海南菲牛蛭抗凝血酶成分的提取与SDS-PAGE电泳测定

应用凝血酶滴定法,比较不同提取方法的提取效率和不同相对分子质量的超滤膜对菲牛蛭抗凝血酶活性成分的分离作用,并用SDS-PAGE电泳测定分离得到抗凝活性成分的相对分子质量。结果表明:盐提取法更优于水提法、水提醇沉法和丙酮法;用盐提法对菲牛蛭头部提取的抗凝成分活性达1 811.11 U·g~(-1),选择10×10~3和30×10~3的超滤膜进行再次超滤得抗凝成分相对分子质量约为15.96×10~3。     

家蝇蝇蛆耐高温抗氧化多肽的筛选及性质分析

将家蝇(Musca domestica)蝇蛆进行不同高温的水浴处理,测量蝇蛆抗氧化性的变化。结果显示,50℃处理抗氧化活力变化不显著,80、100℃处理短时间内出现显著下降,但残留的抗氧化活力在随后的高温中保持稳定,提示家蝇蝇蛆存在耐高温抗氧化物质。将蝇蛆提取液在100℃处理不同时间以筛选耐高温抗氧化物质,结果表明,经100℃处理5 min筛选到的抗氧化物质在50、80、100℃保温5 h,甚至在120℃超高温条件下保温30 min,其抗氧化活力均保持稳定。SDS-PAGE电泳结合三氯乙酸沉淀反应结果证明,该物质为分子量约为30 ku的多肽。     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳4种染色方法的比较研究

[目的]比较SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中蛋白质的染色方法,建立美洲大蠊抗肿瘤活性部位SDS-PAGE后更为合适的染色方法。[方法]以牛血清白蛋白(BSA)为标准品,采用考马斯亮蓝染色法、氯化钾染色法、钙染色法和银染色法进行比较,在此基础上,将样品美洲大蠊抗肿瘤活性部位进行SDS-PAGE电泳和染色。[结果]结果表明银染法能够准确、快速、简便的对美洲大蠊抗肿瘤活性部位的SDS-PAGE进行染色。[结论]为美洲大蠊药用价值的研究奠定了基础。     

梅花鹿鹿茸总蛋白的提取方法比较

蛋白质提取是进行蛋白组学分析的关键步骤。本试验比较了水溶、盐溶及醇溶3种提取方法对获取梅花鹿鹿茸总蛋白含量及SDS-PAGE电泳分辨率等的区别。结果表明,水溶法提取鹿茸蛋白质最佳,该方法提取的蛋白质含量高、能得到比较好的SDS-PAGE电泳图谱。进而对SDS-PAGE电泳操作步骤进行了探讨,确立了适用于蛋白组学下游技术-双向电泳分析（蛋白质提取、凝胶制备、染色、脱色）的方法。     

侧孢短芽孢杆菌B8抑菌物质的理化性质及其分离纯化

从烟草根际土壤中分离到1株生防细菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)B8,为了将B8应用于植物病害生物防治,对菌株B8产生的抑菌物质粗提物理化性质进行研究,并采用薄层层析、Pharmadex LH-20柱层析和高效液相色谱对抑菌物质进行分离纯化。试验结果表明:侧孢短芽孢杆菌B8抑菌物质粗提物具有较好的热稳定性,可耐受100℃的高温;其p H值适应范围较宽,在p H值4~10时都有较好的活性,在中性条件下活性最强;对紫外光和日光灯照射不敏感,可长时间保存;侧孢短芽孢杆菌B8产生的抑菌物质为蛋白类,经SDS-PAGE电泳确定蛋白分子量约为11.2k Da;质谱分析结果表明纯化蛋白在NCBI蛋白数据库中没有明确的匹配结果,推测此抑菌蛋白可能是在NCBI蛋白数据库中没有登录的1种新物质。     

水蛭及其工人养殖

水蛭及其工人养殖安徽省肥东县杨塘乡黄李村冯文芹水蛙又叫蚂蜡，属环节动物门螺纲动物。明朝李时珍在（本草纲目）中记载，水惟有通经、破瘀、消肿的功效。现代科学已能从水蛙唾液腺中分离并提纯了血液的抗凝物质，称为水怪素。这些抗凝物质在临床上用于溶解血凝块，治疗...     

