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相似文献
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1.
【目的】探讨小檗碱对玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量及体外受精胚胎发育效果的影响。【方法】体外成熟液和胚胎培养液中添加小檗碱为Ber组,未添加小檗碱为对照组,MII期卵母细胞进行冷冻液处理为冷冻液处理对照组和冷冻液处理+Ber组;采用开放式拉长塑料细管法对卵母细胞玻璃化冷冻与解冻,试验各组别为GV期冷冻组、GV期冷冻+Ber组、MII期冷冻组、MII期冷冻+Ber组。观察卵母细胞体外成熟效果及其体外受精胚胎体外发育效果;观察卵母细胞冷冻化学损伤存活率及其体外受精胚胎发育率;采用尼罗红染色法观察卵母细胞中脂滴含量,观察卵母细胞玻璃化冷冻解冻后存活率及其体外受精胚胎发育率;利用差异染色法和TUNEL法计数囊胚内细胞团和细胞总数以及细胞凋亡数。【结果】Ber组能够极显著促进猪卵母细胞体外成熟,显著降低猪卵母细胞玻璃化冷冻的化学损伤,促进猪卵母细胞冷冻解冻后的细胞存活率,而猪MII期卵母细胞相对于GV期卵母细胞具有很好的冷冻解冻后的存活率;小檗碱能降低猪卵母细胞玻璃化冷冻后的脂滴含量,MⅡ期卵母细胞冷冻前后脂滴含量均低于GV期冷冻前后;小檗碱能够促进猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后的体外成熟,且有利于猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后早期胚胎的发育,相对于冷冻MII期卵母细胞,冷冻GV期卵母细胞具有更好的体外发育效果;小檗碱能够提高猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后体外发育囊胚内细胞团数与细胞总数,降低其细胞凋亡,有利于提高猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后体外受精胚胎发育至囊胚的质量。而GV期相对MII期则冷冻效果更佳。【结论】小檗碱能够通过降低玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量,从而提高其冷冻解冻后体外成熟率和体外受精胚胎发育质量;GV期玻璃化冷冻卵母细胞相对于MII期,在冷冻解冻后其体外受精胚胎发育质量有更好提高。相关机制还有待今后进一步研究。  相似文献   

2.
[目的]改善猪裸卵的体外成熟质量,为建立稳定有效的裸卵培养体系提供科学依据.[方法]以第一极体排出比例、卵母细胞谷胱甘肽含量、亮甲酚蓝阳性率以及早期胚胎发育潜能等为主要衡量指标研究了卵泡壁颗粒细胞共培养对猪裸卵胞质成熟的影响.[结果]体外成熟结果表明,相对于DO组,DO+ MGC组卵母细胞排除第一极体的比例无显著差异,但核成熟的进程得到了改善,更接近于COC组;成熟卵母细胞GSH含量检测结果表明,DO+ MGC组平均每个卵母细胞谷胱甘肽含量(光密度1053.67)与COC组(1426.00)和COC+ CC组(1541.00)差异不显著,但DO组(724.67)显著低于COC组和COC+GC组(P <0.05);G6PDH活性检测结果表明,DO+MGC组BCB阳性卵母细胞比例(88.26%)与COC组(92.75%)以及DO组(82.86%)差异均不显著,但DO组显著低于COC组(P<0.05);成熟卵母细胞孤雌激活后的发育结果表明,DO+ MGC组卵裂率(94.98%)和囊胚率(43.67%)显著高于DO组卵裂率(52.54%)和囊胚率(8.97%),与COC组卵裂率(97.11%)和囊胚率(38.30%)差异不显著(P<0.05);成熟卵母细胞体外受精后的发育结果表明,DO+ MGC组卵裂率(72.65%)与DO组卵裂率(63.59%)无显著差异,但DO+ MGC组囊胚率(17.79%)显著高于DO组(9.88%)(P<0.05).[结论]卵泡壁颗粒细胞共培养可以显著改善裸卵体外成熟的胞质成熟质量并进而提高后续发育潜力.  相似文献   

