGM-CSF pcS/2SS组的增殖能力最强,显著高于pcS/2SS组和生理盐水组;同时注射2种表达质粒(pGM-CSF pcS/2SS)的GH分泌水平和融合表达质粒(pGM-CSF/SS)的IGF-1分泌水平明显高于生理盐水组和pcS/2SS免疫组.这证明GM-CSF对生长抑素DNA疫苗有一定的免疫增强作用,可促进生长抑素DNA疫苗的免疫反应,提高血浆GH和IGF-1的分泌水平.     

草鱼出血病细胞疫苗微囊制备与体外释放研究

以海藻酸钠、壳聚糖以及草鱼出血病细胞灭活疫苗为原材料,采用复凝聚法制备草鱼出血病口服微囊疫苗。通过单因素试验和正交试验,研究了海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度、氯化钙浓度以及加入疫苗体积对微囊疫苗包封率的影响,确定了其最佳制备工艺。结果显示,各因素对草鱼出血病微囊疫苗包封率的影响程度由大到小依次为：海藻酸钠浓度＞疫苗加入量＞壳聚糖浓度＞氯化钙浓度;制备草鱼出血病微囊疫苗的最佳工艺为：海藻酸钠浓度为1.5%,壳聚糖浓度为1%,氯化钙浓度为4%,加入疫苗体积为2 mL。该微囊疫苗平均粒径为（7.02±3.95）μm,平均包封率为60.53%,平均载蛋白量为8.12 mg/g,在pH 7.4的PBS溶液、生理盐水溶液中具有良好的释放性能。     

壳聚糖微球的制备及其固定化木瓜蛋白酶的研究

用来源丰富且廉价,并具有许多优良生物特性的壳聚糖为原料,以简单易行的服交联法制备壳聚糖微球,并对其性状进行和分析。结果表明：它复合了壳聚糖与高分子微球的功能,然后,以壳聚糖微球为载体,用吸附－交联的联合固定化方法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果显示：木瓜蛋白酶的最佳固定化条件是给酶量为１．９２ｍｇ／ｇ、４～８℃吸附１２ｈ,再用体积分数为０．５％的戊二醛溶于４～８℃交联     

壳聚糖为递送载体的鸭肠炎病毒gC基因疫苗诱导Balb/c小鼠

  【目的】探讨壳聚糖对鸭肠炎病毒（duck enteritis virus, DEV）gC基因疫苗免疫反应的影响。【方法】应用壳聚糖作为DEV gC基因疫苗（pcDNA-DEV-gC）递送载体,采用肌肉注射和口服单次免疫Balb/c小鼠50µg剂量基因疫苗,并以肌注不同剂量裸质粒组、弱毒组和生理盐水组作为对照,分别检测不同疫苗免疫后的细胞、体液和黏膜免疫水平。【结果】肌注壳聚糖疫苗组诱导小鼠产生较肌注裸质粒50µg组和口服壳聚糖疫苗组高的细胞和体液免疫反应,且产生与弱毒疫苗相似的细胞免疫应答,但弱毒疫苗诱导体液免疫的能力更强,仅口服壳聚糖疫苗组产生粘膜免疫。【结论】上述研究结果表明壳聚糖具有一定的佐剂效应,为获得更有效的DEV gC基因疫苗提供了新策略,但该疫苗的推广应用还有待于对影响疫苗免疫效果的各因素进行进一步优化。     

正交试验优选隐丹参酮脂质体的制备工艺

优化隐丹参酮脂质体的最佳制备工艺条件。采用溶剂分散法制备隐丹参酮脂质体,以包封率为指标,以药脂比、膜材比、反应温度和反应时间为因素,采用L9(34)正交试验设计对制备条件进行优选,透析法测定隐丹参酮脂质体的包封率,透射电镜和激光粒度仪测定其形态和粒径。溶剂分散法制备隐丹参酮脂质体的最佳工艺为:药脂质量比1∶20,膜材质量比4∶1,反应温度30℃,反应时间6min;平均包封率为(87.31±1.45)%;粒径集中分布在(176±5.65)nm,且隐丹参酮脂质体形态和粒径均匀,重现性好。     

林蛙油活性肽对小鼠免疫功能的影响

以林蛙油蛋白双酶水解超滤后获得的2种不同分子质量区间的活性肽BPOR1及BPOR2为试验原料,体外通过脾淋巴细胞增殖试验,分别加入不同剂量的BPOR1、BPOR2和Con A诱导,观察淋巴细胞的增殖情况,体内通过灌胃不同剂量BPOR1及BPOR2(100、300、600 mg·kg-1·d-1)30 d,以脾脏指数和胸腺指数的变化来观察2种活性肽对小鼠免疫器官的影响,利用流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群的变化情况。结果表明:BPOR1可明显地促进小鼠脾淋巴细胞增殖,且具有对Con A诱导的脾淋巴细胞增殖的协同刺激作用。2种混合肽对小鼠脾脏指数和胸腺指数比均有影响,并且都能影响小鼠CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的分布。可见,林蛙油活性肽能增加小鼠的免疫能力,且BPOR1的作用效果比BPOR2明显。