放大胶在SDS-PAGE电泳检测小麦HMW-GSs中的应用

传统SDS-PAGE电泳是检测小麦高分子量谷蛋白亚基组成的常用方法,但该方法容易将迁移率相近的不同高分子量谷蛋白亚基误认为同一亚基,为此本研究对传统SDS-PAGE电泳体系进行了改良,在原有的基础上增加了放大胶。结果表明,改良SDS-PAGE电泳能够显著拉大不同高分子量谷蛋白亚基条带间的距离,将迁移率相近的不同亚基间的微小差异进行放大,使其分辨率得到明显提高。     

七种水蛭组织细胞可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析

采用垂直平板十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对我国7种常见水蛭的组织细胞可溶性蛋白成分进行电泳图谱特性分析。结果表明,7种水蛭组织细胞中可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱中多数条带相同,但也存在差异。其中日本医蛭(Hirudo nipponia Whitman)蛋白条带最多,达28个,并且吸血蛭类的蛋白条数要明显大于非吸血蛭类,而3种不同地理分布的菲牛蛭(Hirudi-naria manillensis Lesson)间表达蛋白图谱无明显差异。该研究为在分子水平分析我国水蛭不同种类、同种不同地理分布及不同食性间的差异积累了新的生物学数据,对其分类和药材鉴别提供了参考依据。     

水稻HL-CMS中线粒体基因orf216原核表达载体构建及蛋白纯化

将orf216基因克隆到含有组氨酸标签的原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-orf216,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys菌株感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物。通过Ni-NTA亲和层析系统纯化获得高纯度目的蛋白。研究结果表明,成功构建了pET-30a(+)-orf216原核表达载体并转化大肠杆菌。SDS-PAGE和Western Blot结果显示30 ku处有单一条带,确定其能高效表达并且诱导表达产物为ORF216蛋白。同时对利用Ni-NTA层析系统纯化高纯度高含量ORF216融合蛋白的条件进行了优化。     

福州永泰温泉嗜热菌的分离与鉴定

采用全菌体蛋白凝胶电泳(SDS-PAGE)对从福州永泰温泉中分离到的60株嗜热菌进行了预筛选,再通过16S rDNA序列分析鉴定出8株代表菌.结果表明全菌体蛋白SDS-PAGE分析是一种简便、快速的菌株筛选方法.     

Bacillus subtilis Z-3菌株纤溶酶的分离纯化研究

为获取微生物源溶栓药物,从土壤中获得产纤溶酶活性较高的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Z-3。从Z-3菌株的发酵液中提取纤溶酶,利用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和聚丙烯酰凝胶电泳等方法,对纤溶酶进行分离纯化。分离纯化得到1个单一组分(BSFE-1),SDS-PAGE电泳检测为单一条带,BSFE-1表观分子量为48 kDa,等电点为10.5,属丝氨酸蛋白酶类,纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性BSFE-1的比活力为4 494.099 U/mg,BSFE-1在4~50℃和pH 4~11之间活性较稳定。     

双向电泳过程中的常见问题及解决方法

[目的]研究蛋白质组双向电泳中出现的问题及解决方法。[方法]培养野生型K12菌株Escherichia coli MG1655，分离其蛋白质样品并进行SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]双向电泳中存在蛋白质点没有出现或很少，纵纹与横纹现象严重等问题。[结论]该研究为以后开展双向电泳试验打下了基础。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定技术基础。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法改良

