草甘膦人工抗原合成及鼠源多抗血清制备

为检测小分子农药草甘膦(PMG)的残留,本研究合成草甘膦[N-(Phosphonomethyl)glycine PMG]人工抗原,通过免疫制备高敏感性、特异性的鼠源PMG多克隆抗血清;采用EDC法将PMG分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,合成免疫原PMG-BSA和包被原PMG-OVA;经紫外扫描、SDS-PAGE电泳、质谱鉴定后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清;利用间接ELISA法测定多抗血清效价,竞争ELISA测定多抗血清的敏感性和特异性。结果表明,所合成的免疫抗原效果较好,免疫的4只小鼠效价均达1∶104以上,4号小鼠的多抗血清敏感性最高,半数抑制浓度IC50为31.4μg·m L-1,与其他有机磷类农药无交叉反应,具备良好的特异性。本试验成功合成了PMG人工抗原,并制得了敏感性高、特异性好的鼠源多抗血清,为PMG单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

二氟沙星单克隆抗体的研制及其免疫学特性的鉴定

采用改进的碳二亚胺法,将半抗原二氟沙星(DIF)与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,,制备得到二氟沙星全抗原DIF-BSA和DIF-OVA。采用紫外（UV）,凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定; 用BSA-DIF免疫 BALB/C小鼠, 间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备二氟沙星单克隆抗体（DIFmAb）,并对其效价、亲和力和特异性等进行鉴定。结果表明,BSA与DIF偶联成功,分子结合比为1：4.7,筛选出1H10、2F12、4D8共3株敏感特异的杂交瘤细胞, 间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:5.12×102、1：3.2×101、1：2.56×102,腹水效价分别为1：2.56×105、1：1.28×105、1：6.4×104。同种亚型分别为IgG1、IgG1、IgG2a,亲和常数（Ka）分别为2.94×1010 L/moL、1.72×1010 L/moL和1.35×1010 L/moL.亲和力最高的1H10对DIF的IC50为1.64ng/ml,单抗与其他氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应。通过试验获得高效价、敏感、特异的mAb,适用于动物性食品中DIF的残留检测的免疫学试验     

兽用抗菌药盐酸二氟沙星的研究及其残留检测

二氟沙星（Difloxacin）又名双氟哌酸，是抗生素喹诺酮（Quinolone）类化合物第三代产品——动物专用氟喹诺酮类药物之一。最早是由美国Abbott公司于1984年研制而成，盐酸二氟沙星是其盐酸盐。由于本品具有广谱、高效、低毒等特点，现在已进人欧洲大部分国家的兽药市场，我国也于1999年10月批准生产（农牧发[1999]20号）。     

磺胺甲口恶唑人工抗原的制备与鉴定

磺胺甲口恶唑(Sulfamethoxazole,简称SMZ)是一种中效磺胺类药物,其性质稳定、使用方便、价格低廉、具有广谱抗菌作用,在兽药临床中用于呼吸道和泌尿系统疾病的治疗,现多与甲氧苄啶合用,称为复方磺胺甲口恶唑(又名复方新诺明),抗菌作用可增强数倍至数十倍.磺胺甲口恶唑在畜禽疾病的控制和治疗中发挥着重要的作用[1],不合理使用使其残留对食品安全特别是动物源性食品安全和人类身体健康具有潜在危害性.因此,各国对磺胺类药物在动物性食品中的残留都有规定,美国和欧盟国家制定的动物源性食品SMZ最高残留限量为0.1 μg/g[2,3],我国农业部从2005年起,把畜产品中磺胺类药物的残留情况作为继盐酸克伦特罗之后的又一个重点予以监控.     

