猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与LT蛋白配伍经黏膜途径接种小鼠免疫效果分析

旨在评价猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)活疫苗与大肠杆菌热敏性肠毒素(LT)蛋白配伍后经滴鼻途径接种小鼠后的免疫应答水平,分析猪繁殖与呼吸综合征活疫苗经黏膜途径免疫的可行性。试验共分为四组,分别为对照组、PRRSV滴鼻组、PRRSV+LT滴鼻组和PRRSV注射组。一免、二免后检测血清Ig G和鼻拭子Ig A抗体水平,同时检测IFN-γ和IL-10细胞因子的表达。结果表明:二免后,PRRSV+LT滴鼻组可产生较高水平的Ig G抗体,与PRRSV注射组无显著差异; PRRSV+LT滴鼻组产生的Ig A抗体水平明显高于PRRSV注射组; PRRSV+LT滴鼻组小鼠脾脏IFN-γ、IL-10水平与PRRSV注射组无显著差异。因此,猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与LT蛋白经滴鼻途径免疫小鼠,可产生理想的黏膜免疫应答及系统的体液免疫和细胞免疫反应。黏膜分泌性抗体的产生,为阻断病毒局部感染提供了保护屏障,能更有效达到抵抗病毒入侵及感染的目的。     

芥子碱降解菌对肉种鸡产蛋性能和免疫功能的影响

【目的】本试验研究一次性腹腔注射芥子碱降解菌1(sinapine-degrading bacteria 1,SDB1)对肉种鸡产蛋性能和免疫功能的影响。【方法】将324只50周龄肉种鸡,平均分成6组,每组6个重复,每个重复9只鸡。试验第1天,组1一次性腹腔注射1 m L生理盐水,组2~6分别一次性腹腔注射1 m L浓度为106、107、108、109、1010CFU/m L的SDB1菌液。试验期14 d,各组饲喂同一基础饲粮。试验结束后,测定产蛋性能、血清Ig M、Ig G、s Ig A、IL-1、IL-2、IFN-γ、C3、C4及外周血T淋巴细胞亚群。【结果】(1)低剂量组产蛋率显著(P0.05)高于高剂量组。(2)高剂量组血清Ig M、IL-1和IL-2水平显著(P0.05)高于低剂量组。(3)各组血清Ig G、s Ig A、C3、C4、IFN-γ和外周血CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+淋巴细胞比例差异不显著(P0.05)。【结论】低剂量SDB1(≤107CFU/m L)对肉种鸡产蛋性能和免疫功能没有不良影响,高剂量SDB1(≥108CFU/m L)能显著提高肉种鸡部分体液免疫和细胞因子水平,但会降低其产蛋性能。     

复方人参皂苷纳米乳对OVA接种小鼠免疫功能的影响

旨在研究口服复方人参皂苷纳米乳对抗原免疫效果的影响。将小鼠分为正常对照组、卵清白蛋白(OVA)对照组、空白纳米乳组、盐酸左旋咪唑纳米乳组、人参皂苷纳米乳组、人参皂苷-盐酸左旋咪唑水溶液组和复方人参皂苷纳米乳组(高、中、低剂量),皮下注射OVA抗原2次,在首次和第2次注射前3d连续灌胃给药,第2次注射后14d,测定血清(IgG、IgG1和IgG2a)抗体水平、脾细胞因子(IFN-γ和IL-4)水平以及脾淋巴细胞增殖刺激指数。结果表明,复方人参皂苷纳米乳中剂量(50mg·kg-1)组IL-4、IgG和IgG1水平显著或极显著高于复方人参皂苷纳米乳低剂量组和盐酸左旋咪唑纳米乳组,IFN-γ、IgG2a及OVA诱导脾淋巴细胞增殖刺激指数显著或极显著高于人参皂苷纳米乳组、人参皂苷-盐酸左旋咪唑水溶液组、盐酸左旋咪唑纳米乳组、复方人参皂苷纳米乳高剂量组和低剂量组。口服复方人参皂苷纳米乳能诱导OVA免疫小鼠产生Th1/Th2混合型免疫反应,表明人参皂苷和盐酸左旋咪唑能协同增强小鼠的细胞免疫和体液免疫功能。     