3.
[目的]探讨多浪羊和卡拉库尔羊卵巢组织中FSHR基因表达变化规律.[方法]采用免疫组织化学SP方法对两种绵羊卵巢组织上FSHR进行定位研究.[结果]FSHR阳性细胞主要表达在颗粒细胞上,在卵母细胞和膜细胞上也有少量表达,两地方品种绵羊卵巢上原始卵泡和闭锁卵泡时期表达差异不显著(P>0.05),而在初级卵泡、次级卵泡时期和成熟卵泡上表达差异显著(P<0.05);对同种绵羊分析时又发现原始卵泡与其他卵泡之间FSHR阳性细胞表达差异显著(P<0.05),成熟卵泡时期阳性细胞表达显著(P<0.05)高于初级和次级卵泡.闭锁卵泡是阳性细胞率与其他各级卵泡差异极显著(P<0.01).[结论]推测出多浪羊对FSH的敏感性高于卡拉库尔羊,表明FSHR含量越高繁殖率越高.FSHR可能也参与其他因子的调控.  相似文献   

4.
以屠宰场绵羊卵巢为材料,采用抽吸法收集小卵泡、中卵泡、大卵泡卵母细胞,研究不同卵泡直径对卵母细胞回收效果、比例分布以及对卵母细胞直径、谷胱甘肽(GSH)含量和体外发育能力的影响。结果表明,3种卵泡卵母细胞比例分布差异极显著(P0.01);3种卵泡卵母细胞的回收率无显著差异(P0.05),但中、大卵泡卵母细胞可用率极显著高于小卵泡卵母细胞(P0.01);小卵泡卵母细胞的直径极显著小于中、大卵泡卵母细胞(P0.01);中、大卵泡卵母细胞成熟培养24 h后GSH含量显著高于小卵泡卵母细胞(P0.05);经孤雌激活体外培养后,中、大卵泡卵母细胞的成熟率分别极显著(P0.01)、显著(P0.05)高于小卵泡卵母细胞,中、大卵泡卵母细胞囊胚率极显著高于小卵泡卵母细胞(P0.01);中卵泡卵母细胞囊胚细胞总数显著高于小卵泡卵母细胞(P0.05),但与大卵泡卵母细胞差异不显著(P0.05)。因此,直径≥2 mm的卵泡的卵母细胞适合体外培养和体外胚胎的生产。  相似文献   

5.
绵羊不同直径卵泡卵母细胞特征及染色体形态分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
[目的]剥离不同直径卵泡卵母细胞,比较卵母细胞成熟前后的特征.[方法]测量绵羊卵巢表面卵泡直径后进行剥离,研究卵泡表面直径与卵泡实际直径之间的关系.按表面直径分组(1.0 mm以下、1.0~2.0mm、2.1~4.0 mm、4.1 mm以上),比较各分组间卵母细胞透明带厚度、卵丘复合体质量、卵母细胞成熟前后的染色体形态变化的差异.[结果]随着卵泡直径的增大,卵泡实际直径差异极显著(P<0.01);各组间透明带厚度差异不显著(P>0 05),但有降低的趋势;卵丘复合体质量分为A级、B级和C级,A级有增加的趋势,B级C级有降低的趋势;卵母细胞成熟后GV/GVBD比率有下降的趋势,MAT -I、NII有增加的趋势.[结论]随着卵泡直径增大,未成熟卵母细胞的质量提高,卵母细胞核成熟比例增加.  相似文献   

6.
水牛卵母细胞体外成熟研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
本试验探讨了激素、卵泡液及颗粒细胞共培养对水牛卵母细胞体外成熟的影响.试验表明,当体外成熟培养液中含有3 μg/ mL FSH时,随着LH添加量的增加,水牛卵母细胞的第一极体排放率和成熟率逐渐提高;添加30 μg/ mL LH水牛卵母细胞的第一极体排放率(26.67 %)和体外成熟率(40.00 %)均显著(P<0.05)提高.在含有激素的成熟培养液中添加10 %的卵泡液,水牛卵母细胞的第一极体排放率(52.33 %)和成熟率(66.28 %)均进一步显著(P<0.05)提高.颗粒细胞单层共培养对水牛卵母细胞的第一极体排放率(49.21 %)和成熟率(65.08 %)有提高,但没有统计学意义.在本试验条件下,综合以上成熟培养条件可获得60.61 %的第一极体率和72.73 %的成熟率.  相似文献   

