抗菌肽CEMA的改造与人工合成

抗菌肽是一类广泛存在的小分子抗菌多肽物质.从目前所鉴定的抗菌肽来看,大多在体外有很强的抑菌作用,部分在体内也有很好的抑菌效果.CEMA是一种有抑菌活性的阳离子抗菌多肽,但由于对植物细胞的毒害作用,其在植物抗病基因工程中的应用受到很大的限制.为了在不降低其强抑菌活性的同时,降低对植物细胞的毒害作用,对CEMA进行了改造.编码小分子量蛋白的基因的获得,大多采用人工合成的方法.合成两条长链部分互补引物,经Klenow酶延伸补平是获得目的基因的重要方法之一.该文介绍了一种在此方法基础上的PCR扩增技术,并对两种方法进行了比较.     

家蚕抗菌肽的诱导及其抑菌作用研究

家蚕抗菌肽是存在于家蚕及蚕蛹的血淋巴内具有抗菌活性的多肽物质,在家蚕的天然免疫中起到至关重要的作用。采用不同剂量的γ-射线照射家蚕、对家蚕进行饥饿、电击和注射大肠杆菌等诱导处理后,提取家蚕抗菌肽,测定其抑菌效果。结果表明：以上的处理均能有效诱导抗菌物质的产生,其中饥饿法处理的家蚕产生抗菌肽的抑菌活性最强。本试验利用家蚕生产抗菌肽为家蚕的综合利用提供了一种新的途径。     

仙人掌抗菌肽的筛选、分离纯化及性质研究

目的:研究仙人掌植物是否具有起抑菌作用的抗菌肽,并对其进行分离纯化和部分性质研究。方法:采用梯度盐析的方法提取6种仙人掌不同饱和梯度硫酸铵沉淀的蛋白质组分进行抑菌性试验,筛选蛋白质组分具有抗菌效果的仙人掌品种。用Sephadex G-75和Sephadex G-25柱层析对抗菌效果最为显著的蛋白质组分进一步分离纯化,并对纯化到的具有抗菌活性的多肽物质进行分子量、理化性质和抗菌活性检测。结果:发现4种仙人掌中存在对金黄色葡萄球菌有抗菌作用的小分子量蛋白质成分。其中金手球所含蛋白质组分的抗菌效果最为显著,并从中分离纯化得到具有抗菌活性的多肽物质,命名为MH-AMP-1。MH-AMP-1的分子量(Mr)约为8511 Da,在pH 2.5~7.5的乙酸铵缓冲液中抗菌活性强,且具有一定的热稳定性,对检测的病原菌具有广谱抗菌活性。     

黄粉虫抗菌肽的生物学性质及初步分离纯化

［目的］探索黄粉虫抗菌肽的生物学性质。［方法］通过菌液注射对黄粉虫幼虫进行抗菌肽的诱导,对其热敏感性、反复冻融的稳定性、抑菌活性的适宜pH值及部分抑菌谱进行测定,并对黄粉虫血淋巴抗菌肽进行了初步的分离纯化。［结果］黄粉虫抗菌肽热稳定性好,反复冻融对其活性影响不大,显示出一定的抗酸碱性能,在pH为5时抑菌效果最佳,对测试的6种动物病原细菌均有不同程度的抑制作用,特别是对猪致病性大肠杆菌和猪链球菌,具有较强的抑菌活性。经SephadexG-25凝胶过滤柱层析分离得到3个活性峰,表明黄粉幼虫血淋巴中有多个抗菌活性组分。［结论］该研究为黄粉虫抗菌肽的利用奠定了理论基础。     

抗菌肽抗细菌机理研究进展

抗菌肽是一类有望解决全球范围内抗生素耐药性问题的新型抑菌多肽。抗菌肽主要有3种抑菌机制:其一是针对细菌细胞膜作用,膜作用主要针对两种不同菌膜结构特性的细菌,革兰氏阴性菌外膜富含脂多糖,革兰氏阳性菌细胞壁富含磷壁酸,抗菌肽可靶向作用于此类细菌菌膜结构特定组分。此外,抗菌肽可抑制细菌生物被膜形成,分解已形成细菌生物被膜。抗菌肽作用于特异性酶或靶向作用于DNA产生抑菌效果,其抑制作用可抵抗细菌耐药性产生。基于抗菌肽改变菌膜结构并抑制细菌外膜及酶合成的特性,此杀菌策略已应用于抗菌药物设计。     