LT蛋白诱导小鼠脾脏IFN-γ变化规律研究

为研究大肠杆菌热敏性肠毒素(Escherichia coli heat-labile enterotoxin,LT)蛋白佐剂(野生型、突变型)对免疫小鼠体内细胞因子表达水平的影响,建立了检测干扰素(IFN-γ)的荧光定量PCR方法,并检测了经LT滴鼻免疫小鼠脾脏中IFN-γmRNA的表达水平。结果表明:野生型和突变型LT蛋白免疫小鼠脾脏中IFN-γ的mRNA水平呈时间依赖性升高,而PBS对照组没有明显变化。野生型LT蛋白免疫后48 h,小鼠脾脏IFN-γmmRNA的表达量与对照组相比显著上升并达到峰值,在60 h后开始下降;突变型LTRG蛋白免疫后60 h左右,IFN-γmRNA水平达到最高峰值,72 h后开始下降。本研究表明:野生型及突变型LT蛋白免疫小鼠均能增强小鼠脾脏中IFN-γ的转录表达,产生针对抗原的非特异性免疫应答。     

免疫增强剂提高H9亚型禽流感灭活疫苗在SPF鸡体中细胞因子的免疫应答

为探讨免疫增强剂(VA5)提高SPF鸡免疫功能的机理,将SPF鸡分别免疫H9亚型禽流感灭活疫苗、含VA5的H9灭活疫苗、含IL-4和/或IFN-γ真核质粒的H9亚型禽流感灭活疫苗,另设空白对照。检测免疫鸡外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群数目及IL-4和IFN-γ细胞因子含量的变化及血清抗体效价。结果显示,在14日龄、17日龄和21日龄和28日龄,免疫IL-4和H9、IL-4与IFN-γ和H9以及VA5佐剂与H9组的CD4~+淋巴细胞亚群上升快且比例高于其他组,免疫IFN-γ和H9、IL-4与IFN-γ和H9以及VA5增强剂与H9组的CD8~+淋巴细胞亚群上升快且比例高于其他组,IL-4的上升趋势与CD4~+细胞类似,IFN-γ的上升趋势与CD8~+类似。免疫含VA5的禽流感(H9亚型)灭活苗组在免疫后第2周、3周和4周血清HI效价达到7lg2以上,高于其他各免疫组。说明,与直接添加IL-4和IFN-γ的细胞因子质粒组相比,VA5免疫增强剂能够促进SPF鸡外周血淋巴细胞增值,提高CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的比例,并诱导IL-4和IFN-γ细胞因子分泌。     

归淫屏风散对雏鸡免疫功能和生长性能的影响

在雏鸡饲料中添加归淫屏风散,通过检测多项免疫学指标,探讨了归淫屏风散对雏鸡免疫功能的影响。结果表明,饲料中添加归淫屏风散后雏鸡的日增重、免疫指数与对照组相比有明显提高;血清中免疫球蛋白(Ig G、Ig M)水平、细胞因子(IL-2和IFN-γ)含量均比对照组明显增加。表明归淫屏风散在一定程度上可以改善雏鸡的生产性能,提高机体的免疫力。     

马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒免疫效果分析

为了探究马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒的免疫效果。设计合成完整的抗原表位串联体B;以小鼠脾脏总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增出小鼠C3d基因;以EHV-1基因组为模板扩增出gB基因;构建重组质粒B-pVAX1、gB-pVAX1、C3d-pVAX1、B-C3d-pVAX1和gB-C3d-pVAX1;转染BHK-21细胞后能正常表达;将重组质粒免疫BALB/c雄性小鼠。结果表明:B-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P0.01);B-C3dpVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于B-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P0.01);gB-C3d-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P0.01);重组表位串联体B能够增强小鼠体液免疫和细胞免疫,同时C3d作为分子佐剂具有增强免疫的作用。     

富硒女贞子水提物、粗多糖对小鼠免疫的影响

将100只小鼠随机分为5组(雌雄各半),在第1~5天、第8~12天给药组予以相应药物灌服,对照组给予生理盐水,第3、10天用鸡卵清蛋白给小鼠注射免疫,第24天检测相应抗体生成水平和血清中IFN-γ、IL-2、IL-4水平,探讨富硒女贞子水提物、粗多糖对小鼠免疫的影响。结果表明:各给药组的IFN-γ、IL-2、IL-4生成水平均高于对照组,其中组Ⅲ显著高于组Ⅰ、组Ⅱ(P0.05);组Ⅳ公鼠的IFN-γ水平显著高于组Ⅴ(P0.05);与组Ⅰ相比,各给药组卵清蛋白抗体生成水平差异不显著(P0.05)。证明富硒女贞子粗多糖、普通女贞子水提物对小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4的生成有明显促进作用,对小鼠的特异性体液免疫作用不明显。     

