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建立了环介导等温扩增技术检测副溶血性弧菌的方法。以副溶血性弧菌tlh基因作为靶基因,设计特异性引物,建立了环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并分别采用LAMP检测方法和国家标准方法(GB/T4789.7-2008)对克氏螯虾样品中的副溶血性弧菌进行检测。结果表明,建立的LAMP方法最低检出限为1×101 cfu/mL;对6种细菌共8株菌进行LAMP法扩增,仅3株副溶血性弧菌得到阳性扩增。建立的LAMP检测方法与国家标准检测方法检测结果一致,准确度高。 相似文献
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环介导等温扩增技术(LAMP)是由Notomi等建立的一种核酸扩增技术,该方法最大的优点是能够在63℃ ~65℃的等温条件下扩增特定DNA序列,并在30 ~60 min内可以观察到结果。LAMP已经成功用于许多病毒的检测,在本文中,主要概述与LAMP技术相关的最新发展现状以及国外应用该技术检测动物病毒方面的进展。 相似文献
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[目的]建立快速检测沙门氏菌的环介导等温扩增(LAMP)技术。[方法]以沙门氏菌的特异性基因(invA)序列为靶序列设计引物,并对该序列进行等温扩增;对Mg2+浓度、反应温度和反应时间扩增条件进行优化,并对沙门氏菌进行检测和鉴定。[结果]在Mg2+浓度为2.0mmol/L时,62℃反应40min,扩增可达最佳效果,LAMP法检测的灵敏度为7.8cfu/ml。[结论]建立了快速检测沙门氏菌的LAMP技术,该方法灵敏度高、耗时短、方法简便,便于在基层推广,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。 相似文献
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环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification Method, LAMP)是一门新兴的基因扩增技术,具有操作简单、快速、高特异性、高敏感性、不需要特殊检测设备等特点。随着分子生物学技术的发展,LAMP也得到了长足的发展:多重引物的设计和与ELISA的联合使用使得能够同时检测多种病原以及与实时荧光技术的配合可以实现实时监测反应的过程。LAMP检测技术也已广泛用于临床疾病的诊断、病原微生物,包括流行性细菌或病毒等的定性检测及动物物种和胚胎的性别鉴定,此外它也应用于口蹄疫这种人畜共患的急性传染病的检测中。从简单的LAMP到多重LAMP,再到多重荧光检测以及与其他技术的连用,使得口蹄疫的检测方法不断进步。简述了LAMP的相关原理、发展和应用以及在口蹄疫病毒检测中的应用等研究进展。 相似文献
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《江西农业学报》2022,(6)
环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification Method, LAMP)是一门新兴的基因扩增技术,具有操作简单、快速、高特异性、高敏感性、不需要特殊检测设备等特点。随着分子生物学技术的发展,LAMP也得到了长足的发展:多重引物的设计和与ELISA的联合使用使得能够同时检测多种病原以及与实时荧光技术的配合可以实现实时监测反应的过程。LAMP检测技术也已广泛用于临床疾病的诊断、病原微生物,包括流行性细菌或病毒等的定性检测及动物物种和胚胎的性别鉴定,此外它也应用于口蹄疫这种人畜共患的急性传染病的检测中。从简单的LAMP到多重LAMP,再到多重荧光检测以及与其他技术的连用,使得口蹄疫的检测方法不断进步。简述了LAMP的相关原理、发展和应用以及在口蹄疫病毒检测中的应用等研究进展。 相似文献
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沙门氏菌是世界上最常见的食源性致病菌之一,全球每年沙门氏菌中毒事件居细菌性中毒事件首位。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型的核酸恒温扩增方法。2005年首次报道了采用LAMP技术快速检测沙门氏菌的研究,在随后的十几年中,LAMP技术不断优化完善,并广泛应用于食品沙门氏菌的现场检测。本综述阐述LAMP的技术原理和特点,归纳基于LAMP技术的不同平台在沙门氏菌快速检测中的应用,同时对LAMP技术假阳性率高的问题进行了探讨,并对LAMP技术的发展方向和研究趋势提出了几个设想。 相似文献
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环介导等温扩增(LAMP)技术自 2000 年被发明以来以其快速、灵敏、低耗等特点,引起众多研
究者的关注。该技术在人、动物、植物、环境等相关微生物的检测、监控等领域得到了广泛研究与应用,其检
测灵敏度普遍高于传统 PCR 。但是传统 LAMP 技术对于产物检测存在耗时、易造成污染等问题,以及在野外或
医疗点检测时存在判读不便的弊端。就 LAMP 技术与其他多种产物检测技术结合后的方法如目视 LAMP、实时
LAMP、微流控 LAMP、横向流 LAMP 及电化学 LAMP 进行了总结、举例及讨论。目视 LAMP 具有费用低、适合
