节杆菌Arthrobacter sp.XW-02酶解产物壳寡糖性质的研究

[目的]研究节杆菌Arthrobacter sp.XW-02发酵酶解产物壳寡糖的生理活性。[方法]采用端基法测定壳寡糖的平均聚合度和分子量,采用分光光度法测定壳寡糖的抑菌活性,采用种子水培法测定壳寡糖的促水稻生长情况。[结果]酶解10、20、30min壳寡糖平均聚合度分别为5.40、2.66和1.70,平均分子量分别为870.16、446.25和292.04;壳寡糖对多种细菌和酵母类真菌有明显的抑制作用,但对水稻纹枯病菌的抑制作用不明显,抑菌效果随着壳寡糖作用浓度的增加而增强;低浓度的酶解产物对水稻幼苗的生长有促进作用,高浓度的酶解产物对水稻幼苗生长有抑制作用,酶解产物浓度和水稻幼苗根的生长相关性不明显。[结论]节杆菌Arthrobacter sp.XW-02发酵酶解产物壳寡糖可以进一步开发为植物生长促进剂和病害生物防治剂。     

酸性纤维素酶对壳聚糖的降解作用研究

为确定特定酸性纤维素酶在降解壳聚糖制备壳寡糖的应用潜力,根据不同作用条件下壳聚糖的水解率,考察该纤维素酶降解壳聚糖的基本条件,具体结果为酶解温度50℃、pH 5.0、酶解时间4 h、纤维素酶用量为0.7 mL。在确定的最佳酶解条件下,考察了酶解过程中壳聚糖溶液粘度的变化,同时通过有机溶剂分级沉淀法,对纤维素酶降解壳聚糖的最终产物进行分析,发现最终产物中聚合度(DP)<8和8相似文献   

酶解法制备壳寡糖的初步研究

[目的]研究制备壳寡糖的方法。[方法]运用基因工程的方法,将人工构建的含有壳聚糖水解酶基因的质粒载体转入大肠杆菌体内并诱导其表达。[结果]可溶的活性壳聚糖酶在大肠杆菌中的表达量高于300mg/L。[结论]该重组壳聚糖酶与天然来源的壳聚糖酶具有完全相同的比活力,能专一性切断β-1,4-糖苷键,将壳聚糖降解为不含单糖的壳寡糖。     

3种常见壳寡糖盐的生物活性比较

【目的】比较壳寡糖乳酸盐(COS-LA)、壳寡糖乙酸盐(COS-HAc)及壳寡糖盐酸盐(COS-HCl)的组分及其体外生物活性,为壳寡糖的产业化开发提供参考。【方法】以壳聚糖为原料,使用不同酸溶解,在相同酶降解条件下分别制备COS-LA、COS-HAc、COS-HCl,采用超高压液相色谱-飞行时间质谱仪(UPLC-Q TOF MS)分析其组分。以小鼠巨噬细胞RAW264.7为例,研究了3种壳寡糖盐及其对应钠盐对免疫细胞的诱导活性及抑制炎症活性;以白色念珠菌为例,研究了3种壳寡糖盐及其对应钠盐的生物被膜破坏活性。【结果】超高压液相色谱-飞行时间质谱仪分析结果表明,同一聚合度的3种壳寡糖盐的相对含量无明显差异。同等质量浓度下,3种壳寡糖盐的体外免疫诱导活性表现为:COS-LACOS-HAcCOS-HCl;抗炎活性表现为:COS-LACOS-HAcCOS-HCl;生物被膜破坏活性表现为:COS-LACOS-HAcCOS-HCl。3种壳寡糖盐对应钠盐的生物活性检测结果与壳寡糖盐结果相似。【结论】盐型对壳寡糖的生物活性有一定的影响,其中以壳寡糖乳酸盐的生物活性最佳。     

微生物壳聚糖酶的研究概况

壳聚糖是自然界中最丰富的多糖之一.壳聚糖酶能够降解壳聚糖生成壳寡糖,壳寡糖具有多种生物学特性,用途广泛.壳聚糖酶主要分布在微生物和一些植物中,理化性质较稳定.根据其底物特异性和断裂键的专一性可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类.根据已测序壳聚糖酶的氨基酸序列相似性,壳聚糖酶分别属于糖苷水解酶46号、75号和80号.目前,只有2种壳聚糖酶的3级结构被测定.     