7.
为了获得G蛋白偶联受体30(GPR30)在小鼠发情周期卵巢中的分布和表达规律,分别运用免疫组织化学SP法和RT-PCR法,对小鼠发情前期、发情期、发情后期和间情期卵巢中GPR30分布及GPR30 mRNA的表达进行研究.结果显示:GPR30免疫反应阳性产物分布于小鼠卵巢各级卵泡的颗粒细胞、卵泡膜细胞、卵母细胞以及黄体细胞和间质细胞的细胞膜和胞浆中,以次级卵泡和成熟卵泡的颗粒细胞中分布最多、着色最深;GPR30的相对表达量在小鼠发情周期卵巢中以间情期最低且极显著低于其他3个时期(P<0.01),发情期最高但与发情前期和发情后期无显著差异(P> 0.05).发情周期卵巢中GPR30 mRNA的表达变化规律与GPR30的表达基本一致,其中发情期最高且极显著高于其他时期(P<0.01),间情期最低且极显著低于其他时期(P<0.01). GPR30在小鼠卵巢中的分布和表达量变化与卵泡发育过程以及发情周期雌激素变化规律基本一致,提示其介导了雌激素对发情周期卵泡发育和卵母细胞成熟的调节.  相似文献   

8.
以mTCM-199添加抗生素为对照组,以分别添加0.5μg/mL川穹嗪(1igustrazine,Lig)和0.1μg/mL小檗碱(berberine,BR)为试验组,初步探讨川芎嗪、小檗碱对猪卵母细胞体外成熟效果的影响,以期提高猪卵母细胞体外成熟率。试验结果表明:以卵丘扩散和第一极体排出率分别作为猪卵母细胞体外成熟的判断标准,Lig组和BR组均显著高于对照组(P〈0.05),Lig组和BR组间无显著差异(P〉O.05)。结论:川芎嗪和小檗碱对猪卵母细胞体外成熟具有一定的促进作用。  相似文献   

9.
猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻后的体外成熟   总被引:3,自引:2,他引:3  
本研究旨在探索建立猪GV(Germinal visiele)期卵母细胞的冷冻保存方法。用抽吸法采集屠宰猪卵巢中直径为2—5mm及〉5mm的卵泡卵母细胞,再用切割法采集直径〈2mm的卵泡卵母细胞。结果表明,切割法所获卵母细胞数及每只卵巢平均采卵数均显著高于抽吸法(P〈0.05);但切割法所获卵母细胞可用率仅为33.8%,显著低于抽吸法67.5%的可用率(P〈0.05)。用抽吸法采集直径为2—5mm的卵泡卵母细胞,进行体外成熟和玻璃化冷冻研究。4组成熟培养结果表明,卵母细胞在添加激素和猪卵泡液(pFF)的成熟培养液中培养24h后转入无激素、无卵泡液的基础培养液中继续培养20h,体外成熟率达78.9%,显著高于另外3组(P〈0.05)。以EFS40作为玻璃化冷冻液,比较细管法和OPS(Open pulled straw)法对猪GV期卵母细胞的冷冻效果,从冻后形态正常率来看,两种方法间无统计学差异(P〉0.05);但OPS法冷冻猪GV期卵母细胞的冻后存活率和体外成熟率均显著高于细管法(P〈0.05)。  相似文献   

10.
[目的]改善猪裸卵的体外成熟质量,为建立稳定有效的裸卵培养体系提供科学依据。[方法]以第一极体排出比例、卵母细胞谷胱甘肽含量、亮甲酚蓝阳性率以及早期胚胎发育潜能等为主要衡量指标研究了卵泡壁颗粒细胞共培养对猪裸卵胞质成熟的影响。[结果]体外成熟结果表明,相对于DO组,DO+MGC组卵母细胞排除第一极体的比例无显著差异,但核成熟的进程得到了改善,更接近于COC组;成熟卵母细胞GSH含量检测结果表明,DO+MGC组平均每个卵母细胞谷胱甘肽含量(光密度1 053.67)与COC组(1 426.00)和COC+GC组(1 541.00)差异不显著,但DO组(724.67)显著低于COC组和COC+GC组(P0.05);G6PDH活性检测结果表明,DO+MGC组BCB阳性卵母细胞比例(88.26%)与COC组(92.75%)以及DO组(82.86%)差异均不显著,但DO组显著低于COC组(P0.05);成熟卵母细胞孤雌激活后的发育结果表明,DO+MGC组卵裂率(94.98%)和囊胚率(43.67%)显著高于DO组卵裂率(52.54%)和囊胚率(8.97%),与COC组卵裂率(97.11%)和囊胚率(38.30%)差异不显著(P0.05);成熟卵母细胞体外受精后的发育结果表明,DO+MGC组卵裂率(72.65%)与DO组卵裂率(63.59%)无显著差异,但DO+MGC组囊胚率(17.79%)显著高于DO组(9.88%)(P0.05)。[结论]卵泡壁颗粒细胞共培养可以显著改善裸卵体外成熟的胞质成熟质量并进而提高后续发育潜力。  相似文献   