磺胺喹口恶啉的危害及残留检测

磺胺喹噁啉（sulfaquinoxaline,sQ）作为一种常见的抗球虫药,常与氨丙啉等混合使用,对禽类疾病有很好的疗效,但它有一定毒性,由于养殖场在饲养动物过程中向饲料或动物饮用水中添加SQ,而又未完全遵守国家兽药典规定的投药量、投药期和休药期的规定,导致其在动物源食品中大量残留。人食用这些动物源食品后,可能造成SQ在人体内富集,从而使人发生变态、过敏等反应,严重的还会产生致畸、致癌作用。为此,世界各国均制定了相对严格的兽药残留标准,目前,我国制定的磺胺类药物在动物源性食品中的总残留标准是300μg／L,欧盟、日本、美国等西方发达国家制定的残留标准是100ng／g。     

小麦胚在萌发和春化处理过程中核酸含量和多聚核糖体的形成

在春化处理过程中,小麦胚的核酸代谢已被研究。核酸抗代谢物抑制冬性禾谷类作物的春化作用。过去我们已经指出,在剥离的冬小麦胚中,两部分提取性质有差异的RNA的比例,在春化处理过程中是不同的,尽管RNA的量没发现变化。Shiomi和Hori已经报道,在春化的大麦苗中,RNA和DNA的含量发生变化。这些结果说明,低温处理过程中小麦胚的核酸代谢对春化进程起重要作用。 另一方面,在萌发和春化处理过程中,小麦胚蛋白质的离体合成也被研究,在低温条件下,蛋白质合成下降。此外,在离体系统中,萌发的小麦胚和春化的小麦胚的产物之间也有差异。在小麦胚中,虽然多聚核糖体的快速形成都知发生在萌发初期,但是,在春化处理过程中小麦胚蛋白质合成体系的改变仍待阐明。 本研究在于比较萌发的和低温处理的小麦胚之间不同核酸种类的含量变化和多聚核糖体的形成。低温处理过程中,小麦胚的RNA和DNA含量比萌发期高,而两个时期的RNA/ONA、RNA/DNA和SRNA/总RNA的比率是一致的。在萌发和低温处理过程中,小麦胚的多聚核苷酸含量与曲线图之间的差异已被观察到。     

雏鸡组织滴虫病的诊断与防治

鸡组织滴虫病是由组织滴虫(Histomonas meleagridis)引起的一种急性原虫性传染病,又名传染性盲肠——肝炎或黑头病(Blackhead)。本病易感性强,死亡率较高,对养鸡业的发展有一定的危害。近年来有些国家有本病发生的报道,国内其它省也有此病的发生,但我省尚无报道。1983年6     

二氟沙星残留检测直接竞争ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用抗二氟沙星单克隆抗体（DIFmAb）杂交瘤细胞株建立直接竞争ELISA分析方法,研制出DIF残留快速检测试剂盒（DIF-Kit）并对其性能进行了测定。特异性试验结果表明与达氟沙星的交叉反应率为0.32％,与其它氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应,该方法对DIF的检测限可达到0.1µg/L,半数抑制浓度IC50为2.2µg/L,线性范围0.1～128µg/L, 平均批内和批间变异系数小于<15%。对牛奶、鸡肉分别添加0.4、2.0、10.0、50.0µg/LDIF标准品,平均回收率分别为89.3%和83.9%。DIF-Kit性能稳定,在4℃可保存6个月。DIF-Kit准确度高、重复性好、特异性强,适用于DIF残留快速检测的推广应用。     

多个顺式作用元件调控t-PAcDNA乳腺定位表达

由牛 β-酪蛋白 ( β-Casein)启动子与大鼠乳清酸蛋白 ( WAP)启动子融合及串联构建成 2个组织纤溶酶原激活剂 ( t-PA) c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-βΔWAP-PA和 p SVL-WAPβ-PA。将这 2种表达质粒分别注入怀孕家兔乳腺导管中 ,溶圈试验结果显示 ,2种质粒均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 5天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 70 0 μg/ L和 50 0 μg/ L。本试验为进一步研究 t-PA基因乳腺定位表达调控和建立 t-PA乳腺生物反应器奠定了基础     

串联启动子调控下的t-PAcDNA乳腺定位表达

由牛β-Casein启动子与大鼠WAP启动子串联构建了t-PAcDNA乳腺定位表达载体pSVL-WAPβ-PA，将3种表达载体pSVL-βb-PA,pSVL-WAP-PA及pSVL-WAPβ-PA分别注入怀孕家兔乳腺导管中，溶圈试验结果显示，3种表达载体均能在家兔乳腺中表达，且以分娩后第4d的乳汁中表达水平最高，分别为390，440，450ug.L^-1，本试验为进一步研究t-PA基因乳腺定位表达调控和建立t-PA乳腺生物反应器奠定了基础。