壳寡糖对高脂血症小鼠降血脂及肝脏保护的作用

通过建立高脂血症小鼠模型来研究壳寡糖对小鼠降血脂及肝脏保护的作用。将昆明种小鼠分为正常组、高脂血症模型组、壳寡糖组和脂必妥对照组,喂养7周后,测定血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇脂(HDL-C)的含量,丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性以及肝脏中丙二醛(MDA)、总巯基(T-SH)、非蛋白结合巯基(NP-SH)和蛋白结合巯基(PB-SH)的含量。结果表明,壳寡糖使高脂血症小鼠血清中TC含量、ALT和AST活性显著降低,HDL-C/TC显著升高,显著提高了肝脏中T-SH的含量,降低了肝脏中的MDA含量。说明壳寡糖具有明显降血脂和保护肝脏的作用。     

盐酸法降解壳聚糖制备特定聚合度壳寡糖（DP=5-7）的研究

将壳聚糖置于不同盐酸浓度的反应体系中进行降解反应,制备得到不同聚合度的壳寡糖混合物;采用凝胶过滤法分离混合物,旨在获得特定聚合度（DP=5-6）的壳寡糖。实验表明：在不同温度（40 ℃、60 ℃、80 ℃）和不同盐酸浓度（6 mol/L、9 mol/L、11 mol/L）下,壳聚糖均能被有效的降解;不同降解液中各种聚合度壳寡糖组成不一;其中,在9 mol/L盐酸和60 ℃的反应条件下,降解液中壳五糖和壳六糖含量最高,达到16.2%。采用以葡聚糖凝胶Sephadex G 15为介质的层析法,实现了对降解液中壳低聚糖混合物的初步分离,获得主要含壳五糖和壳六糖的组分。该组分经高效液相色谱法鉴定,除预期的壳五糖和壳六糖外,还含有另一未知化合物。通过 13C和 1H核磁共振分析,并结合专一性壳聚糖酶的酶解实验,对其进行表征和鉴定,结果表明：该化合物为聚合度为7的壳七糖。     

壳寡糖在传统食品酸菜腌渍过程中的应用

采用复合酶降解法从壳聚糖中制备得到壳寡糖,并对所得壳寡糖进行了时间飞行质谱分析。经分析该壳寡糖聚合度为2~10,但也有少量聚合度为32~70。采用正常腌渍和添加壳寡糖两种方式进行酸菜发酵,并对发酵液的pH、大肠菌群数、乳酸菌数、霉菌和酵母数等指标的变化规律进行研究。结果表明:随着发酵时间的延长,两种发酵液的pH迅速下降并稳定至3.20左右;pH值的下降,抑制了大肠菌群生长,而且有壳寡糖的酸菜发酵液对大肠菌群的抑制作用更加明显;在发酵过程中,乳酸菌的数量逐渐上升,酵母菌的数量在发酵初期增长很快,霉菌的数量则一直较少。感官品质评价结果表明,添加壳寡糖腌渍的酸菜感官质量优于传统腌渍方法得到的酸菜。     

酶法制备壳寡糖工艺优化及抗氧化能力分析

以壳聚糖为制备原料,利用壳聚糖酶水解壳聚糖来制备壳寡糖。通过单因素试验结果分析可以得出反应时间、壳聚糖酶添加量、温度、p H等4个因素对酶解作用的影响。采用正交法设计4因素3水平的试验,将壳寡糖产率作为检测结果,做正交试验分析,优化工艺条件,从正交分析结果得到最佳工艺条件如下:反应时间4h、酶添加量2000U/g、温度35℃、p H5.0。通过验证试验可以得到最佳工艺条件下还原糖浓度最高,即壳寡糖的产率最高,为1.884%。利用壳寡糖对清除羟自由基的能力试验和还原能力试验,验证了壳寡糖具有一定的抵抗人体氧化衰老的能力。     