11.
在猪输卵管上皮细胞(pOECs)与猪卵巢皮质细胞(pOCCs)共培养体系中进行猪卵子体外成熟(IVM),研究比较了pOECs与pOCCs对猪卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精与胚胎发育的影响。结果显示:pOCCs或pOECs参与猪卵子体外成熟可显著提高卵丘扩散与MⅡ期卵子的比例(P<0.05),然而GV期卵子的比例却没有显著减少(P>0.05);pOCCs组内成熟卵子的GSH含量显著高于其余各组(P<0.05),而GSH在pOECs组与对照组之间差异不显著(P>0.05);尽管pOCCs和pOECs共成熟可显著降低多精入卵的比例(P<0.05),但是受精率与雄原核形成率(MPN)在各组间却无显著差异(P>0.05);pOCCs和pOECs共培养均可以显著提高卵裂率与囊胚发育率(P>0.05),然而囊胚细胞数在处理组与对照组间没有显著性差异(P>0.05)。研究认为,pOCCs与pOECs共培养体系能显著提高猪卵母细胞IVM质量,降低多精入卵的发生,并提高囊胚发育率。  相似文献   

12.
 【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7~12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21 d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21 d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组(90.7%)差异不显著(P>0.05)。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为(41.4±25.8)枚,2-细胞胚胎发育率为17.5%,未能发育至囊胚;处理组移植体有黄体形成,有的卵泡中有扩展的卵丘卵母细胞复合体,平均回收卵母细胞数为(33.4±20.1)枚,其中MⅡ期卵母细胞为(8.5±7.1)枚,GV期、MⅡ期卵母细胞受精后2-细胞胚胎的发育率分别为33.9%和44.3%,囊胚发育率分别为0.48%和6.3%;试验组间回收卵母细胞数差异不显著(P>0.05),2-细胞胚胎发育率、囊胚发育率差异极显著(P<0.01)。试验组卵母细胞2-细胞胚胎发育率显著低于对照组(P<0.01),处理组MⅡ期卵母细胞囊胚发育率与对照组差异不显著(P>0.05)。【结论】外源促性腺激素对雄性小鼠卵巢移植体具有促进卵泡发育、卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,但不增加卵母细胞产量。  相似文献   

13.
外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
 【目的】探索外源褪黑素(melatonin,MT)处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT,观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮(P)、雌激素(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧(ROS)的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近,添加10-11 mol•L-1 MT组的P浓度(2.01±0.33)ng•mL-1显著高于对照组((0.87±0.10)ng•mL-1,P<0.05)。与对照组((67.32±7.30)%)相比,10-9 mol•L-1 MT组卵裂率显著提高((77.81±7.06)%,P<0.05),并能提高囊胚率且囊胚细胞数((29.61±9.55)%,(90.30±28.74)个),显著高于对照组((19.64±9.22)%,(75.07±25.98)个,P<0.05);同时,10-9 mol•L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组,并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异(P>0.05)。【结论】牛卵泡液中存在MT,适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。  相似文献   

14.
Effects of different ages of donors and different conditions of preserving ovaries on porcine oocytes maturation in vitro and efficiency of parthenogenetic activation were studied. The experiments included: 1) effects of different temperatures (22, 30, 37, 38.5and 40℃) of preserving ovaries on porcine oocytes maturation in vitro and developmental potential; 2) effects of periods of preserving ovaries on porcine oocytes maturation in vitro and development in vitro; 3) effects of different ages of donors on porcine oocytes maturation in vitro and developmental potential. The results of the experiment showed:1) There were no statistical differences (p>0.05) of the parthenogenetic cleavage rate (79.64% vs 76.18%) and blastocyst rate (18.11% vs 33.82%) between oocytes from ovaries preserved at 38.5℃ and those preserved at 37℃. When the preserving temperature was increased to 40℃, the cleavage rate (21.68%) and the blastocyst rate (0) were great significantly lower than those at 37℃(p<0.01). The cleavage rate (80.79% vs 76.18%) and blastocyst rate (29.61% vs 33.82%) were not different between 30 and 37℃(p> 0.05). When the preserving temperature was decreased to 22℃, the rate of cleavage was not different,but the rate of blastocyst was significantly lower, compared with that at 37℃; 2) The cleavage and blastocyst rates of the porcine oocytes collected after slaughter 2 or 6h were not different (p>0.05); 3) The cleavage rate of oocytes from gilts and sows after maturation was not different, but the blastocyst rate of the sow group was significantly higher than that of gilt group (p< 0.05). The blastocyst cell number of sows and gilt showed no difference (p>0.05).  相似文献   