牡丹籽油对小鼠免疫功能的影响

为研究牡丹籽油对小鼠免疫功能的影响,以21日龄ICR清洁级雄性小鼠为研究对象,连续灌胃不同剂量的牡丹籽油及牡丹籽油复合物20 d,测定并分析血清NO、NOS,脾脏IL-2、IL-6、TNF-α和肠粘膜组织s Ig A的变化。结果表明:与对照相比,牡丹籽油能显著提高小鼠血清NO水平和脾脏IL-2水平,显著降低脾脏TNF-α水平,并能显著提高肠道粘膜s Ig A水平,说明牡丹籽油能提高动物机体的免疫机能。     

蒙药成份复方对乳腺炎模型小鼠免疫功能的影响

为探讨蒙药成份复方对乳腺炎模型小鼠免疫功能的影响,96只产后3~5d泌乳期母鼠被随机分为4组(n=24),灌药3d后,于第4d的末次灌药后1h复制小鼠乳腺炎病理模型,继续用药治疗3d。并于复制模型前0、48和72h用碳廓血清法测巨噬细胞吞噬活力;MTT法测自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK cell)活性;脱臼处死小鼠称胸腺和脾脏湿重并计算小鼠免疫脏器指数;ELISA法测小鼠血清中白介素-4(IL-4)、干扰素(IFN-γ)含量。结果表明蒙药成份复方可以显著提高小鼠免疫脏器指数、促进单核巨噬细胞吞噬能力和NK细胞杀伤活性、下调IL-4含量、上调IFN-γ的含量。由此可见,蒙药成份复方可以提高乳腺炎模型小鼠非特异性免疫及特异性免疫功能。     

兔出血症病毒在小鼠体内分布及免疫试验

应用纯化兔出血症病毒(RHDV)接种小鼠3d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR,进行体内分布检测;同时将小鼠接种3次后10 d,分离脾淋巴细胞进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测.电镜观察未见到病毒粒子;HA检测结果为肝脏的HA价最高,肺脏最低;RT-PCR未检测到目的基因;WST检测结果表明,免疫组刺激指数高于对照组;免疫组的IFN-γ和IL-2检测指数高对照组;IL-4检测结果低于对照组.RHDV接种小鼠分离的肝脏具有血凝性,能产生良好的细胞免疫反应.     

黄果槲寄生果实多糖对环磷酰胺诱导免疫低下小鼠免疫功能影响

【目的】用腹腔注射环磷酰胺(CTX)成功建立免疫低下小鼠动物模型,以黄果槲寄生果实多糖(Viscum coloratum(Kom.)Nakai f.lutescens kitag polysaccharide,VCP)为材料,研究多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响.【方法】将建模成功的小鼠随机分为免疫低下模型组、VCP高、中、低剂量处理组,以生理盐水为对照组.连续灌胃给药4周,研究不同剂量的VCP对免疫低下小鼠的胸腺指数、脾脏指数和炭廓清指数、小鼠免疫脏器指数和脾脏淋巴细胞活性、以及肝组织GSH-Px活力和血清中IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平、MDA含量及SOD活力等指标的影响.【结果】VCP高剂量能显著提高模型小鼠脾脏指数、脾淋巴细胞增殖作用、廓清指数、吞噬指数、半数溶血值及足趾厚度差;VCP低、中、高剂量促使IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平、GSH-Px活力和SOD活力明显提高,MDA含量明显降低.【结论】黄果槲寄生果实多糖对CTX致免疫低下小鼠的免疫功能具有增强作用,同时可以提高机体抗氧化能力和延缓衰老的作用.     