低聚壳寡糖(DP=6-8)的制备及其体外抗氧化活性研究

壳寡糖是壳聚糖的低分子量降解产物，具有良好的生物安全性、抗菌性、抗氧化性及可降解性。本文采用微波酸水解法降解低分子量壳聚糖，制备聚合度为6～8之间的低聚壳寡糖，并利用红外光谱对其结构进行了表征，用碱量法和端基分析法对其脱乙酰度和数均分子量进行了测定。另外，研究了低聚壳寡糖的抗氧化活性，包括：羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力和DPPH自由基清除能力。研究表明：低聚壳寡糖对超氧阴离子自由基的清除能力很强，可达到77.1%，对羟基自由基和DPPH自由基的清除能力相对较弱，只能达到3.6%和58.9%。     

土壤中产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究

采用透明圈法,通过大量筛选得到9株产壳聚糖酶的野生菌株,对其中产壳聚糖酶酶活最高的菌株BS-0409的菌株形态特征和生理生化特征及16S rDNA序列进行了测定分析,并对该菌的酶解产物壳寡糖进行了抑菌试验。结果表明,该菌株呈短杆状,革兰氏染色阴性,端生鞭毛。经16SrDNA序列分析表明,BS-0409菌株为巨大芽孢杆菌,该菌的酶解产物壳寡糖对17种植物病原真菌都有较强的抑制作用,抑制率为29.6%～100.0%。     

地鳖肽对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

【目的】探明地鳖肽对四氯化碳(CCl_4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。【方法】取60只小鼠分溶剂组、模型组(CCl_4)、地鳖肽组、阳性药物组,灌服不同剂量地鳖肽提取液和生理盐水及保肝药,每天1次连续7d,末次给药2h后除溶剂组小鼠外都腹腔注射0.1%CCl_4,制备血清和肝组织匀浆,ELISA和PCR等方法检测血清中ALT和AST活力,肝组织中SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA含量,组织中TNF-α、IL-6和iNOS含量及mRNA表达;显微镜观察肝组织结构。【结果】与模型组比较,地鳖肽组小鼠血清中ALT和AST活力极明显降低,肝组织中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活力显著提高,但其MDA含量明显降低;肝组织中TNF-α、IL-6和iNOS含量极显著降低及mRNA表达量明显下调;模型组小鼠肝组织结构损伤明显,而地鳖肽组小鼠肝组织结构损伤明显缓解。【结论】地鳖肽对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤有保护作用。     

萱草花对四氯化碳急性肝损伤的保护作用研究

[目的]研究萱草花对急性肝损伤的保护作用.[方法]将54只小鼠完全随机分为6组,随机定义为空白对照组,阳性药物组及萱草花高、中、低预防组;采用微量酶标法测定谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量;用肝脏右叶匀浆后试剂盒检测SOD活性和MDA含量;数据统计处理采用单因素方差分析.[结果]与正常组比较,模型组血清GOT、GPT和肝脏MDA含量较对照组明显升高,肝脏SOD活力较对照组降低;与模型组比较,中药预防给药组和高、中剂量萱草花预防给药组中血清GOT、GPT和肝脏MDA含量较对照组明显降低,肝脏SOD活力较对照组升高;模型组小鼠肝脏出现退行性病变和肝细胞坏死,中药预防组和萱草花预防组均有不同程度的改善.[结论]试验成功复制了小鼠急性肝损伤模型,护肝片和萱草花提取物预防给药对小鼠四氯化碳引起的急性肝损伤具有一定的保护作用.     

猪链球菌2型CVCC606株免疫相关抗原的纯化及其免疫保护研究

以猪链球菌2型CVCC606免疫断乳仔猪制备高免血清,纯化血清IgG,制备亲和层析柱,亲和纯化其免疫相关抗原;SDS-PAGE分析抗原的组成,研究其对猪链球菌2型CVCC606攻击的BALB/c小鼠的免疫保护作用。结果表明:以亲和层析方法纯化获得的免疫相关抗原分子量集中于29.0~97.2 kD,对5倍LD50剂量的猪链球菌CVCC606攻击的BALB/c小鼠的保护率为60%,呈现了部分的保护作用。所获得的免疫相关抗原中含有保护性抗原。     