贻贝抗菌肽的分离纯化

[目的]从贻贝中提取具有抗菌作用的多肽。[方法]以紫贻贝为原料,采用0.5%的乙酸直接提取方式提取抗菌肽,再经过Sephacryl S-100聚丙烯酰胺凝胶色谱进行纯化,收集各馏分并用滤纸片扩散法测定其抗菌活性及对各种细菌的最低抑菌浓度,使用SDS-PAGE测定抗菌肽的分子质量,测定其在100℃条件下不同处理时间和不同pH条件下抗菌活性的变化。[结果]使用0.5%的乙酸作为提取液粗提取抗菌肽具有较高的提取效率,使用Sephacryl S-100纯化抗菌肽,可将抗菌肽纯化为单一物质。分离纯化出的贻贝抗菌肽具有较强的抗菌性,分子质量为5 908,且具有耐高温、耐酸碱的性质。[结论]该研究为抗菌肽的大规模生产奠定了基础。     

牛乳铁蛋白多肽的合成及抗菌活性试验

用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽LfcinB基因片段.合成片段与酵母表达载体DPICZα A重组,构建胞外分泌表达载体pPICZα A-LfcinB,通过限制性内切酶Sac Ⅰ酶切线性化,电击法转化毕赤酵母X-33宿主菌,Zeocin抗性筛选,经PCR检测LfcinB基因与毕赤酵母染色体稳定整合.阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinB,诱导表达6 d,每24 h取上清1 mL,进行抑菌试验.结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽基因已整合剑酵母细胞基因组中并获得表达,经0.5%甲醇在30℃诱导48 h可产生较高抗菌活性的抗菌肽,表达产物具有较强杀菌作用.     

鹿白细胞中抗菌肽的提取及抗菌活性鉴定

应用NH4Cl裂解、超声波破碎、离子交换层析和蛋白质电泳等方法,对鹿白细胞中的抗菌肽成分进行了初步提取和分析,经平板抑菌试验初步检测了提取物的抗菌活性后,采用微量反应板法进行了最小抑菌浓度（MIC）测定.结果表明,在鹿白细胞颗粒中存在着天然抗微生物活性物质,其主要活性成分为多肽部分;MIC试验显示,该提取物对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌均具有抑制活性.     

茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性及其对冷却肉保鲜的影响

为了制备茶叶抗菌肽粗提物并将其应用在冷却肉保鲜上,以龙井茶叶为材料提取茶叶抗菌肽粗提物,采用平板抑菌法检测茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性,通过细胞膜渗透率、磷离子泄漏、DNA结合和透射电子显微镜等指标分析茶叶抗菌肽粗提物对细菌的作用机制,通过微生物菌落数量和pH值两个指标评价茶叶抗菌肽粗提物对冷却肉的防腐保鲜效果。结果表明:提取的茶叶抗菌肽粗提物主要包括分子量小于18.4 ku的多肽,其对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均具有抑菌活性,可造成细菌细胞膜渗透率增强,引起细菌细胞外磷离子浓度增加,造成细菌细胞膜不完整、出现破损,但不与细菌基因组DNA结合。茶叶抗菌肽粗提物可以显著抑制冷却肉中微生物的生长,延缓pH值上升,延长保鲜时间,对冷却肉具有防腐保鲜作用,具有较高的开发利用价值。     

6×His-tag在抗菌肽表达纯化中的应用及其对抗菌肽活性的影响

为方便抗菌肽的体外表达和纯化,以蝎子防御素为对象,在其编码基因末端加入6×His-tag,在酵母表达系统中表达,获得有活性的防御素Sd和融合蛋白Sd-His。进一步纯化、体外抑菌活性及热酸稳定性等试验发现,6×His-tag不但没有降低防御素的抑菌活性,反而有稍微的增强趋势。结果表明,6×His-tag可用于抗菌肽的融合表达且不影响其活性,为抗菌肽的表达纯化提供了一个更简便有效的方法。     