浮床栽培鱼腥草对吉富罗非鱼胆汁液中八种免疫因子的影响

为研究浮床栽培鱼腥草(0、5%、10%和15%种植面积)对吉富罗非鱼胆汁液中免疫因子的影响,测定了金属硫蛋白(Metallothionein,MT)、免疫球蛋白(Immunoglobulin M,Ig M)、转铁蛋白(Transferrin,TRF)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)等指标。结果表明,不同鱼腥草种植面积能造成吉富罗非鱼胆汁液中Ig M、TRF、TNF-α、EGF含量的升高,且5%鱼腥草处理组还能造成吉富罗非鱼胆汁液中MT、IFN-γ、IL-8和IL-10含量的升高。5%鱼腥草处理组能显著增强吉富罗非鱼胆汁液中所测八种免疫因子的活性。     

响应曲面法制备甘草次酸脂质体工艺优化

为采用薄膜分散法制备甘草次酸脂质体,在单因素试验的基础上,采用响应曲面法研究了大豆磷脂与甘草次酸质量比(脂药比)、大豆磷脂与胆固醇质量比(膜材比)和水浴温度3个因素对脂质体包封率的影响。经过Design-Expert 7.0软件分析数据,得到脂质体的最佳制备条件:脂药比为9∶1,膜材比为2.5∶1,水浴温度为31℃。在最佳制备条件下进行验证试验,包封率实测值为(83.46±0.55)%,与包封率预测值相比,相对误差仅为0.47%。结论:Box-Behnken Design结合响应曲面分析法可以很好地对甘草次酸脂质体工艺进行优化。     

IFN-γ、IL-4、IL-17在小鼠哮喘模型不同阶段的变化及其意义

目的研究小鼠支气管哮喘模型不同时间段IFN-γ、IL-4、IL-17浓度的变化,探讨其在哮喘发病机制中的作用。方法卵白蛋白(OVA)致敏建立小鼠哮喘模型,BALB/c小鼠40只,随机分为3组:正常对照组8只,模型对照组8只,哮喘模型组24只。哮喘模型组分别在雾化攻击6d、10d及14d(分别称为哮喘6d、10d、14d组)后随机选取8只小鼠处理,取各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清,测定IFN-γ、IL-4、IL-17的浓度。结果①.与健康对照组相比,哮喘模型组(包括6d、10d、14d)BALF及血清中的IL-4和IL-17水平升高,而IFN-γ水平则降低,差异具有统计学意义(P<0.05);②.BALF中14d哮喘组各细胞因子水平与6d哮喘组比较,差异也具有统计学意义(P<0.05),但10d哮喘组和6d哮喘组间无明显差异(P>0.05);③.不同时间段哮喘模型血清中细胞因子水平没有差异(P>0.05)。结论 IFN-γ、IL-4、IL-17在哮喘模型不同发病阶段水平会发生变化,因此这些细胞因子在哮喘的发生发展中可能发挥了一定的作用。     

萨福克羊发育过程中外周血IFN-γ、IgG和IL-2质量浓度的变化

为分析萨福克羊生长发育中部分免疫分子的分泌特点,探讨萨福克羊的免疫学特征。以萨福克羔羊为研究对象,应用ELISA方法检测全年12个月和全天24h绵羊外周血中γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白G(IgG)和白细胞介素-2(IL-2)的质量浓度,分析其年周期和昼夜节律变化。结果表明,从初生到周岁的17个时间点,萨福克羔羊外周血中IFN-γ质量浓度变化不显著(P0.05);羔羊吮吸初乳以后外周血中IgG和IL-2质量浓度迅速升高;IgG质量浓度在羔羊吮吸初乳以后显著高于2月龄、3月龄、4月龄、5月龄、6月龄、8月龄、10月龄、11月龄和12月龄(P0.05);IL-2质量浓度在7月龄显著高于羔羊初生未吮吸初乳、7日龄、1月龄、2月龄、3月龄、4月龄、5月龄和12月龄(P0.05);全年羔羊外周血中IgG和IL-2质量浓度变化趋势一致。在6月龄羔羊全天4个时间点,其外周血IgG、IFN-γ和IL-2的质量浓度变化均不显著(P0.05)。说明,初乳能显著提高羔羊的免疫水平,季节转换影响羔羊免疫分子的分泌,萨福克羊免疫分子的分泌具有年周期和昼夜节律变化特征。     