蝉蜕水提物对小鼠D-氨基半乳糖急性肝损伤的保护作用

探讨不同浓度蝉蜕水提取物对小鼠D-氨基半乳糖(D-GalN)急性肝损伤的保护作用。将60只小鼠随机分为空白对照组、D-GalN模型组(模型组)、联苯双酯滴丸组、蝉蜕水提取物低、中、高3个剂量组,共6组。每组小鼠均按每千克体重剂量灌胃给药,连续给药13 d,末次给药12 h后,按600 mg/kg腹腔注射10%D-GalN诱导急性肝损伤模型。造模24 h后,计算小鼠肝指数,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及心肌组织、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,HE染色观察肝组织病理学变化。结果表明,与空白对照组比较,模型组小鼠肝脏指数及血清ALT、AST活性升高(P0.01),肝脏、心肌组织中SOD活性降低,MDA含量增高(P0.01),肝组织炎症坏死广泛。与模型组比较,蝉蜕水提取物的低、中、高剂量组及联苯双酯组小鼠肝脏指数及血清ALT、AST活性降低(P0.01或P0.05),肝脏、心肌组织中SOD活性升高,MDA含量降低(P0.01或P0.05),肝组织损伤程度显著改善。蝉蜕水提取物对D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。     

壳寡糖对小麦种子萌发及幼苗生长的影响

[目的]研究壳寡糖对小麦（Triticum aestivum）种子萌发及幼苗生长的影响。[方法]利用不同浓度壳寡糖处理小麦种子及幼苗,研究壳寡糖对小麦种子萌发及幼苗生长的影响。[结果]壳寡糖能够有效地提高小麦种子胚乳淀粉酶活力,提高胚根、胚芽的生长速率,促进小麦种子萌发;同时,壳寡糖还可提高小麦幼苗叶片叶绿素含量以及根系活力,促进幼苗生长。其中浓度为0.1μg/m l壳寡糖的促进作用最为明显。[结论]壳寡糖具有促进小麦种子萌发及幼苗生长的作用。该研究可为壳寡糖的应用提供理论支持。     

壳寡糖对玉米种子萌发及幼苗生长的影响

[目的]研究壳寡糖对玉米（Zea mays L.）种子萌发及幼苗生长的影响。[方法]利用不同浓度壳寡糖处理玉米种子及幼苗,研究壳寡糖对玉米种子萌发及幼苗生长的影响。[结果]壳寡糖能够有效地提高玉米种子胚乳淀粉酶活力,提高胚根、胚芽的生长速率,促进玉米种子萌发;同时,壳寡糖还可提高玉米幼苗叶片叶绿素含量以及根系活力,促进幼苗生长。其中,浓度为0.1μg/ml壳寡糖的促进作用最为明显。[结论]壳寡糖具有促进玉米种子萌发及幼苗生长的作用。该研究可为壳寡糖的应用提供理论支持。     

脂肪酶中具有壳聚糖降解活力酶组分的性质研究

[目的]为酶法降解壳聚糖提供科学依据。[方法]从脂肪酶中分离具壳聚糖降解活力的电泳纯酶,研究pH值、温度和金属离子对壳聚糖酶活力的影响,并分析了该酶的pH值稳定性、热稳定性和底物特异性。[结果]该酶降解壳聚糖的最适pH值为4.5,最适温度为60℃。Ni2+、Co2+和Mn2+对酶活具有明显的激活作用,而Fe3+、Pb2+和Hg2+则强烈抑制酶的活力。该酶对脱乙酰度为73%~82%的壳聚糖具有较高的水解活性,而对脱乙酰度为64%和90%的壳聚糖水解活力较低。[结论]该酶在pH值为5~9范围内和60℃以下都具有较好的稳定性。     

壳寡糖在杏鲍菇生产中的应用

对壳寡糖在杏鲍菇(Pleurotus eryngii)液体菌种制备及栽培生长方面的作用进行了研究.结果表明,0.0010 mg/mL壳寡糖能明显缩短杏鲍菇液体菌种的萌发时间并促进其菌丝生长;栽培生产中,0.0010mg/g壳寡糖能明显提高杏鲍菇菌丝纤维素酶活力,缩短了杏鲍菇的菌丝满瓶时间,而0.0100 mg/h壳寡糖对杏鲍菇纤维素酶活力具有明显的抑制作用.由此可见,壳寡糖对杏鲍菇具有明显的生长调节作用.