[目的]改进聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法。[方法]以2009年在宁夏固原地区采集的马铃薯晚疫病样为试验材料,提取其DNA,PCR扩增,并将其产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]采用12%聚丙烯凝胶电泳检测引物D13、G11,8%聚丙烯凝胶电泳检测引物PI4B、PI63、SSR4,最后采用0.1%硝酸银染色,取得了比较理想的电泳及染色效果。[结论]该研究建立的适用于致病疫霉菌SSR标记的电泳和染色技术方法具有检测灵敏度高、操作简单、获得的条带清晰等特点,是一种行之有效、简便快捷的检测方法。     

小麦Bx7亚基过量表达基因(Bx7OE)分子检测及对小麦品质影响

[目的]明确高分子亚基Bx7OE在6个品种中的分布,研究其对小麦品质影响,帮助品质性状改良。[方法]利用已有Bx7OE特异性标记,对津强1号、辽春10号及其杂交育成的5个品种进行检测,采用SDS-PAGE方法,获得7个品种高分子量亚基分布数据,并进行品质分析。[结果]7个供试品种中,有4个品种扩增出447 bp的片段,分别是津强1号、津强2号、津强5号和津强6号,说明里面含有7OE亚基。SDS-PAGE数据表明,这7个品种亚基组成为在Glu-A1位点除津强1号为2＊亚基外,其余均为1亚基,在Glu-B1和Glu-D1位点均为7＋8亚基和5＋10亚基。通过品质数据分析,Bx7OE亚基对小麦粉质指标有明显的正面影响。[结论]STS标记特异性较好,Bx7OE亚基对改良小麦品质作用较大,可用于中国小麦品质改良。     

喹乙醇人工抗原的合成与鉴定

采用琥珀酸酐法合成喹乙醇半琥珀酸酯(OLA-HS),以质谱法对其进行鉴定;活化酯法合成全抗原OLA-BSA、OLA-OVA,以紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定之;用OLA-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性、特异性。紫外扫描测得OLA-BSA、OLA-OVA中OLA-HS和BSA、OVA的分子结合比分别为17.1∶1和12.4∶1;3号小鼠抗血清的效价最高,对OLA的IC50为58.923 ng/mL,与卡巴氧的交叉反应率为1.841%,与其他药物无交叉反应。通过系列ELISA鉴定,获得高价、敏感、特异的多克隆抗体(pAb),为OLA残留免疫学检测方法的建立奠定基础。     

3种电泳法鉴定玉米种子纯度比较

研究比较了酯酶同工酶电泳法、蛋白质凝胶电泳法、醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳法3种方法在测试定玉米种子纯度方面的敏感性、多态性、准确性研究,认为醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳法较是较理想的玉米种子电泳纯度鉴定方法。     

不结球白菜雌蕊蛋白质双向电泳技术体系的建立

以不结球白菜品种‘矮脚黄’的雌蕊为材料,从蛋白质提取、IEF程序、IPG胶条pH范围和染色方法等方面进行比较,利用Tris-HCl提取方法,使用pH 4～7 IPG胶条和改进的等电聚焦程序,改良银染方法,建立了适用于不结球白菜雌蕊蛋白质的双向电泳技术体系,并使用该体系对开花前2 d的花蕾雌蕊和开花2 d后的雌蕊蛋白质进行比较分析,获得187个差异蛋白点。     

普通小麦高分子量谷蛋白亚基与沉淀值的关系

运用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了２个杂交组合Ｆ３株系和国内１４个普通小麦品种的ＨＭＷ谷蛋白亚基组成、亚基对ＳＤＳ沉淀值的效应、Ｇｌｕ－１品质评分与ＳＤＳ沉淀值的关系。结果表明,不同亚基对ＳＤＳ沉淀值的贡献不同。其中,亚基５＋１０优于２＋１２或４＋１２;１和２,７＋８和７＋９的作用相近。Ｇｌｕ－１品质评分与ＳＤＳ沉淀值极显著正相关