BCG免疫对小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关细胞因子表达的影响

为深入了解卡介苗诱导机体产生免疫效应的分子机制,对卡介苗(Bacillus calmettee-guerin,BCG)免疫后小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关细胞因子表达变化及相关性进行了研究。利用BCG免疫C57BL/6小鼠,采集不同时间点的外周血和脾脏样本。应用间接ELISA方法检测血清中特异性抗体效价,实时荧光定量PCR方法检测脾脏中免疫相关细胞因子表达水平。结果表明:在BCG接种的后期,血清中抗体效价呈极显著的上升趋势(P0.01);脾脏中Th1型细胞因子白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)、γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)的表达水平与对照组相比呈显著性上升(P0.05),但Th2型细胞因子白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的表达水平则明显下降(P0.05)。这说明BCG免疫后,机体会同时产生细胞免疫应答和体液免疫应答,但免疫后期Th1型细胞因子与体液免疫效应呈正相关,某些Th2型细胞因子则与体液免疫效应呈负相关性。     

青蒿多糖对小鼠血清中IL-1β,IL-2,IL-6,IFN-γ水平的影响

为观察青蒿多糖(Herba Artemisiae Annuae polysaccharides,HAAP)对小鼠免疫功能的影响,采用木瓜蛋白酶法提取青蒿多糖,将50只昆明种小鼠随机分成5组进行试验.第Ⅰ组为对照组,腹腔注射生理盐水;第Ⅱ组到第Ⅴ组为青蒿多糖组,分别按25,50,100,150mg/kg剂量腹腔注射青蒿多糖,连续给药7d.分离血清测定IL-1β,IL-2,IL-6,IFN-γ质量浓度.结果显示50 mg/kg青蒿多糖能提高血清中IL-1β,IL-2和IFN-γ质量浓度(p0.01);25mg/kg青蒿多糖也能提高血清中IL-6和IFN-γ质量浓度(p0.01);100mg/kg青蒿多糖对IL-2有升高作用,对IL-6和IFN-γ有降低作用(p0.01).结果表明青蒿多糖对小鼠血清中这4种细胞因子有调节作用.提示适当质量浓度的青蒿多糖可能对Th1/Th2的平衡有调节作用.     

精胺对鹅免疫器官指数及免疫相关因子基因表达的影响

为研究精胺对鹅免疫器官指数及免疫相关因子基因表达的影响,用5和10 mg/kg精胺灌喂成年四川白鹅雌鹅,测定其肝指数、胸腺指数、脾指数和法氏囊指数,检测在各免疫器官组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ基因表达量和多胺含量;对照组灌喂禽用生理盐水。结果表明:10 mg/kg精胺灌喂组的鹅肝指数显著低于对照组(P0.05);5 mg/kg精胺灌喂组的鹅胸腺和法氏囊中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ表达量均显著低于对照组(P0.05);10 mg/kg精胺灌喂组的鹅法氏囊中TNF-α和IFN-γ及肝中IFN-γ表达量均显著低于对照组(P0.05);外源性精胺显著下调脾中IFN-γ表达量(P0.05);精胺灌喂组的鹅肝内精胺含量显著高于对照组(P0.05)。说明精胺可通过介导鹅免疫相关因子基因表达来参与调控鹅免疫功能,并且存在剂量依赖性和组织特异性。     

副猪嗜血杆菌国内流行血清型对小鼠外周血淋巴细胞·细胞因子及免疫球蛋白水平的影响

[目的]比较副猪嗜血杆菌国内流行血清型菌株感染后小鼠外周血淋巴细胞、血清细胞因子及免疫球蛋白水平的变化情况。[方法]将72只小鼠分为4组,分别腹腔注射副猪嗜血杆菌血清型4、5和12菌株,检测3 d、7 d和15 d各组外周血T、B淋巴细胞及血清细胞因子和Ig水平。[结果]副猪嗜血杆菌感染小鼠3 d,T、B淋巴细胞数量明显高于对照组,而随着感染时间的延长而逐渐下降。Ig G、IFN-γ和IL-10水平随感染时间的延长而逐渐增高,而Ig A、Ig M和Ig E水平逐渐降低。感染3 d,Th1/Th2比值稍有下降,而Th1/Th2比值随着感染时间的延长而逐渐升高,明显高于对照组。不同血清型感染在各时间点之间T、B淋巴细胞、Ig A、Ig M、Ig E、IFN-γ、IL-10和Th1/Th2差异均无统计学意义,而血清型4和5感染组小鼠血清Ig G均明显高于血清型12组。[结论]除Ig G以外,副猪嗜血杆菌国内流行血清型4、5和12菌株感染小鼠后外周血淋巴细胞、血清细胞因子及Ig水平无明显差异。