多环境下使用的特点;实时 LAMP、微流控及电化学 LAMP法能够有效提高样品检测的准确度,且可减少检测时间;
横向流 LAMP 具有可操作性强、便于判读等特点。根据目前 LAMP 技术的研究进展及各技术优劣势的分析,预
测 LAMP 技术未来发展的方向和重点可能为研发手持便携式检测仪。 相似文献
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摘要:环介导等温扩增(LAMP)技术在2000年被日本学者Notomi 等提出,并用琼脂糖凝胶电泳及SYBR GreenⅠ荧光定量的方法对其产物、扩增灵敏度进行了分析。为了使LAMP终产物检测更加简单、直观、省时,国内外科学家进行了大量的研究,先后提出浊度分析法、HNB指示剂、蜡丸染料等简便易操作的LAMP终产物检测及结果判断方法,目前应用较多的是琼脂糖凝胶电泳、浊度分析法、HNB指示剂法与SYBR GreenⅠ指示剂法。本文就近年来LAMP终产物检测及结果判断进行了综述,汇总了近年来LAMP终产物检测方法,以期为未来LAMP终产物检测方法的发展提供新的思路。 相似文献
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环介导等温扩增技术检测菊花中番茄不孕病毒 总被引:4,自引:2,他引:2
【目的】环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术。本研究拟用该技术建立菊花中番茄不孕病毒(TAV)的检测方法。【方法】设计能识别TAV CP序列6个特定区域的4种LAMP特异引物,对MgCl2、dNTPs、甜菜碱等LAMP反应条件进行优化,利用新建的LAMP法检测TAV,比较LAMP和RT-PCR2种不同方法的检测灵敏度。【结果】建立了检测番茄不孕病毒的LAMP技术;LAMP比RT-PCR具有灵敏度更高、快速、简便等优点。【结论】建立的LAMP技术能快速、准确、简便地检测出菊花中的番茄不孕病毒。 相似文献
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转基因作物外源转基因成分环介导等温扩增技术检测方法的建立及应用 总被引:9,自引:2,他引:7
【目的】建立转基因作物外源转基因成分环介导等温扩增技术检测方法。【方法】以转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对CaMV35S基因的6个区域设计4种特异引物,利用1种链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在65℃保温1 h,通过荧光显色即可完成对转基因作物鉴定工作。同时对7种转基因作物进行LAMP检测。【结果】该LAMP方法通过特异性检测含有CaMV35S启动子的转基因作物,其检测结果的特异性与常规PCR方法结果一致,灵敏度是常规PCR的10倍。【结论】转基因作物LAMP检测方法具有高度的特异性及稳定性,结果可靠,非常适合转基因作物的快速检测,有较好的应用价值。 相似文献
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[目的]建立一种快速、准确的检测瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,为诊断和防治瓜果腐霉菌引起的植物病害提供技术支撑。[方法]通过比较基因组学方法,在瓜果腐霉菌基因组上筛选有序列特异性的基因作为检测的靶标基因,设计LAMP特异性引物,建立一种基于颜色判定的快速、准确的LAMP检测方法,随后对该检测方法的特异性、灵敏度和发病组织实际检测等进行分析评价。[结果]鉴定到1个编码Trypsin蛋白酶的基因是瓜果腐霉菌特异的基因,以该序列作为靶标建立了LAMP检测方法。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为指示剂,在等温条件(64℃)下进行核酸扩增反应60 min,即可通过肉眼直接观察结果,HNB显示天蓝色即为阳性反应;同时,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳验证为梯形条带,也可判定为阳性反应。特异性试验中,建立的LAMP检测方法能将瓜果腐霉菌和其他病原菌区分开。灵敏度试验中,LAMP检测方法的最低检测限为100 pg·μL-1,与Real-time PCR反应灵敏度一样,是普通PCR反应灵敏度的100倍。发病组织实际检测试验中,该LAMP方法能检测出人工接种发病植株中的瓜果腐霉菌。[结论]成功建立了一种适用于基层使用的针对瓜果腐霉菌的快速检测技术,为该菌所致病害的准确诊断奠定了技术基础。 相似文献
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环介导等温扩增技术(LAMP)具备特异性好、灵敏度高、方便快捷的特点,目前已经广泛用于医学诊断、食品安全检测、植物病虫害检测等基因芯片领域。为植物病毒病的早期预防提供技术支撑,介绍了LAMP技术的原理、特性、在植物病毒检测中的应用以及该技术在植物病害检测中的发展前景。 相似文献
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应用环介导等温扩增技术(LAMP)对猪支原体肺炎进行诊断应用研究,对来自黑龙江不同地区的患猪呼吸道疾病的肺脏病料64份进行检测,54份诊断为阳性,阳性率84.3%。健康猪鼻拭子共176份,经LAMP检测,157份为阳性,阳性率为89.2%。其中健康猪拭子带菌率较高,结果表明,LAMP技术可应用于猪支原体肺炎的临床诊断。 相似文献