15.
[目的]系统比较了在成熟培养液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活胚的发育率和囊胚质量,同时比较了成熟培养液和胚胎培养液添加Leptin对孤雌激活胚发育的影响。[方法]成熟培养液中添加不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目,并且研究了成熟培养液和胚胎培养液单独或联合添加Leptin对猪早期孤雌胚胎发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目。[结果]成熟培养液中添加不同浓度Leptin(0,10,50,100和200 ng/ml),体外成熟44 h,卵母细胞核成熟率统计分析差异不显著(P>0.05);将核成熟卵母细胞进行化学激活,第2天胚胎卵裂率统计分析差异不显著(P>0.05),但100ng/ml组与其他组第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数差异显著(P<0.05);成熟液添加Leptin 100 ng/ml、胚胎培养液添加Leptin 10 ng/ml与其他组第7天的囊胚率及囊胚的内细胞团细胞数差异显著(P<0.05)。[结论]Leptin对卵母细胞成熟和孤雌胚胎发育能力上有相辅相成的作用。  相似文献   

16.
颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
试验系统研究了颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为68.3%、45.6%和6.1%,组间差异显著(P<0.05),卵裂率分别为41.5%、8.1%和0,差异显著(P<0.05)。对照组和15×104个/ml、150×104个/ml颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为65.9%、60.2%和64.6%,无显著差异(P>0.05),但均显著高于1 500×104个/ml(50.0%)和1.5×108个/ml(30.3%)颗粒细胞组(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系统卵母细胞成熟率为75.8%,显著高于150×104个/ml颗粒细胞条件培养液组(63.4%)和M199培养液组(66.7%)(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系卵裂率为50.0%,显著高于150×104个/ml条件培养液组(36.7%)和M199培养液组(38.2%)(P<0.05)。  相似文献   

17.
牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究   总被引:19,自引:0,他引:19  
本研究分析了卵巢不同性周期阶段(卵泡期、黄体期)、外源激素(FSH、LH、雌激素)和不同卵泡液浓度(10%,20%,30%)对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,卵巢的不同性周期阶段对卵母细胞体外成熟的影响不大(639%和587%);成熟培养基中添加FSH(10mg/L),LH(5mg/L)和同时添加LH、雌二醇(1mg/L),可以促进卵母细胞的体外成熟,成熟率分别为630%,640%,691%;卵泡液(10%,20%,30%)代替血清,其成熟率分别为507%,576%,519%,20%bFF效果最好。本研究对精子的两种处理方法进行了比较,发现在相同精子密度条件下(1×106~2×106个/mL),Percol液处理精子的受精率(471%)显著低于上浮法处理精子的受精率(571%)(P<005)。  相似文献   

18.
[目的]改善猪裸卵的体外成熟质量,为建立稳定有效的裸卵培养体系提供科学依据。[方法]以第一极体排出比例、卵母细胞谷胱甘肽含量、亮甲酚蓝阳性率以及早期胚胎发育潜能等为主要衡量指标研究了卵泡壁颗粒细胞共培养对猪裸卵胞质成熟的影响。[结果]体外成熟结果表明,相对于DO组,DO+MGC组卵母细胞排除第一极体的比例无显著差异,但核成熟的进程得到了改善,更接近于COC组;成熟卵母细胞GSH含量检测结果表明,DO+MGC组平均每个卵母细胞谷胱甘肽含量(光密度1053.67)与COC组(1426.00)和COC+GC组(1541.00)差异不显著,但DO组(724.67)显著低于COC组和COC+GC组(P<0.05);G6PDH活性检测结果表明,DO+MGC组BCB阳性卵母细胞比例(88.26%)与COC组(92.75%)以及DO组(82.86%)差异均不显著,但DO组显著低于COC组(P<0.05);成熟卵母细胞孤雌激活后的发育结果表明,DO+MGC组卵裂率(94.98%)和囊胚率(43.67%)显著高于DO组卵裂率(52.54%)和囊胚率(8.97%)(P<0.05),与COC组卵裂率(97.11%)和囊胚率(38.30%)差异不显著;成熟卵母细胞体外受精后的发育结果表明,DO+MGC组卵裂率(72.65%)与DO组卵裂率(63.59%)无显著差异,但DO+MGC组囊胚率(17.79%)显著高于DO组(9.88%)(P<0.05)。[结论]卵泡壁颗粒细胞共培养可以显著改善裸卵体外成熟的胞质成熟质量并进而提高后续发育潜力。  相似文献   

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