抗菌肽作用机制及其在畜禽养殖中应用

抗菌肽又称宿主防御肽,是一种具有广谱抗菌活性小肽类物质,是生物先天免疫系统的重要组成部分。抗菌肽具有抗细菌,抗真菌、抗寄生虫、抗病毒、抗癌细胞和免疫调节等功能,与抗生素作用机制不同,不易产生耐药性,有望成为抗生素替代品,在畜禽生产中应用广泛。文章综述抗菌肽作用机制及其在畜牧养殖中的应用,初步探讨抗菌肽作为抗生素替代物的应用前景。     

Genetic and crystallographic studies of the 3',5'-exonucleolytic site of DNA polymerase I

Site-directed mutagenesis of the large fragment of DNA polymerase I (Klenow fragment) yielded two mutant proteins lacking 3',5'-exonuclease activity but having normal polymerase activity. Crystallographic analysis of the mutant proteins showed that neither had any alteration in protein structure other than the expected changes at the mutation sites. These results confirmed the presumed location of the exonuclease active site on the small domain of Klenow fragment and its physical separation from the polymerase active site. An anomalous scattering difference Fourier of a complex of the wild-type enzyme with divalent manganese ion and deoxythymidine monophosphate showed that the exonuclease active site has binding sites for two divalent metal ions. The properties of the mutant proteins suggest that one metal ion plays a role in substrate binding while the other is involved in catalysis of the exonuclease reaction.     

抗菌肽的结构与功能研究

抗菌肽是一种具有抗菌、抗病毒的天然活性物质。在基础理论研究领域,抗菌肽是研究生物大分子结构的重要材料。同时,其独特的生物抗菌活性又在医药工业具有广阔的应用前景。抗菌肽的结构组成与其生物活性密切相关。以3类典型抗菌肽为例,阐述多肽结构对于生理功能的重要性,以展示抗菌肽重要的理论及应用价值。     

不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽提取物对26种病原菌抑菌活性分析

[目的]探索经不同菌源诱导黄粉虫所产生的免疫物质——抗菌肽对病原菌是否存在活性差异。[方法]对饥饿后黄粉虫幼虫通过饲细菌、针刺饲真菌（放线菌）法产生诱导免疫反应,研磨、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对26种病原菌抑菌活性,利用三等分法划分四种类型评价抑菌活性及抑菌谱。[结果]经不同菌源诱导黄粉虫所产生的抗菌肽抑菌活性及抑菌谱上均存在明显差异。[结论]生防菌源在诱导昆虫体液免疫物质——抗菌肽表达上具有明显优势。     

不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽提取物对26种病原菌抑菌活性分析(英文)

[目的]探索经不同菌源诱导黄粉虫所产生的免疫物质——抗菌肽对病原菌是否存在活性差异。[方法]对饥饿后黄粉虫幼虫通过饲细菌、针刺饲真菌(放线菌)法产生诱导免疫反应,研磨、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对26种病原菌抑菌活性,利用三等分法划分四种类型评价抑菌活性及抑菌谱。[结果]经不同菌源诱导黄粉虫所产生的抗菌肽抑菌活性及抑菌谱上均存在明显差异。[结论]生防菌源在诱导昆虫体液免疫物质——抗菌肽表达上具有明显优势。     

抗菌肽研究及其在植物病害控制中的应用

抗菌肽是在生物体中表现出具有抗菌活性的肽类物质的总称,是生物体先天免疫系统的重要组成部分。大量研究表明抗菌肽在农业、医药和食品等领域具有广阔的应用前景。本文简要介绍抗菌肽的来源、分类和结构特征,着重阐述抗菌肽的作用机理及其在柑橘黄龙病等重要植物病害控制中的应用,展望抗菌肽的应用前景及其存在问题。     

水产动物抗菌肽研究的最新进展

抗菌肽是一类具有抗菌活性的生物短肽,广泛存在于生物界中。作者综述了抗菌肽的几种类型及其作用机理,并重点介绍了水产动物抗菌肽的研究现状,探讨了抗菌肽作为饲料添加剂在水产养殖业的应用前景。